用于检测新型冠状病毒德尔塔株的特异性肽段和方法与流程

本发明涉及新型冠状病毒检测领域，特别是用于检测新型冠状病毒德尔塔株的特异性肽段和方法，更具体地涉及利用液相色谱串联质谱检测新型冠状病毒德尔塔株的特异性肽段和方法。

背景技术：

1、和原始株病毒谱系对比，delta变异株s蛋白部分有8个主要突变位点的关键突变，delta变异株病毒的传播性增强与s蛋白中的关键突变（如d614g，l452r，t478k和d950n等）有关。这些突变导致s蛋白结构改变，有利于病毒融合与病毒复制，同时s蛋白和ace的亲和力增加被认为是疫苗效力降低的关键原因(di giacomo, s.等，preliminary report onsevere acute respiratory syndrome coronavirus 2 (sars-cov-2) spike mutationt478k，j med virol (2021) 93(9): 5638-5643；planas, d.等， reduced sensitivityof sars-cov-2 variant delta to antibody neutralization." nature (2021) 596(7871): 276-280；shi, a. c.和x. xie，making sense of spike d614g in sars-cov-2transmission，sci china life sci (2021) 64(7): 1062-1067)。

2、综上，delta变体的传播能力与致病性显著增强，引发了人们对delta变异株在易感人群（包括已接种疫苗的人）中再次流行的担忧，具有高致病力和高传播性的delta变异株的出现与全球流行进一步增加了快速检测和识别方法开发的必要性与紧迫性。同时，作为最关键的预防手段，针对变异株开发的新型疫苗也需要快速手段区别变异株与其他株型疫苗，因此针对delta株特异性鉴别的检测方法开发尤为关键。

3、现有鉴别sars-cov-2变异株的实时荧光定量pcr (qpcr)利用taqman探针rt-qpcr技术对sars-cov-2主要变异株进行快速鉴别，实验首先需要根据ncbi genbank中原始株与delta变异株的基因序列，分别设计具有特异性的引物序列，之后用病毒基因组rna提取试剂盒分别提取新冠病毒原始及变异株rna，或者人工合成突变株rna片段并进行测序验证。再对反应体系及条件进行适当优化，根据pcr结果判定两种特异性引物是否可区分原始株与变异株基因序列。

4、qpcr法可用于表征变异株病毒，但其存在如下缺点：(1)耗时长，不可控影响因素多：从样品处理到结果报告需要6-8小时，加之大多数病毒检测单位不具备基因测序条件，需交由第三方测序公司代测，样品路途转运和可能的上机排队等待时间，使得基因测序不仅速度慢，而且不可控影响因素多；(2)检测灵敏度较低：基因测序上机测试前需进行基因扩增，对低丰度核酸样品的扩增效果稍差即可影响测序；(3)检测成本高：新冠病毒基因测序包括设计引物、核酸提取等繁琐步骤，导致检测物资和人力成本都较高，且多个复杂步骤操作易由不慎操作导致检测结果的偏差；(4)特异性低：由于sars-cov-2一直处于进化变异中，若新变异位点并未包含在pcr方法研究设计的序列长度内，可能导致检测失败。上述缺点使得分子测序方法在应用于新冠病毒疫情防控时，会影响病毒变异株的检测时效、通量和成本，并可能对变异株检测特异性不够灵敏导致结果偏差，误导或延误新冠病毒疫情防控工作进程。

5、液相色谱串联质谱技术在蛋白质的检测分析方面具有高选择性和高灵敏度等优点，非常适用于复杂生物基质中靶向蛋白质的定性研究。本发明通过对变异株的质谱鉴定特异突变位点的分析结果，提供了一种快速、准确鉴别delta亚系的质谱方法。

技术实现思路

1、本申请旨在至少解决现有技术中存在的上述技术问题之一。为此，本发明的主要目的之一在于提供一种检测新型冠状病毒德尔塔株的方法，其通过采用液相色谱串联质谱针对德尔塔株的特异性肽段的检测来检测和鉴定新型冠状病毒德尔塔株。

2、本发明的目的还在于提供一种用于检测新型冠状病毒德尔塔株的特异性肽段。

3、在一方面，本发明提供了一种检测新型冠状病毒德尔塔株的方法，其包括通过采用液相色谱串联质谱检测样品中的氨基酸序列为lqnvvnqnaqalntlvk (seq id no. 1)的特异性肽段的存在。本发明提供了一种用于检测新型冠状病毒德尔塔株的特异性肽段，其中，所述特异性肽段的氨基酸序列为lqnvvnqnaqalntlvk (seq id no. 1)。

4、本发明的其它方面还涉及上述特异性肽段在新型冠状病毒德尔塔株的检测、预防和/或治疗中的应用以及包含其的试剂盒。

5、采用本发明的检测新型冠状病毒德尔塔株的方法，特别是通过利用液相色谱串联质谱法来鉴定新型冠状病毒德尔塔株的特异性肽段，灵敏度高、特异性好、准确率高。本发明的特异性肽段在新型冠状病毒德尔塔株检测中也具有特异性强、稳定性高等特点。与现有技术的新型冠状病毒德尔塔株检测方法相比，本发明的技术方案不需要设计引物或制备抗体，能在蛋白水平对新型冠状病毒德尔塔株进行特异性鉴别，为新型冠状病毒德尔塔株的特异性鉴别提供了新思路，对新型冠状病毒变异株的鉴别以及疫苗的研发和质量控制有重要意义。

技术特征：

1.一种检测新型冠状病毒德尔塔株的方法，其包括通过采用液相色谱串联质谱检测样品中的氨基酸序列为lqnvvnqnaqalntlvk (seq id no. 1)的特异性肽段的存在，

2.如权利要求1所述的方法，其中，所述方法包括以下步骤：

3.如权利要求2所述的方法，其中，所述准备样品并进行酶解处理的步骤包括：

4.如权利要求2所述的方法，其中，液相色谱在包括以下的条件下进行：

5.如权利要求2所述的方法，其中，质谱在包括以下的条件下进行：

6. 一种用于检测新型冠状病毒德尔塔株的特异性肽段，其中，所述特异性肽段的氨基酸序列为lqnvvnqnaqalntlvk (seq id no. 1)，

技术总结
本发明涉及用于检测新型冠状病毒德尔塔株的特异性肽段和方法。本发明提供了一种检测新型冠状病毒德尔塔株的方法，其包括通过采用液相色谱串联质谱检测样品中的氨基酸序列为LQNVVNQNAQALNTLVK(SEQ ID No.1)的特异性肽段的存在。本发明还提供了一种用于检测新型冠状病毒德尔塔株的特异性肽段，其氨基酸序列为LQNVVNQNAQALNTLVK(SEQ ID No.1)，其离子对中母离子的质荷比为934.02271±0.02 Da，子离子的质荷比为455.26108±0.02 Da和/或356.19305±0.02 Da。

技术研发人员：张云涛,何振玉,赵玉秀,姚雨竹,周楚格
受保护的技术使用者：北京生物制品研究所有限责任公司
技术研发日：
技术公布日：2024/2/19