一种紫苏叶表皮毛长度和密度的快速测量方法

本发明属于植物叶片表型观测，具体涉及一种紫苏叶表皮毛长度和密度的快速测量方法。

背景技术：

1、紫苏（perilla frutescens（l.）britt.），属唇形科紫苏属一年生草本植物，据《中国植物志》记载，我国紫苏属植物有1种3变种，即紫苏原变种（包括紫苏和白苏）、回回苏、耳齿紫苏和野生紫苏。紫苏不仅是传统的中草药、香料和蔬菜，而且是具有极高经济价值的油料植物。紫苏叶片形状各异，其叶表皮毛的长度和密度也存在极大的差异。

2、叶表皮毛是植物叶面表皮的衍生结构，主要功能是增加表皮层厚度，调节热量和水分的散失，有些表皮毛通过分泌驱逐剂、生物碱或有毒物质来防御生物侵害，保护植物免受昆虫和病原体的侵害及一些机械损伤，从而达到保护叶片的作用。紫苏叶表皮毛通过适应各地区生态气候环境，在长期进化中，形成了各自独特的表型特征，通过对紫苏叶表皮毛的长度和密度的观测，有利于我们更全面的认识紫苏叶片的表型和功能差异，从而为紫苏种质分类、叶片功能等的研究拓宽途径。

3、紫苏叶表皮毛为柔毛，纤细，长短不一，在试验记载中长度即为长、中、短、或无，密度记录为稀疏、中等、密集，如何将微观的叶表皮毛的长度和密度数量化，更详细的记录紫苏叶片间的差异特征，对于完善紫苏种质特征信息是有效的补充。由于紫苏叶表皮毛的分布与叶表面垂直，直接应用解剖镜、显微镜观察往往难以准确测量其长度和估算密度，电镜观察设备要求高，一般实验室很难达到。

技术实现思路

1、为了解决现有技术中存在的问题，本发明提供了一种紫苏叶表皮毛长度和密度的快速测量方法，主要是以紫苏叶片为材料，通过简单压片处理，即可在显微镜下清晰观察测量紫苏叶表皮毛长度和密度，从而达到对不同紫苏叶表皮毛观测记录的方法。该方法适用于紫苏种质叶表型差异分析，简单易行，解决了紫苏叶表皮毛长度、密度难以计量的技术难度。该方法有效提高了紫苏叶表皮毛的长度和密度的数据化评估。

2、本发明提供一种紫苏叶表皮毛长度和密度的快速测量方法，包括以下步骤：

3、（1）紫苏叶片的选择；

4、（2）在载玻片中央滴1-2滴蒸馏水，用尖头镊子贴着叶脉轻轻撕去紫苏侧叶脉两侧的叶肉，仅保留侧叶脉，截取完整的侧叶脉，浸入于载玻片上的水滴中，展平，将盖玻片放在叶脉上；

5、（3）用显微镜观察，测量紫苏叶表皮毛的长度，在相同叶脉长度的条件下，数出叶表皮毛的数量，从而获得叶表皮毛的密度。

6、作为优选，步骤（1）中，所述紫苏叶片的选择具体为：在紫苏生长期选择具有均一性，完整，无斑的紫苏叶片。

7、作为优选，步骤（2）中，截取1cm长的完整的侧叶脉。

8、作为优选，步骤（2）中，将叶表皮毛与载玻片平行浸入于载玻片上的水滴中。

9、作为优选，步骤（2）中，还包括用干净的纱布擦净载玻片和盖玻片的操作。

10、作为优选，步骤（2）中，用尖头镊子夹取两条侧叶脉间的叶肉组织，顺着侧叶脉延伸方向，撕去叶肉组织，多次剔除叶肉后获得干净的多条叶脉组织，即仅保留侧叶脉，观察完整片段进行截取，最终获得具有完整叶表皮毛的干净叶脉组织。

11、作为优选，步骤（3）中，显微镜观察时，固定载物台高度。

12、作为优选，步骤（3）中，显微镜观察时，固定显微镜放大倍数。

13、作为进一步优选，步骤（3）中，所述显微镜放大倍数为4倍目镜×10倍物镜。

14、作为优选，步骤（3）中，所述测量紫苏叶表皮毛的长度为在可视的屏幕上直接用尺子测量紫苏叶表皮毛的长度。

15、作为优选，步骤（3）中，所述测量紫苏叶表皮毛的长度为用显微镜自带的标尺进行测定。

16、本申请发明人通过肉眼观察紫苏叶面发现，叶表皮毛一般垂直分布于叶脉上，如果截取叶脉平放于载玻片，便可在显微镜下观察叶表皮毛；如何获得完整叶脉，需剔除其两侧的叶肉组织，用解剖刀往往剔除不干净，或者损伤叶表皮毛，影响观察结果，后选择用尖头镊子夹取两条侧叶脉间的叶肉组织，顺着侧叶脉延伸方向，撕去叶肉组织，多次剔除叶肉后获得干净的多条叶脉组织，观察完整片段截取，最终获得具有完整叶表皮毛的干净叶脉组织，用于显微镜观察，但是叶表皮毛较轻，不易固定，于是进一步通过蒸馏水进行简单的压片操作，保证叶表皮毛浸融在蒸馏水中，在盖玻片的重力作用及水的张力作用下固定不动，同时固定载物台高度，保证在统一视野距离下准确测量叶表皮毛长度，根据放大倍数，换算出叶表皮毛的实际长度，进一步试验探索，如果在相同长度的叶脉上，获得分布的叶表皮毛数量，就可以对不同紫苏资源材料叶片的叶表皮毛密度进行比较，根据盖玻片的边长限制及可操作性，以及简化运算程序，本申请发明人选取1cm长度作为标准长度，截取叶脉长度，数取叶表皮毛的数量，即可进行密度测算。

17、本发明方法是试验探索的结果，操作步骤简单，但可以实际解决紫苏叶表皮毛长度和密度的数据化记录。对于紫苏种质资源分类、抗旱、抗逆检测等提供新数据分析。

18、与现有技术相比，本发明的有益效果如下：

19、1）本发明方法对紫苏叶片的选择比较宽泛，可以测量各生育时期的紫苏叶表皮毛，降低了取材的时空限制。

20、2）本发明方法处理叶片简单快捷，获得的叶表皮毛完整，易观察，易测量。

21、3）本发明方法可操作性简单，降低了人工培训和熟练度要求。

技术特征：

1.一种紫苏叶表皮毛长度和密度的快速测量方法，其特征在于：包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的一种紫苏叶表皮毛长度和密度的快速测量方法，其特征在于：步骤（1）中，所述紫苏叶片的选择具体为：在紫苏生长期选择具有均一性，完整，无斑的紫苏叶片。

3.根据权利要求1所述的一种紫苏叶表皮毛长度和密度的快速测量方法，其特征在于：步骤（2）中，截取1cm长的完整的侧叶脉。

4.根据权利要求1所述的一种紫苏叶表皮毛长度和密度的快速测量方法，其特征在于：步骤（2）中，将叶表皮毛与载玻片平行浸入于载玻片上的水滴中。

5.根据权利要求1所述的一种紫苏叶表皮毛长度和密度的快速测量方法，其特征在于：步骤（2）中，还包括用干净的纱布擦净载玻片和盖玻片的操作。

6.根据权利要求1所述的一种紫苏叶表皮毛长度和密度的快速测量方法，其特征在于：步骤（2）中，用尖头镊子夹取两条侧叶脉间的叶肉组织，顺着侧叶脉延伸方向，撕去叶肉组织，多次剔除叶肉后获得干净的多条叶脉组织，即仅保留侧叶脉，观察完整片段进行截取，最终获得具有完整叶表皮毛的干净叶脉组织。

7.根据权利要求1所述的一种紫苏叶表皮毛长度和密度的快速测量方法，其特征在于：步骤（3）中，显微镜观察时，固定载物台高度。

8.根据权利要求1所述的一种紫苏叶表皮毛长度和密度的快速测量方法，其特征在于：步骤（3）中，显微镜观察时，固定显微镜放大倍数；

9.根据权利要求1所述的一种紫苏叶表皮毛长度和密度的快速测量方法，其特征在于：步骤（3）中，所述测量紫苏叶表皮毛的长度为在可视的屏幕上直接用尺子测量紫苏叶表皮毛的长度。

10.根据权利要求1所述的一种紫苏叶表皮毛长度和密度的快速测量方法，其特征在于：步骤（3）中，所述测量紫苏叶表皮毛的长度为用显微镜自带的标尺进行测定。

技术总结
本发明提供一种紫苏叶表皮毛长度和密度的快速测量方法，包括以下步骤：（1）紫苏叶片的选择；（2）在载玻片中央滴1‑2滴蒸馏水，用尖头镊子贴着叶脉轻轻撕去紫苏侧叶脉两侧的叶肉，仅保留侧叶脉，截取完整的侧叶脉，浸入于载玻片上的水滴中，展平，将盖玻片放在叶脉上；（3）用显微镜观察，测量紫苏叶表皮毛的长度，在相同叶脉长度的条件下，数出叶表皮毛的数量，从而获得叶表皮毛的密度。本发明方法对紫苏叶片的选择比较宽泛，可以测量各生育时期的紫苏叶表皮毛，降低了取材的时空限制。本发明方法处理叶片简单快捷，获得的叶表皮毛完整，易观察，易测量。本发明方法可操作性简单，降低了人工培训和熟练度要求。

技术研发人员：崔文娟,欧巧明,陈琛
受保护的技术使用者：甘肃省农业科学院生物技术研究所
技术研发日：
技术公布日：2024/3/11