一种干血斑中抗菌药物的检测方法及其应用与流程

本发明属于临床检测领域，具体涉及一种干血斑中抗菌药物的检测方法及其应用，尤其涉及一种处理时间短的干血斑中抗菌药物的检测方法及其应用。

背景技术：

1、干血斑法(dbs)作为一种新兴的采样手法，是将受试者的指尖或足根血滴在样本采集卡上，干燥形成的血斑，与传统方法相比，拥有微量采样(几滴指尖血即可)、便于采样(受试者可自行完成采样)、易于保存和运输等特点(固态血斑稳定性好，易于运输)。阿米卡星、万古霉素、磺胺甲恶唑、甲氧苄啶、伏立康唑、泊沙康唑、氟康唑、利奈唑胺及哌拉西林均为临床上常用的抗菌药物。其中。阿米卡星、万古霉素、磺胺甲恶唑、利奈唑胺、哌拉西林在临床上常用于耐药细菌的感染，甲氧苄啶则作为磺胺甲恶唑的增效剂；而伏立康唑、泊沙康唑及氟康唑则用于真菌感染。由于这几种药物的过量使用均会造成不良反应或引发患者中毒，使用量不足时又无法抑制菌群生长甚至产生耐药性，故应对其在血液中的浓度进行及时监测。目前，针对上述9种化合物有微生物法、hplc法及lc-ms法等等检测方法，然而，目前的方法存在以下问题：1)对同时检测这9种化合物的方法未见报道；2)市面上的检测方法通常针对血清或血浆基质，对抗菌药物在干血斑基质中的检测应用方法则未见报道。针对合并细菌及真菌感染的免疫力低下的病人，如hiv病人，这几种药物存在联合用药的可能，并且，干血斑的采样形式更加方便的受试者采样和运输集中测样，因此需要建立一种同时检测干血斑中这9种抗菌药物的方法，以确保这9种药物的浓度均在合适的抑菌范围内。

技术实现思路

1、针对现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种干血斑中抗菌药物的检测方法及其应用，尤其提供一种处理时间短的干血斑中抗菌药物的检测方法及其应用。本发明提供的检测方法能够同时检测多种抗菌药物，具有准确度高、处理时间短的优点，并且能够保护色谱柱与质谱系统不被污染。

2、为达到此发明目的，本发明采用以下技术方案：

3、一方面，本发明提供了一种干血斑中抗菌药物的检测方法，所述检测方法包括以下步骤：

4、将待测干血斑与内标、萃取剂混合，之后采用小柱过滤，取滤液进行液相色谱检测，根据检测结果计算抗菌药物含量。

5、所述抗菌药物包括阿米卡星、万古霉素、磺胺甲恶唑、甲氧苄啶、伏立康唑泊沙康唑、氟康唑、利奈唑胺或哌拉西林中任意一种或至少两种的组合。

6、上述检测方法能够同时检测干血斑中的多种抗菌药物，具有准确度高、处理时间短的优点，并且通过小柱过滤，能够有效去除萃取液中的色素和其他杂质，保护色谱柱与质谱系统不被污染。

7、优选地，所述抗菌药物为阿米卡星、万古霉素、磺胺甲恶唑、甲氧苄啶、伏立康唑、泊沙康唑、氟康唑、利奈唑胺和哌拉西林的组合。

8、优选地，所述萃取剂包括甲醇、水、乙酸乙酯、乙腈、异丙醇、甲基叔丁醚、正己烷、乙醇、甲酸中任意一种或至少两种的组合，优选甲醇和水的组合。

9、上述特定萃取剂组合能够有效萃取待测干血斑中的抗菌药物，提高萃取效果，提高检测准确度。

10、优选地，所述甲醇与水的体积比为3:1-1:7，例如3:1、2:1、1:1、1:2、1:3、1:4、1:5、1:6或1:7等，但不限于以上所列举的数值，上述数值范围内其他未列举的数值同样适用，优选2:1-1:1，更优选1.5:1。

11、上述特定体积比能够平衡各个抗菌药物的提取效果，使得检测的准确度得到最大化提高。

12、优选地，所述与内标、萃取剂混合的具体步骤为：将待测干血斑与内标、水混合，之后再与甲醇混合。

13、上述特定混合步骤能够有效提高萃取的效果，使得各个抗菌药物的均能够实现有效地提取。

14、优选地，所述小柱为谱易快萃取小柱。

15、优选地，所述液相色谱中，流动相包括流动相a和流动相b，所述流动相a为甲酸水溶液，所述流动相b为甲酸甲醇溶液；

16、优选地，所述流动相a和流动相b中甲酸的体积分数独立地为0.05-0.15％。

17、优选地，所述液相色谱中，流速为0.3-0.8ml/min，柱温为30-40℃，进样量为2-10μl。

18、其中，甲酸的体积分数可以是0.05％、0.06％、0.07％、0.08％、0.09％、0.1％、0.11％、0.12％、0.13％、0.14％或0.15％等，流速可以是0.3ml/min、0.4ml/min、0.5ml/min、0.6ml/min、0.7ml/min或0.8ml/min等，柱温可以是30℃、31℃、32℃、33℃、34℃、35℃、36℃、37℃、38℃、39℃或40℃等，进样量可以是2μl、3μl、4μl、5μl、6μl、7μl、8μl、9μl或10μl等，但不限于以上所列举的数值，上述数值范围内其他未列举的数值同样适用。

19、优选地，所述液相色谱洗脱过程为梯度洗脱，所述梯度洗脱的流程如下：

20、第0-1.5min，流动相a的体积分数由97-99％匀速变为88-92％，流动相b的体积分数由1-3％匀速变为8-12％；

21、第1.5-2min，流动相a的体积分数由88-92％匀速变为28-32％，流动相b的体积分数由8-12％匀速变为68-72％；

22、第2-3min，流动相a的体积分数由28-32％匀速变为4-6％，流动相b的体积分数由68-72％匀速变为94-96％；

23、第3-3.1min，流动相a的体积分数由4-6％匀速变为97-99％，流动相b的体积分数由94-96％匀速变为1-3％；

24、第3.1-4.5min，流动相a的体积分数为97-99％，流动相b的体积分数为1-3％。

25、另一方面，本发明还提供了如上所述的检测方法在临床上抗菌药物检测中的应用。

26、相对于现有技术，本发明具有以下有益效果：

27、本发明提供了一种干血斑中抗菌药物的检测方法，其能够同时检测干血斑中的多种抗菌药物，具有准确度高、处理时间短的优点，并且通过小柱过滤，能够有效去除萃取液中的色素和其他杂质，保护色谱柱与质谱系统不被污染。

技术特征：

1.一种干血斑中抗菌药物的检测方法，其特征在于，所述检测方法包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述抗菌药物为阿米卡星、万古霉素、磺胺甲恶唑、甲氧苄啶、伏立康唑、泊沙康唑、氟康唑、利奈唑胺和哌拉西林的组合。

3.根据权利要求1或2所述的检测方法，其特征在于，所述萃取剂包括甲醇、水、乙酸乙酯、乙腈、异丙醇、甲基叔丁醚、正己烷、乙醇、甲酸中任意一种或至少两种的组合，优选甲醇和水的组合。

4.根据权利要求3所述的检测方法，其特征在于，所述甲醇与水的体积比为3:1-1:7，优选2:1-1:1。

5.根据权利要求3所述的检测方法，其特征在于，所述与内标、萃取剂混合的具体步骤为：将待测干血斑与内标、水混合，之后再与甲醇混合。

6.根据权利要求1-5中任一项所述的检测方法，其特征在于，所述小柱为谱易快萃取小柱。

7.根据权利要求1-6中任一项所述的检测方法，其特征在于，所述液相色谱中，流动相包括流动相a和流动相b，所述流动相a为甲酸水溶液，所述流动相b为甲酸甲醇溶液；

8.根据权利要求1-7中任一项所述的检测方法，其特征在于，所述液相色谱中，流速为0.3-0.8ml/min，柱温为30-40℃，进样量为2-10μl。

9.根据权利要求1-8中任一项所述的检测方法，其特征在于，所述液相色谱洗脱过程为梯度洗脱，所述梯度洗脱的流程如下：

10.一种根据权利要求1-9中任一项所述的检测方法在临床上抗菌药物检测中的应用。

技术总结
本发明提供了一种干血斑中抗菌药物的检测方法及其应用，所述检测方法包括以下步骤：将待测干血斑与内标、萃取剂混合，之后采用小柱过滤，取滤液进行液相色谱检测，根据检测结果计算抗菌药物含量；所述抗菌药物包括阿米卡星、万古霉素、磺胺甲恶唑、甲氧苄啶、伏立康唑、泊沙康唑、氟康唑、利奈唑胺或哌拉西林中任意一种或至少两种的组合。本发明提供的检测方法能够同时检测多种抗菌药物，具有准确度高、处理时间短的优点，并且能够保护色谱柱与质谱系统不被污染。

技术研发人员：请求不公布姓名
受保护的技术使用者：美罗医药科技有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/3/4