MGIA抑制实验检测补体C3d致敏血小板的方法与流程

本发明提供一种mgia抑制实验（mgia反应抑制实验）检测补体c3d致敏血小板的方法，本发明还公开了一种体外建立补体c3d致敏血小板模型方法，涉及医学检测。

背景技术：

1、血小板具有复杂的抗原系统，包括与其它组织或细胞所共有的抗原，如abo血型系统抗原和人类白细胞抗原（human leukocyte antigen，hla）；血小板特异性抗原（humanplatelet antigen，hpa）；与单核/巨噬细胞及有核红细胞共有的gpⅳ/cd36抗原。

2、红细胞抗体或补体的检测已经成为临床输血前常规免疫学检测项目，但临床并未对血小板抗体或补体的检测充分重视起来。目前临床在血小板输注前只是检测血小板抗体，很少有对血小板补体检测进行研究和报道。c3d是补体核心组分c3最终的裂解产物，补体激活导致c3b在血小板表面沉积，c3b与抗血小板抗体结合促进脾脏中巨噬细胞吞噬被激活的血小板，c3通过某种机制在机体免疫调控中发挥作用最终表现为血小板减少。血小板输注的策略主要采用随机输注方式，反复输血及多次妊娠者容易产生血小板抗体，引起免疫性血小板输注无效（platelet transfusion refractoriness，ptr）、胎儿和新生儿同种免疫性血小板减少症（fetal and neonatal alloimmu-ne thrombocytopenia，fnait）、非溶血性发热性输血反应（febrile non-haemolytic transfusion reaction，fnhtr）、输血后紫癜（post-transfusion purpura，ptp）等输血不良反应。

3、为保障临床输血安全和疗效，预防ptr和输血不良反应，节约血液资源，辅助诊断血小板补体相关免疫性疾病，建立快速有效的血小板补体的检测方法是刻不容缓的。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供一种mgia抑制实验检测补体c3d致敏血小板的方法，通过应用mgia抑制实验，检测血小板是否被补体c3d致敏，通过体外建立补体c3d致敏血小板模型和检测临床样本进行验证。

2、本发明所述一种mgia抑制实验检测补体c3d致敏血小板的方法，其特征在于，包括以下步骤：

3、1、待检血小板样本与血小板缓冲液（阴性对照）分别与等体积抗c3d单克隆抗体孵育后离心；

4、2、取上清加入微柱凝胶卡中，再分别加入等体积补体c3d致敏红细胞；

5、3、离心，观察结果：

6、当血小板未被补体c3d致敏，抗c3d单克隆抗体与血小板不反应，则与补体c3d致敏红细胞结合形成抗原抗体复合物，在mgia实验中出现阳性结果，且凝集强度与对照组一致，为补体c3d致敏血小板阴性结果；

7、当血小板被补体c3d致敏，抗c3d单克隆抗体与血小板反应，则与补体c3d致敏红细胞在mgia实验中出现阴性或阳性减弱结果，为补体c3d致敏血小板阳性结果。

8、本发明进一步公开了一种体外建立补体c3d致敏血小板模型的方法，其特征在于，包括以下步骤：

9、1、柠檬酸钠采血管采集健康人o型全血；

10、2、将采集后全血离心，分离富血小板血浆；

11、3、将富血小板血浆加到提前37℃水浴好的9.24%的蔗糖溶液中，水浴；

12、4、离心，取血小板，用血小板缓冲液洗涤三次；

13、5、对模型进行验证，验证结果：

14、补体c3d致敏血小板。

15、本发明的积极效果在于：

16、构建了一种补体c3d致敏血小板体外模型，通过红细胞和血小板共有抗原的特异性抗体与血小板反应后，该特异性抗体失去活性或活性减弱；一些病人在某些病理情况和少数正常健康人的红细胞和血小板都可能致敏吸附血小板补体c3b和c3d，建立体外致敏模型模拟此情况，在该抗补体的单克隆抗体与血小板反应后，收获的上清与补体c3d致敏红细胞反应，并且将补体c3d致敏血小板样本与健康人血小板样本进行平行检测，出现阴性或阳性减弱结果，检测阳性结果与阴性结果符合预期，同时使用该方法检测22例临床样本，其中6例样本检测结果为阳性，16例样本检测结果为阴性，表明本发明方法建立成功，此方法可辅助诊断血小板补体相关免疫性疾病，结果易于判读。

技术特征：

1.一种mgia抑制实验检测补体c3d致敏血小板的方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.一种体外建立补体c3d致敏血小板模型的方法，其特征在于，包括以下步骤：

技术总结
本发明提供一种MGIA抑制实验检测补体C3d致敏血小板的法，本发明还公开了体外建立补体C3d致敏血小板模型方法，通过红细胞和血小板共有抗原的特异性抗体与血小板反应后，该特异性抗体失去活性或活性减弱；一些病人在某些病理情况和少数正常健康人的红细胞和血小板都可能致敏吸附血小板补体C3b和C3d，建立体外致敏模型模拟此情况，在该抗补体的单克隆抗体与血小板反应后，收获的上清与补体C3d致敏红细胞反应，并且将补体C3d致敏血小板样本与健康人血小板样本进行平行检测，出现阴性或阳性减弱结果，检测阳性结果与阴性结果符合预期，可辅助诊断血小板补体相关免疫性疾病，结果易于判读。

技术研发人员：王常敏,李冬,李艺涵,冯立岗,陈维佳
受保护的技术使用者：长春博迅生物技术有限责任公司
技术研发日：
技术公布日：2024/4/29