本申请涉及生物医药领域,更具体地说,它涉及一种多发性骨髓瘤预测模型的建立方法。
背景技术:
1、多发性骨髓瘤是由肿瘤性浆细胞不受控制的增殖引起的无法治愈的造血恶性肿瘤。它是第二常见的血癌,全球每年约有140万新诊断患者。尽管最近在治疗方面取得了进展,但1年生存率仍仅为10%。在多发性骨髓瘤中,一系列复杂的遗传和表观遗传变化导致浆细胞的肿瘤转化,导致其在骨髓内不受控制的生长,并将大量非功能性单克隆抗体(称为副蛋白或m蛋白)分泌到循环中。多发性骨髓瘤的主要临床表现是发生溶骨性骨病变,导致骨痛和骨折、高钙血症、肾功能不全和骨髓衰竭相关。多发性骨髓瘤包括一系列临床变异,从意义不确定的良性单克隆丙种球蛋白病(mgus)和惰性mm(smm)到更具侵袭性的播散性mm和浆细胞白血病。因此,寻求多发性骨髓瘤早期诊断标志物成为科学家们研究的目标。
2、近年来,优化了多种多发性骨髓瘤的诊断标准,若患者符合相应的主要或次要诊断标准,即可确诊为多发性骨髓瘤,诊断过程包括:
3、1.骨髓浆细胞瘤:骨髓穿刺或骨髓活检显示骨髓核形成细胞>10%(或>30%),同时有与多发性骨髓瘤有关的临床表现(如溶骨性损害、贫血、高钙血症等)。
4、2.骨髓增生性异常综合征(mgus):骨髓核形成细胞<10%,蛋白尿轻链比值<200或存在浆细胞肿瘤细胞克隆,无自身免疫性疾病、骨质疾病和肾功能障碍。
5、3.溶骨性损害:存在骨质病变、骨疼痛、溶解性骨髓瘤斑点或x线、ct、mri等影像学检查显示的骨骼病变。
6、4.血象异常:血红蛋白<10g/dl或血钙>2.75mmol/l。
7、5.免疫球蛋白异常:单克隆蛋白合成,可通过蛋白电泳或免疫固定电泳检测到,或24小时尿蛋白轻链>0.5g。
8、6.浆细胞骨髓瘤相关损伤指标:β2微球蛋白升高和/或自由轻链升高。
9、由此可见,多发性骨髓瘤的常见诊断过程包括血液检查、骨髓穿刺和骨骼影像学检查等,这些诊断过程大都操作复杂,流程繁琐。
技术实现思路
1、本申请提供一种多发性骨髓瘤预测模型的建立方法,该方法具有操作简单、重复性高、稳定性佳的优点,通过该方法建立的模型,能够适用于一般检验科,可用于多发性骨髓瘤的诊断,灵敏度高,特异性佳,便于临床推广使用。
2、本申请提供的一种多发性骨髓瘤预测模型的建立方法采用如下的技术方案:
3、一种多发性骨髓瘤预测模型的建立方法,所述方法包括:
4、检测待测血清中的igg n-糖链以获得igg n-糖谱峰图;
5、对待测血清进行iggκ型检测,得到iggκ值;
6、基于igg n-糖谱峰图和iggκ值,建立多发性骨髓瘤预测模型f:f=(p9+iggκ)/p6;其中p6是igg n-糖谱峰图中p6的丰度,p9是igg n-糖谱峰图中p9的丰度;
7、将计算得到的f值与预设的f值进行比对,输出结果。
8、进一步的,所述检测待测血清中的igg n-糖链以获得igg n-糖谱峰图包括:
9、取血清加入igg胶乳微球过夜孵育、离心处理2-5次,加入变性液进行变性处理,冷却后加入pngase f反应液孵育,标记为d溶液;
10、加热d溶液并加入唾液酸酶反应液孵育,标记为de溶液;
11、向de溶液中加入apts标记液,在80-90℃的温度下孵育1-1.4h,冷却至室温后加入双蒸水,标记为l溶液;
12、取l溶液用medcalc v20进行分析,得到igg n-糖谱峰图。
13、进一步的,所述igg胶乳微球经由以下步骤制得:
14、取羧基微球悬浊液经离心、洗涤、声浴,然后加入n-羟基琥珀酰亚胺溶液和失水剂,暗孵15-30min,经重悬、洗涤后加入抗体溶液,振荡、洗涤、重悬得到igg胶乳微球。
15、进一步的,所述pngase f反应液经由以下步骤制得:
16、重组载体转化:将pngase f酶质粒转化进入bl21感受态,然后挑取单克隆菌落;
17、重组蛋白的表达和纯化:转化后,按照1-2%菌液的比例接菌,加入1-2‰的卡那霉素,培养6-7h;当菌落生长状态达到对数生长期,od600 nm值在0.6后,加入iptg,再培养5-6h后,离心收集菌体沉淀,并清洗菌体沉淀;
18、菌体裂解:菌体沉淀经过超声破碎,室温裂解,重悬后,离心收菌取上清;
19、目的蛋白的纯化:取上清,利用镍离子与his标签结合,选择ni-nta预装重力柱进行纯化,得到pngase f反应液。
20、进一步的,所述离心处理的转速为8000-12000rpm,时间为5-15min。
21、进一步的,所述变性液为质量浓度为4-10%的十二烷基硫酸钠溶液。
22、进一步的,所述变性处理包括:在温度为85-95℃的条件下处理3-6min。
23、进一步的,所述iggκ值采用免疫比浊法测定。
24、进一步的,所述多发性骨髓瘤预测模型的计算结果可用于诊断多发性骨髓瘤。
25、进一步的,将所述预设的f值设定为cut-off值,所述cut-off值为0.2035,若计算得到的f值>0.2035,输出结果异常,若计算得到的f值≤0.2035,输出结果正常。
26、综上所述,本申请具有以下有益效果:
27、本申请的模型建立方法操作简单,仅需微量样品,重复性高,基于igg-n糖谱变化和iggκ型检测数值建立了多发性骨髓瘤样本和正常样本具有显著差异的多发性骨髓瘤预测模型,通过计算结果的比对输出结果,过程简单快捷,且具有更高的特异性和灵敏度,在cut-off值选择0.2035时,其灵敏度和特异度分别为100%、95.83%。
1.一种多发性骨髓瘤预测模型的建立方法,其特征在于,所述方法包括:
2.根据权利要求1所述的多发性骨髓瘤预测模型的建立方法,其特征在于:所述检测待测血清中的igg n-糖链以获得igg n-糖谱峰图包括:
3.根据权利要求2所述的多发性骨髓瘤预测模型的建立方法,其特征在于:所述igg胶乳微球经由以下步骤制得:
4.根据权利要求2所述的多发性骨髓瘤预测模型的建立方法,其特征在于:所述pngasef反应液经由以下步骤制得:
5.根据权利要求4所述的多发性骨髓瘤预测模型的建立方法,其特征在于:所述离心处理的转速为8000-12000rpm,时间为5-15min。
6.根据权利要求2所述的多发性骨髓瘤预测模型的建立方法,其特征在于:所述变性液为质量浓度为4-10%的十二烷基硫酸钠溶液。
7.根据权利要求2所述的多发性骨髓瘤预测模型的建立方法,其特征在于:所述变性处理包括:在温度为85-95℃的条件下处理3-6min。
8.根据权利要求1所述的多发性骨髓瘤预测模型的建立方法,其特征在于:所述iggκ值采用免疫比浊法测定。
9.根据权利要求1-8任一项所述的多发性骨髓瘤预测模型的建立方法,其特征在于:所述多发性骨髓瘤预测模型的计算结果可用于诊断多发性骨髓瘤。
10.根据权利要求9所述的多发性骨髓瘤预测模型的建立方法,其特征在于:将所述预设的f值设定为cut-off值,所述cut-off值为0.2035,若计算得到的f值>0.2035,输出结果异常,若计算得到的f值≤0.2035,输出结果正常。