一种气相色谱联用质谱法测定柑橘类水果中2,4-滴残留量的方法与流程

本发明涉及水果残留化学物质检测，具体涉及一种气相色谱联用质谱法测定柑橘类水果中2,4-滴残留量的方法。

背景技术：

1、2,4-滴，化学名称为2,4-二氯苯氧乙酸，主要用作除草剂和植物生长调节剂，也可作为杀菌保鲜剂，常在柑橘、番茄、香蕉等果蔬种植中用于防落花落果和延长贮藏保鲜时间。2,4-滴为2b类致癌物，对人类有潜在致癌作用。有研究认为，长期暴露超过最大污染水平，2,4-滴可能会对肾脏和肝脏等造成损害，甚至能够导致畸致癌变。

2、gb 2763-2021中规定了2,4-滴和2,4-滴钠盐在柑、橘、橙的最大残留限量为0.1mg/kg，指定按照gb/t 5009.175-2003规定的方法测定，该方法采用气相色谱仪配置电子捕获检测器(ecd)检测，但ecd灵敏度高，农产品样品基质复杂，杂峰干扰多，定性能力较弱，检出阳性需要再用质谱辅助定性。目前相关文献报道2,4-滴的检测方法主要有气相色谱法、气相色谱质谱法、液相色谱法、液相色谱串联质谱法和离子色谱法，多数是研究饮用水中2,4-滴的检测方法，关于研究柑橘类样品中2,4-滴的检测方法的报道很少。gb/t5009.175-2003中规定对粮食和蔬菜中2,4-滴残留量的测定方法，该方法采用酯化，用14％三氟化硼丁醇溶液将2,4-滴衍生成2,4-滴丁酯，该方法用的衍生剂比较难购得且价格较贵。

技术实现思路

1、本发明的目的是设计一种气相色谱联用质谱法测定柑橘类水果中2,4-滴残留量的方法，实现适用于柑橘类水果中2,4-滴的测定，且适用于柑橘类水果中2,4-滴的测定，以解决背景技术中所提出的问题。

2、为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

3、一种气相色谱联用质谱法测定柑橘类水果中2,4-滴残留量的方法，包括如下步骤：

4、s1：制备浓度为1000ug/ml 2,4-滴标准储备液；

5、s2：制备浓度为1.00ug/ml 2,4-滴标准中间液；

6、s3：样品提取，称取样品5.00g于离心管a中，加入5-7ml稀硫酸，加入10-15ml提取剂，振荡提取5min，然后放入离心机分离3min，静置后移取有机相于离心管b中，在残渣中加入5-10ml提取剂，重复提取1-2次，然后合并有机相，加入无水硫酸钠，混匀以吸收水分，静置后移取有机相转移到离心管c，用氮气吹干；通过加入无水硫酸钠去除提取液中的水分，提高后续提取液氮吹至干的速度，然后进行下一步衍生化。

7、s4：衍生化，将100-200μl正丁醇和25-50μl浓硫酸放入离心管c中，摇晃混匀，进行衍生反应，再加入1-5ml有机溶剂，涡旋3min后，放入离心机分离3min，静置后移取上清液于离心管d中；加3-5ml饱和氯化钠水溶液，旋涡混合器涡旋1min，然后放入离心机分离3min，静置后移出有机相，得到待分析液；在酸性条件下采用乙醚提取，浓硫酸作为催化剂用正丁醇将2,4-滴衍生成2,4-滴丁酯；饱和氯化钠水溶液可以洗去衍生化中的浓硫酸残留，使待分析液呈中性，后续色谱和质谱检测分析时，不会有太多杂峰，干扰测试。

8、s5：制备标准曲线工作溶液，分别准确移取s2中不同体积2,4-滴标准中间液，用甲醇稀释定容，氮吹至干，然后按照s4进行同样处理，得到不同浓度的系列2,4-滴衍生物标准工作液；

9、s6：气相色谱质谱联用仪联用分析，对s4中的待分析液和s5中系列标准工作液进行色谱和质谱检测分析。

10、优选的，s3中稀硫酸的ph为2.0，为提取系统中提供酸性的环境。

11、优选的，所述提取剂为乙醚，乙醚具有较强的萃取能力，能萃取多种有机化合物，且乙醚沸点低，易除去。

12、优选的，准确称取10mg 2,4-滴标准物质，用甲醇溶解并定容至10ml，得到浓度为1000ug/ml 2,4-滴标准储备液；准确移取100μl 2,4-滴标准储备液，用甲醇稀释并定容至100ml，得到浓度为1.00ug/ml 2,4-滴标准中间液。

13、优选的，衍生的温度为35℃-75℃，时间为30min-70min。

14、优选的，s4中所述有机溶剂为正己烷和丙酮，其体积比例为9:1，通过添加正己烷和丙酮的混合有机溶剂提取衍生后2,4-滴丁酯。

15、优选的，s3中有机相转移到离心管c后，用少许乙醚润洗无水硫酸钠2-4次，合并离心管c中的有机相和乙醚洗液，用氮气吹干。

16、优选的，s4中移出有机相后，加入0.3g无水硫酸钠进行干燥，将溶液转移至进样小瓶中，得到待分析液。

17、优选的，在所述气相色谱质谱联用仪联用分析中，色谱条件为：色谱柱：弱极性毛细管色谱柱；升温程序：50℃保持1min；以10℃/min升至230℃，再以30℃/min升至260℃保持5min；进样口温度：260℃；载气：he，流速：1.2ml/min；进样模式：不分流进样；进样量：1μl。

18、优选的，在所述气相色谱质谱联用仪联用分析中，质谱条件为：拉出透镜高灵敏度离子源(ei)；电子能量：70ev；离子源温度：230℃；四极杆温度：150℃；质谱接口温度：260℃；采集模式：选择离子扫描(sim)；溶剂延迟：10min；定量离子：276；定性离子：185、278。

19、与现有技术相比，本发明的有益效果：

20、1.在稀硫酸提供的酸性条件下采用乙醚提取，浓硫酸作为催化剂用正丁醇将2,4-滴衍生成2,4-滴丁酯，使用气相色谱-质谱联用仪测定柑橘2,4-滴的残留量，外标法定量，建立柑橘水果中2,4-滴测定的方法；

21、2.在本申请建立的方法上，2,4-滴在0～0.5μg/ml范围内呈良好线性关系，相关系数(r2)大于0.999，方法检出限为0.0025mg/kg，定量限为0.005mg/kg，可以满足柑橘中2,4-滴检测要求；

22、3.本发明对2,4-滴的测定重复性良好，其rsd值在2.08％～4.46％之间；

23、4.本申请建立的方法灵敏度高，回收率稳定，定性定量准确，适用于柑橘类水果中2,4-滴的测定；

24、5.本申请通过浓硫酸作为催化剂用正丁醇将2,4-滴衍生成2,4-滴丁酯，摒弃采用三氟化硼丁醇溶液作为衍生剂，浓硫酸、正丁醇易购买且价格便宜，降低检测的成本。

技术特征：

1.一种气相色谱联用质谱法测定柑橘类水果中2,4-滴残留量的方法，其特征在于，包括如下步骤：

2.根据权利要求1所述的气相色谱联用质谱法测定柑橘类水果中2,4-滴残留量的方法，其特征在于，s3中稀硫酸的ph为2.0。

3.根据权利要求1所述的气相色谱联用质谱法测定柑橘类水果中2,4-滴残留量的方法，其特征在于，所述提取剂为乙醚。

4.根据权利要求1所述的气相色谱联用质谱法测定柑橘类水果中2,4-滴残留量的方法，其特征在于，准确称取10mg 2,4-滴标准物质，用甲醇溶解并定容至10ml，得到浓度为1000ug/ml 2,4-滴标准储备液；准确移取100μl 2,4-滴标准储备液，用甲醇稀释并定容至100ml，得到浓度为1.00ug/ml 2,4-滴标准中间液。

5.根据权利要求1所述的气相色谱联用质谱法测定柑橘类水果中2,4-滴残留量的方法，其特征在于，衍生的温度为35℃-75℃，时间为30min-70min。

6.根据权利要求1所述的气相色谱联用质谱法测定柑橘类水果中2,4-滴残留量的方法，其特征在于，s4中所述有机溶剂为正己烷和丙酮，其体积比例为9:1。

7.根据权利要求1所述的气相色谱联用质谱法测定柑橘类水果中2,4-滴残留量的方法，其特征在于，s3中有机相转移到离心管c后，用少许乙醚润洗无水硫酸钠2-4次，合并离心管c中的有机相和乙醚洗液，用氮气吹干。

8.根据权利要求1所述的气相色谱联用质谱法测定柑橘类水果中2,4-滴残留量的方法，其特征在于，s4中移出有机相后，加入0.3g无水硫酸钠进行干燥，将溶液转移至进样小瓶中，得到待分析液。

9.根据权利要求1所述的气相色谱联用质谱法测定柑橘类水果中2,4-滴残留量的方法，其特征在于，在所述气相色谱质谱联用仪联用分析中，色谱条件为：色谱柱：弱极性毛细管色谱柱；升温程序：50℃保持1min；以10℃/min升至230℃，再以30℃/min升至260℃保持5min；进样口温度：260℃；载气：he，流速：1.2ml/min；进样模式：不分流进样；进样量：1μl。

10.根据权利要求1所述的气相色谱联用质谱法测定柑橘类水果中2,4-滴残留量的方法，其特征在于，在所述气相色谱质谱联用仪联用分析中，质谱条件为：拉出透镜高灵敏度离子源(ei)；电子能量：70ev；离子源温度：230℃；四极杆温度：150℃；质谱接口温度：260℃；采集模式：选择离子扫描(sim)；溶剂延迟：10min；定量离子：276；定性离子：185、278。

技术总结
本发明涉及一种气相色谱联用质谱法测定柑橘类水果中2,4‑滴残留量的方法，包括如下步骤：S1：制备标准储备液；S2：制备标准中间液；S3：样品提取；S4：衍生化；S5：制备标准曲线工作溶液；S6：气相色谱质谱联用仪联用分析；本发明在酸性条件下采用乙醚提取，硫酸作为催化剂用正丁醇将2,4‑滴衍生成2,4‑滴丁酯，利用气相色谱‑质谱联用仪测定柑橘中2,4‑滴的残留量，灵敏度高，回收率稳定，能够满足柑橘类水果中2,4‑滴的定性和定量检测。

技术研发人员：陈丽香,孙艺,李循媛,郭海柔,陆慧珍,冯梓君,陈茹,谢忠阳,陈俊辉,陈均正
受保护的技术使用者：广东省食品工业研究所有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/4/7