一种液相色谱串联质谱法测定血浆中SOMCL668浓度分析方法与流程

本发明属于生物医药，具体涉及一种快速适合药动学研究的血浆中somcl-668浓度分析方法；所述somcl-668为高活性、高选择的sigma-1受体别构剂。

背景技术：

1、神经系统与精神类疾病在社会疾病负担中占比最大。神经系统疾病，如癫痫，是由脑组织局部病灶的神经元异常高频放电，并向周围扩散，导致大脑功能短暂失调综合征，主要临床表现为突然发作，短暂的运动、感觉、意识、精神障碍等。精神类疾病包括抑郁症与精神分裂症等，抑郁症主要表现为持续的低落情绪、失去兴趣，并可能伴随体重变化、睡眠问题和疲劳，而精神分裂症常出现幻觉、妄想、思维混乱与情感淡漠等症状。

2、sigma-1受体是一种具有分子伴侣活性的受体，广泛分布于大脑与外周组织，越来越多的研究表明，sigma-1受体可能成为抗神经系统疾病与精神类疾病药物开发的潜在靶点。somcl-668是一种新型的sigma-1受体别构调节剂，其本身没有直接的激动活性，而是能够增强正构配体的亲和力，在一定程度上提高选择性与安全性。研究报道，somcl-668能拮抗电休克诱发的强直性癫痫发作，并且不影响小鼠的自发活动和协调能力，此外，somcl-668还具有快速抗抑郁的作用，其机制可能为通过别构调节sigma-1受体，激活bdnf-gsk3β通路。还有研究报道了somcl-668的抗精神分裂作用。因此研究somcl-668的体内药物浓度水平和药动学对推进其新药开发具有重要作用。

3、液相色谱-串联质谱(lc-ms/ms)技术结合了液相色谱高效的分离性能和串联质谱的高灵敏度、高特异性等优势，现已成为生物医药领域最推荐的定量分析技术手段。目前尚无文献报道血浆中somcl-668的分析方法。

技术实现思路

1、本发明的目的在于建立一种液相色谱串联质谱法，用于血浆中somcl-668浓度分析，并应用于药动学研究。

2、本发明的目的通过以下技术方案得以实现：

3、一方面，本发明提供一种快速适合药动学研究的血浆中somcl-668浓度分析方法，其包括如下步骤：

4、向血浆样本中加入内标(甲苯磺丁脲)溶液(甲醇/乙腈＝1/4)进行涡流，离心后收集上清液，上清液中加入0.1％甲酸水溶液，涡流混匀得到预处理后的待测样品；

5、采用液相色谱-串联质谱检测，将待测样品进行液相色谱分离，然后进行质谱检测，基于检测峰面积比绘制标准曲线获得回归方程，最终计算获得待测样品中的somcl-668浓度。

6、上述的方法中，优选地，所述内标溶液为甲苯磺丁脲。

7、上述的方法中，优选地，所述预处理的具体方法包括：

8、向96孔板中加入5.0μl血浆样本，接着加入100.0μl的内标溶液，涡流混匀后离心收集上清液，取50.0μl的上清液到另一干净96孔板中，接着加入100μl的1％甲酸水溶液，涡流混匀，得到待测样品。

9、上述的方法中，优选地，所述离心的时间为10min，离心温度为4℃，离心速度为4000rpm。

10、上述的方法中，优选地，所述内标溶液的浓度为100ng/ml。

11、上述的方法中，优选地，进行液相色谱分离所采用的色谱柱为：菲罗门titank-c18色谱柱，3.0μm，50×2.1mm；所采用的流动相为：a相：0.1％甲酸水溶液，b相：0.1％甲酸乙腈溶液。

12、上述的方法中，优选地，进行液相色谱分离洗脱条件为：

13、梯度洗脱：

14、0-0.20min，20％ b相，80％ a相；

15、0.20-1.00min，20％ b相→90％ b相，80％ a相→10％ b相；

16、1.00-1.60min，90％ b相，10％ a相；

17、1.61-2.00min，20％ b相，80％ a相。

18、洗脱时间：2.00min；

19、流速：0.600ml/min；

20、进样量：10.00μl；

21、自动进样器温度：8℃；

22、柱温：40℃。

23、上述的方法中，优选地，进行质谱检测的质谱条件为：

24、离子源：电喷雾离子源(esi)；

25、喷射电压：5500v；

26、喷雾气(gas1)：60psi；

27、辅助气(gas2)：50psi；

28、检测方式：正离子；

29、离子源温度：550℃；

30、碰撞诱导解离(cad)：8；

31、气帘气(curtain gas)：30psi；

32、驻留时间：200ms。

33、上述的方法中，优选地，进行质谱检测采用定量分析离子对，所述定量分析离子对为：

34、somcl-668m/z 254.1→121.0，碰撞能量(ce)30ev，去簇电压(dp)40v；甲苯磺丁脲m/z 271.1→172.2，碰撞能量(ce)18ev，去簇电压(dp)70v；

35、上述的方法中，优选地，标准曲线具体制作为：

36、以待测样品理论浓度为横坐标，待测样品与内标物的峰面积比为纵坐标，进行回归分析计算获得直线回归方程。

37、另一方面，本发明还提供上述的方法在分析临床前血浆样本中somcl-668浓度中的应用。

38、本发明的有益效果：

39、(1)本发明具有预处理操作简便的特点，仅需要一步提取及一步稀释即可进行分析，提取后样本易于保存，分析速度较快，分析时间仅为2.0min，因此本发明适合大批量临床研究样品分析。

40、(2)本发明灵敏度较高、somcl-668定量下限为1.0ng/ml，本发明方法准确度好，精密度高，重现性好，能够更准确地分析药物的浓度。

41、上述说明仅是本发明技术方案的概述，为了能够更清楚了解本发明的技术手段，并可依照说明书的内容予以实施，以下以本发明的较佳实施例并配合附图详细说明如后。

技术特征：

1.一种快速适合药动学研究的血浆中somcl-668浓度分析方法，其包括如下步骤：

2.根据权利要求1所述的方法，其中，所述内标溶液为甲苯磺丁脲。

3.根据权利要求1所述的方法，其中，所述预处理的具体方法包括：

4.根据权利要求1～3所述的方法，其中，所述内标溶液的浓度为100ng/ml。

5.根据权利要求1所述的方法，其中，进行液相色谱分离所采用的色谱柱为：菲罗门titank-c18色谱柱，3.0μm，50×2.1mm；所采用的流动相为：a相：0.1％甲酸水溶液，b相：0.1％甲酸乙腈溶液。

6.根据权利要求5所述的方法，其中，进行液相色谱分离洗脱条件为：

7.根据权利要求1所述的方法，其中，进行质谱检测的质谱条件为：

8.根据权利要求1或6所述的方法，其中，进行质谱检测采用定量分析离子对，所述定量分析离子对为：

9.根据权利要求1所述的方法，其中，标准曲线具体制作为：

10.权利要求1～9任一项所述的方法在分析血浆样本中somcl-668浓度中的应用；所述somcl-668用于治疗溃疡性结肠炎和克罗恩氏病等炎症性肠道疾病。

技术总结
本发明提供了一种快速适合药动学研究的血浆SOMCL‑668浓度分析方法。其包括：向血浆样本中加入内标(甲苯磺丁脲)溶液(甲醇/乙腈＝1/4)进行涡流，离心后收集上清液，上清液中加入0.1％甲酸水溶液，涡流混匀得到预处理后的待测样品；采用液相色谱‑串联质谱检测，将待测样品进行液相色谱分离，然后进行质谱检测，基于检测峰面积比绘制标准曲线获得回归方程，最终计算获得待测样品中的SOMCL‑668浓度。本发明具有预处理操作简便的特点，提取后样本易于保存，分析速度较快，适合大批量临床前研究样品分析；此外灵敏度较高，SOMCL‑668定量下限为1.0ng/mL，满足血药浓度的测定要求；方法准确度好，精密度高，重现性好。

技术研发人员：邓泮,徐振兴,刘庆曌,王加唯
受保护的技术使用者：苏州熙萃医药科技有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/5/10