一种西洋参蒸制加工鉴别方法与流程

本发明属于中药，具体涉及一种西洋参蒸制加工鉴别方法。

背景技术：

1、公开该背景技术部分的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。

2、西洋参为五加科植物西洋参panax quinquefolius l.的干燥根，其列入药食同源试点之后，需求量、种植面积和发展规模不断扩大，在药品、食品、保健品等领域都有广泛的应用，其品质优劣与大众健康息息相关。蒸制是一种经过长期生产实践经验总结和临床疗效证明而形成的药材产地加工方法，是许多道地药材形成的技术关键。研究发现，西洋参蒸制加工后，其抗肿瘤活性、免疫调节等活性显著提高。由于目前仍未研究清楚西洋参蒸制加工中的生化反应过程及其作用机理，无法实现蒸制加工的精准调控，从而导致生产中蒸制西洋参的质量参差不齐。

3、西洋参蒸制加工后，其药效成分发生了一系列的化学反应。人参皂苷的种类和相对含量随着蒸制条件的不同而发生显著变化。目前，对于蒸制西洋参，还没有规范的蒸制加工方法以及统一的质量评价方法。蒸制西洋参中的人参皂苷的结构十分丰富，存在很多同分异构体，特别是构象异构体，给其分离分析带来了困难。以往研究往往以液相色谱进行分析，但液相色谱的分离能力较差，难以实现蒸制西洋参中人参皂苷的全面分析。

技术实现思路

1、为了解决现有技术的不足，本发明的目的是提供一种西洋参蒸制加工鉴别方法，本发明分析出更多的人参皂苷，筛选出可靠的标志物，形成西洋参蒸制加工鉴别方法。

2、为了实现上述目的，本发明的技术方案为：

3、本发明的第一个方面，提供一种西洋参蒸制加工鉴别方法，包括确定蒸制西洋参的质量指标的过程，其中蒸制西洋参的质量指标包括质量属性相关指标，确定蒸制西洋参的质量指标的过程包括：

4、确定质量属性相关指标：以蒸煮时间、蒸煮温度作为考察因素，分析考察因素改变的多个样品中蒸制西洋参内在化学成分，选择在至少一种考察因素改变的不同样本中具有差异性的化学成分作为蒸制西洋参内在差异性化学成分；

5、以蒸煮时间、蒸煮温度作为考察因素，分别考察蒸制西洋参内在差异性化学成分及蒸制西洋参中具有生物活性的化学成分与考察因素的关联性，选择与至少一种考察因素关联性显著且能够被定量的一种或多种化学成分或其比值作为含量测定评价指标；所述含量测定评价指标为丙二酰基人参皂苷rg3和乙酰基人参皂苷rg3比值m-rg3/a-rg3，a-rg3和rg3的比值，20(s)-人参皂苷rh12和20(r)-人参皂苷rh12比值rh12(s/r)，乙酰基-20(s)人参皂苷rg1和乙酰基-20(r)-人参皂苷rg1的比值a-rg1(r/s)；

6、利用蒸制西洋参的质量指标鉴别西洋参蒸制加工过程。

7、在本发明的一些实施例中，提取蒸制西洋参的有效成分后，采用液相色谱-质谱联用分析考察因素改变的多个样品中蒸制西洋参内在化学成分。

8、在本发明的一些实施例中，所述提取蒸制西洋参的有效成分的方法包括如下步骤：向蒸制西洋参样品中加入含有甲酸的甲醇/水混合溶液，冰水超声，取上清液，重复2～4次，合并上清液；将上清液低温浓缩，用含有甲酸的水/乙腈溶液复溶，得到蒸制西洋参的有效成分。

9、在本发明的一些实施例中，所述含有甲酸的甲醇/水混合溶液中，甲醇和水的体积比为1-2:1-2，所述甲酸的浓度为0.1-0.2vol.％。

10、在本发明的一些实施例中，所述含有甲酸的水/乙腈溶液中，水和乙腈的体积比为1-2:8-10，所述甲酸的浓度为0.1-0.2vol.％。本发明加入了甲酸进行提取。在进行液相色谱-质谱联用分析时，可以改善峰型，增加保留时间，从而增加r和s型构象异构体的分离度。

11、在本发明的一些实施例中，所述液相色谱的色谱条件为：色谱柱为超高效液相色谱柱agilent sb-c18 column，2.1×100mm,1.8μm；流动相a和b分别为含有0.1％甲酸的水溶液和含有0.1％甲酸的的乙腈溶液，梯度洗脱；进样量4-6μl，流速0.2-0.4ml/min；柱温39-41℃；

12、所述洗脱梯度的洗脱程序为：0min，5％ b；0-10min，5-25％ b；11-15min，25-30％b；16-20min，31-50％ b。

13、在本发明的一些实施例中，所述质谱条件为：在正负离子模式下进行分析，质量数扫描范围m/z 50-1500；毛细管电压3500v；雾化气压力2.0bar,干燥气流速8.0l/min,干燥气温度200℃；传输时间100μs，碰撞池射频电压振幅800vpp，离子漏斗1射频电压振幅300vpp，离子漏斗2射频电压振幅300vpp，脉冲前等待时间10μs；源内裂解电压为5ev；扫描速度为5hz。

14、在本发明的一些实施例中，通过非参数检验以及峰面积比值，将p<0.05、比值大于5的化合物视为候选的蒸制西洋参内在差异性化学成分。

15、其中，所述非参数检验，模型为wilcoxon,mann-whitney test，分别检验每组与冻干样品(对照组)，以及不同时间组(2h/4h、2h/6h、2h/8h、2h/10h、2h/12h、4h/6h、4h/8h、4h/10h、4h/12h、6h/8h、6h/10h、6h/12h、8h/10h、8h/12h、10h/12h)、不同温度组(100℃/110℃、100℃/120℃、100℃/130℃、110℃/120℃、110℃/130℃、120℃/130℃)中皂苷类成分，并计算每两组皂苷类成分之间的比值。所述每两组是指每组与冻干样品(对照组)、不同蒸制时间的两组或不同蒸制温度下的两组，例如：不同时间组中“2h/4h”为每两组，即一组蒸制时间为2h，一组蒸制时间为4h，两组蒸制温度相同，计算蒸制时间为2h的西洋参中皂苷类成分含量与蒸制时间为4h的西洋参中的同种皂苷类成分含量的比值。例如：不同温度组中“100℃/110℃”为每两组，一组蒸制温度为100℃，一组蒸制温度为110℃，两组蒸制时间相同，计算蒸制温度为100℃的西洋参中皂苷类成分含量与蒸制温度为110℃的西洋参中的同种皂苷类成分含量的比值。

16、在本发明的一些实施例中，所述蒸制时间为100℃下蒸制2-12h。

17、在本发明的一些实施例中，所述蒸制温度为0.20-0.25mpa下，100-130℃蒸制2h。

18、在本发明的一些实施例中，通过含量测定评价指标对不同蒸制条件下的样品进行区分：

19、蒸制2h条件下，100℃≤温度≤110℃，m-rg3/a-rg3>1.2，rg3/a-rg3>28，rh12(s/r)>1.9，a-rg1(r/s)>2.0；

20、蒸制2h条件下，110℃＜温度＜130℃，m-rg3/a-rg3≤1.2，rg3/a-rg3≤28，rh12(s/r)≤1.9，a-rg1(r/s)>2.0；

21、蒸制2h条件下，130℃≤温度，m-rg3/a-rg3≤1.2，rg3/a-rg3≤28，rh12(s/r)≤1.9，a-rg1(r/s)<2.0；

22、蒸制100℃条件下，2h≤时间≤8h，m-rg3/a-rg3>1.2，rg3/a-rg3>28，rh12(s/r)>1.9，a-rg1(r/s)>2.0；

23、蒸制100℃条件下，8h＜时间，m-rg3/a-rg3＜1.2，rg3/a-rg3>28，rh12(s/r)>1.9，a-rg1(r/s)>2.0。

24、本发明的有益效果为：

25、本发明提供了一种西洋参蒸制加工鉴别方法，本发明的基于液相色谱-质谱对蒸制西洋参中的不同类型的人参皂苷进行了分析，优化了提取分离条件，以期分析出更多的人参皂苷。基于更全面的人参皂苷的分析，筛选出可靠的标志物，形成西洋参蒸制加工鉴别方法。本发明的方法适用于对各种西洋的蒸制加工过程进行综合评价，基于蒸制西洋参质量属性形成的内在质量指标，确立含量测定评价指标对西洋参蒸制加工过程进行鉴别，为科学客观评价蒸制西洋参质量优劣提供了技术支持和示范。