可溶性生长刺激表达基因2蛋白质控品及其制备与应用的制作方法

本发明涉及生物检测，尤其涉及一种可溶性生长刺激表达基因2蛋白质控品及其制备与应用。

背景技术：

1、可溶性生长刺激表达基因2蛋白(sst2)是白细胞介素1超家族成员之一，人st2基因全长约49kb，定位于染色体2q12。根据剪切部位的不同，st2基因主要编码两种不同的亚型，即跨模型(st2l)和可溶性(sst2)两种形式，一直以来被认为是一种孤儿受体，主要表达于th2细胞肥大细胞和成纤维细胞中，参与多种炎症过程并发挥免疫调节功能，研究表明，心力衰竭患者血清中sst2明显增高，并能够竞争性结合st2的特异性功能配体——il33，阻断il33/st2l信号通路，参与心肌纤维化和心室重构。心衰引起的呼吸困难患者体内sst2水平明显高于非心血管疾病引起的呼吸困难患者。众多研究支持在心力衰竭的预后和危险分层方面，sst2有很高的价值。因此，定量检测可溶性生长刺激表达基因2蛋白(sst2)的水平可以为医生提供一个精确的工具对慢性心力衰竭进行辅助评估。依据检测结果并结合临床诊断，辅助评价慢性心力衰竭患者的预后诊断。

2、临床试验要获得可靠的测定结果，需要建立一个全面的质量管理体系。其中，实验室内质量控制是一个重要环节，而质控品是保证质量控制工作的重要物质基础。质控品是用于体外诊断的质量控制物质，由制造商使用合适的分析方法或过程分析的参考值，并指定参考范围，是一种旨在用于医学用途检测系统中使用的物质、材料、物品或设备，其目的是评价或验证测量精密度、由于试剂或分析仪器的变化检测系统可能产生的分析偏差等性能特征。

3、而现有的可溶性生长刺激表达基因2蛋白(sst2)质控品稳定性差、保质期短，因此研制一种可溶性生长刺激表达基因2蛋白(sst2)质控品非常必要。

技术实现思路

1、有鉴于此，本技术提供一种可溶性生长刺激表达基因2蛋白质控品及其制备与应用，用于解决可溶性生长刺激表达基因2蛋白质控品稳定性差、准确度低的问题。

2、为达到上述技术目的，本技术采用以下技术方案：

3、第一方面，本技术提供一种可溶性生长刺激表达基因2蛋白质控品，包括基质液和可溶性生长刺激表达基因2蛋白抗原；基质液包括0.5-10.0％(w/v)蛋白保护剂、0.05-0.5％(w/v)醇类、2.0％-12.0％(w/v)赋形剂、0.05-0.5％(w/v)稳定剂、0.05-0.5％(w/v)表面活性剂、0.01-0.5％(w/v)防腐剂，基质液以mops缓冲液和/或pbs缓冲液为基质，基质液的ph值为6.5-7.5。

4、优选的，缓冲液为20-80mm的mops缓冲液和/或pbs缓冲液；更为优选的，缓冲液为20-80mm的mops缓冲液。mops缓冲液是一种两性离子缓冲液，具有很好的ph稳定性，高度极性，对多种化学试剂和酶是惰性，不参与和不干扰生物化学反应过程，因此可以用于对ph敏感的蛋白质的研究工作。可溶性生长刺激表达基因2蛋白(sst2)的稳定性受ph的影响较大，mops缓冲液在ph值稳定，能够防止ph变化大导致蛋白质等发生物理聚集或化学变性。实施例数据表明，该可溶性生长刺激表达基因2蛋白(sst2)质控品在ph值为6.57.5的中性条件下具有良好的稳定性。20～80mm与人体血液等渗，不仅对不同ph的检测环境有较大缓冲作用，还减少了在样本测试时的基质效应。缓冲溶液浓度低于20mm对ph的缓冲作用明显减小，且盐离子过小渗透压也随之偏小；缓冲溶液浓度高于80mm对ph的缓冲作用虽有所增大，但盐离子过大渗透压也随之偏大，难以有效模拟真实血样，且不利于活性蛋白的溶解度及稳定性。

5、优选的，蛋白保护剂为酪蛋白、酪蛋白水解物、牛血清白蛋白、明胶中的一种或多种；更为优选的，蛋白保护剂为酪蛋白和/或牛血清白蛋白。

6、蛋白质总是倾向与表面作用，高度稀释的蛋白样品容易被吸附而变性失活，加入一些隔离蛋白可以减少对容器对目标蛋白的吸附。在本发明提供的可溶性生长刺激表达基因2蛋白(sst2)质控品中，加入了牛血清白蛋白和酪蛋白。酪蛋白常常被用作保护蛋白，血清蛋白稳定性和溶解性好，除能防止容器对目标蛋白的吸附外，还能提高一些蛋白的活性，减少加热、表面张力及化学因素等不利环境引起的变性。血清白蛋白是血液的主要成分，再通过加入缓冲溶液和其他保护物质，并调节其配比以调节体系的渗透压和稳定性，模拟人血液样本，能最大限度的减少基质效应。此外，牛血清白蛋白为大分子物质，可作为填充剂，在冷冻干燥中为活性组分提供稳定支撑骨架，起着低温保护和脱水保护，能够延长质控品的保质期，同时也为了增加配方的溶解性。

7、表面活性剂为聚乙二醇400、tween-20、表活s9中的一种或多种；更为优选的，表面活性剂为表活s9。表活s9为两性离子表面活性剂，具有良好的界面活性，无论是吸附到正电荷还是负电荷的界面上，都不会形成疏水界面，同时兼具阴、阳离子表面活性剂的优点，无浊点现象，不易受无机电解质的影响，同时具备良好的乳化能力、分散能力和抗静电能力。

8、优选的，醇类包括山梨糖醇、木糖醇、麦芽糖醇中的一种或多种。更为优选的，醇包括山梨糖醇。山梨糖醇是多羟基化合物，能形成很多氢键，有助于形成水化层，它们的添加还增加了表面张力和溶液粘度。

9、优选的，赋形剂为甘露醇、叔丁醇、pvp、羟乙基淀粉中的一种或多种；更为优选的，赋形剂为叔丁醇和/或甘露醇。叔丁醇作为一种有机溶剂，可改变晶体特性，形成针状冰晶，提高干燥效率，缩短干燥时间。叔丁醇凝固点高，纯的叔丁醇在室温下(25℃)就可以冻结，与水混合后也可以在零下几度冻结，因此在现有的冻干机中都可以完全冻结，同时，叔丁醇的蒸汽压较高，有利于升华，节省冻干时间。另外，叔丁醇与水可以任意比例混合，对于一些水溶液中不稳定的蛋白质，加入适量的叔丁醇可以抑制分解，增强其稳定性。

10、优选的，稳定剂为二水氯化钙、硫酸钙、氯化镁中的一种或多种；更为优选的，稳定剂为二水氯化钙。二水氯化钙作为一种稳定剂，可以降低蛋白质的流动性，使其组织结构不变形。

11、优选的，防腐剂为proclin300、硫酸庆大霉素、叠氮化钠、硫柳汞中的一种或几种；更为优选的，防腐剂为叠氮化钠和/或proclin300。采用多种防腐剂复配的方式，可有效去除各种潜在病原微生物的危害，使得质控品使用更安全。

12、优选的，在可溶性生长刺激表达基因2蛋白质控品中，可根据实际需求设置不同浓度水平的质控品溶液，其包括高浓度水平质控品及低浓度水平质控品；在高浓度水平质控品中，可溶性生长刺激表达基因2蛋白抗原的含量为49～91ng/ml；在低浓度水平质控品中，可溶性生长刺激表达基因2蛋白抗原的含量为14～26ng/ml。

13、优选的，基质液以20-80mm的mops缓冲液为基质，基质液的ph值为6.5-7.5，其含有0.5-2.0％酪蛋白、3.0-6.0％牛血清白蛋白、0.05-0.2％山梨糖醇、5.0％-10.0％甘露醇、2.0％-5.0％叔丁醇、0.05-0.2％二水氯化钙、0.05％-0.2％表活s9、0.02％-1.0％叠氮化钠、0.02％-0.1％ proclin300，其中％代表质量体积比(w/v)。

14、更为优选的，基质液以50mm的mops缓冲液为基质，基质液的ph为7.0，含有0.6％酪蛋白、5.0％牛血清白蛋白、0.05％山梨糖醇、8.0％甘露醇、3.0％叔丁醇、0.09％二水氯化钙、0.1％表活s9、0.09％叠氮化钠、0.05％proclin300，其中％代表质量体积比(w/v)。质控品稳定性和均匀性较好，在2～8℃避光下可放置1年。

15、第二方面，本技术提供一种可溶性生长刺激表达基因2蛋白质控品的制备方法，向缓冲液中加入蛋白保护剂、醇类、赋形剂、稳定剂、表面活性剂和防腐剂，混合均匀后调节ph，过滤得到质控品基质液；再将可溶性生长刺激表达基因2蛋白抗原溶解至质控品基质液得到质控品。

16、优选的，过滤采用0.22μm滤膜进行。

17、优选的，可溶性生长刺激表达基因2蛋白质控品在2-8℃下保存。

18、第三方面，本技术提供一种可溶性生长刺激表达基因2蛋白质控品冻干粉，由可溶性生长刺激表达基因2蛋白质控品冷冻干燥所得。本发明提供的可溶性生长刺激表达基因2蛋白质控品经过冷冻干燥后还可以制备成冻干粉剂，冻干粉剂在使用前要加入分装时同体积的去离子水复溶，然后在相应项目检测仪器进行检测，确定质控品靶值及质控范围。本发明提供冻干粉剂的复溶稳定性好，复溶后能在4℃稳定储存28天，测试结果无明显变化趋势；且一次复溶后能在-20℃有效储存3个月，极大的方便用户后续检测，降低了检测成本。

19、第四方面，本技术提供一种可溶性生长刺激表达基因2蛋白质控品或可溶性生长刺激表达基因2蛋白质控品冻干粉在制备可溶性生长刺激表达基因2蛋白检测试剂中的应用，包括但不限于在试剂盒中的应用。

20、本技术的有益效果如下：

21、本技术的质控品能有效的减弱心衰标志物sst2在基质液中的下降速度，且产品均一性、储存长期稳定性及冻干粉复溶后稳定性良好，不受运输、温度等因素影响，复溶后检测过程稳定时间较长，具备检测重复性、准确性高等优点，该心衰标志物sst2质控品能满足临床对心衰标志物sst2的质量控制要求，可以更准确的检测临床样本检测结果的准确性。