一种升陷汤的质量检测方法及其应用和质量标准与流程

本发明涉及药物质量检测，具体涉及一种升陷汤的质量检测方法及其应用和质量标准。

背景技术：

1、升陷汤出自清·张锡纯所著的《医学衷中参西录》。由生黄芪、知母、柴胡、桔梗、升麻这几位药材制成，而升陷汤研制成升陷颗粒，按国家新药要求为3.1类新药，因此物质基准质量研究及标准确认相当重要。中药属于多成分多靶点物质，因此质量标准能反应出产品质量，指标成分的合理选择，代表着一定程度上全面监控产品质量意义重大。好的质量标准体现测定指标成分选择的全面性和合理性，且质量标准简单、快速、易行。

2、基于升陷汤的药物配伍，其中黄芪的主要化学成分为黄酮类、多糖类、皂苷类、氨基酸类，其代表性指标或活性成分有黄芪甲苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷；升麻的主要化学成分为酚酸类、三萜类等化合物，少量色原酮、生物碱、挥发油，代表性指标或活性成分为阿魏酸或异阿魏酸；柴胡的主要化学成分为皂苷类、挥发油类、黄酮类、多糖类，代表性指标或活性成分为柴胡皂苷a或柴胡皂苷d；知母的主要化学成分为皂苷类、双苯吡酮类、生物碱类、氨基酸类、挥发油类，代表性指标或活性成分为新芒果苷、芒果苷、异芒果苷；桔梗的主要化学成分为皂苷类、黄酮类、酚类、甾醇类、多糖，代表性指标或活性成分为桔梗皂苷d；基于这些成分，对于升陷汤的品质检测需要选取代表性成分进行研究或监测，如果成分缺项，可能对该药材的研究无法清晰判定。

3、杨婉等在《基于物理指纹图谱与多指标成分定量测定构建升陷汤标准煎液质量评价方法》(杨婉，邹海英，邱智东，等.基于物理指纹图谱与多指标成分定量测定构建升陷汤标准煎液质量评价方法[j].中草药，2023，54(6)：1804-1813.)中，建立了升陷汤标准煎液的物理指纹图谱及6种指标成分(毛蕊异黄酮葡萄糖苷、刺芒柄花苷、毛蕊异黄酮、芒柄花黄素、芒果苷、异阿魏酸)含量测定方法。该研究内容界定了6种指标性成分，从指标成分选择看，体现了黄芪的主要活性成分毛蕊异黄酮葡萄糖苷、刺芒柄花苷、毛蕊异黄酮、芒柄花黄素、知母的活性成分芒果苷、升麻的活性成分为异阿魏酸，显然该研究方法对于皂苷类成分，如黄芪皂苷、柴胡皂苷、桔梗皂苷等没有界定，属于指标成分选择不全。另篇论文常丽静等在《升陷汤标准煎液hplc-elsd特征指纹图谱建立及3种成分测定》(常丽静，李明月，韦花花，等.升陷汤标准煎液hplc-elsd特征指纹图谱建立及3种成分测定[j].中成药，2021，43(8)：2010-2016.)所测定指标为黄芪甲苷、知母皂苷bⅱ、桔梗皂苷d，该指标成分选择，反映出柴胡的活性成分皂苷类成分缺项。同时，毛蕊异黄酮葡萄糖苷、芒果苷、异阿魏酸等成分也比较缺乏。即使我们将以上两篇论文中全部成分进行监控，则代表柴胡的活性成分柴胡皂苷缺乏检测，无法监控柴胡。文中也没有确切讨论2种分析方法联用的解释和说明。

4、孙美，张凤，范香成等《基于多指标成分测定的正交试验法优选升陷汤提取工艺》(孙美，张凤，范香成，等.基于多指标成分测定的正交试验法优选升陷汤提取工艺[j].中华中医药杂志，2022，37(12)：7423-7427.)以芒果苷、毛蕊异黄酮苷、知母皂苷bⅱ、黄芪甲苷为测定指标，因此，指标成分的选择，同样欠缺升麻、柴胡、桔梗药材代表性成分，无法检测相应药材。

5、曹明成等发明专利《一种中药升陷汤指纹图谱的测定方法》(中国专利：cn201910196913.8)检测器为dad检测器，进行梯度洗脱；共检测出14个色谱峰，其中，6、9、12号峰是生黄芪专属峰，3、4、5、9号峰是知母专属峰，7、10、11号峰是升麻专属峰，2号峰是桔梗专属峰。该专利建立了一定的指纹图谱分析，但同时，柴胡未检测到专属峰。该研究内容没有对主要指纹峰的指认，无法清晰表明各药材的主要活性成分和具体对应峰关系，即没有指明毛蕊异黄酮葡萄糖苷、新芒果苷、芒果苷、异芒果苷、异阿魏酸、黄芪甲苷、桔梗皂苷d、柴胡皂苷a等。柴胡的活性成分未检测到，其原因可能是皂苷类成分最佳检测方法是蒸发光散射检测器检测，紫外波长下可能存在无法检测出。另外，所检测方法是否可应用于经典方开发中的中药制备工艺各步骤及基准物质、制剂等各方面，尚不清楚。

6、基于以上可以看出，现有文献的分析方法，无法支撑代表处方中5个药材的指标性成分，存在检测不全面的问题，只要缺任何一个药材指标成分检测，反馈出的标准差别很大，那么在投料过程中，可能存在少投或不投，就无法监控其质量，所以需要新的一种全面指标进行监测每味中药的质量。

技术实现思路

1、针对现有技术不足，本发明提供一种升陷汤的质量检测方法及其应用和质量标准，通过确定8种指标成分，建立了hplc-dad及hplc-elsd联用法，能够为升陷汤整体质量控制的评价提供科学实验依据，且监测了制备工艺的各工艺步骤。

2、为实现以上目的，本发明的技术方案通过以下技术方案予以实现：

3、一种升陷汤的质量检测方法，所述且所述质量检测方法包括以下步骤：

4、s1、确定毛蕊异黄酮葡萄糖苷、新芒果苷、芒果苷、异芒果苷、异阿魏酸、黄芪甲苷、桔梗皂苷d、柴胡皂苷a为质量检测的有效成分；

5、s2、基于hplc法在升陷汤中分离上述8种有效成分；

6、s3、采用hplc-dad法对毛蕊异黄酮葡萄糖苷、新芒果苷、芒果苷、异芒果苷、异阿魏酸成分进行检测；采用hplc-elsd法对黄芪甲苷、桔梗皂苷d、柴胡皂苷a成分检测，并根据检测方法和结果得出上述8种成分的含量计算公式。

7、优选的，所述升陷汤中8种有效成分分离时色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，采用乙腈为流动相a，采用0.1％磷酸溶液为流动相b进行提取。

8、优选的，所述色谱柱的柱长为250mm，内径为4.6mm，且填充剂粒径为5μm。

9、优选的，所述分离毛蕊异黄酮葡萄糖苷、新芒果苷、芒果苷、异芒果苷、异阿魏酸的梯度洗脱程序为：所述梯度洗脱程序为：0-15min，11-16％流动相a；15-18min，16-21％流动相a；18-30min，21-28％流动相a；30-40min，28-35％流动相a；40-45min，35-90％流动相a。

10、优选的，所述洗脱程序中流速为1.0ml/min，柱温为30℃，进样量为10μl。

11、优选的，所述分离黄芪甲苷、桔梗皂苷d、柴胡皂苷a的梯度洗脱程序为：0-4min，20％流动相a；4-9min，20-26％流动相a；9-15min，26-27％流动相a；15-21min，27％流动相a；21-25min，27-35％流动相a；25-50min，35-45％流动相a；50-51min，42-60％流动相a；51-52min，60-90％流动相a。

12、优选的，所述洗脱程序中流速为1.0ml/min，柱温为40℃，进样量为10-20μl。

13、优选的，所述s3中8种成分的含量计算公式如下：

14、新芒果苷：y1＝0.45166x1+0.05483，所述y1为新芒果苷对照品峰面积，x1为新芒果苷对照品浓度；

15、芒果苷：y2＝0.74911x2-0.25012，所述y2为芒果苷对照品峰面积，x2为芒果苷对照品浓度；

16、异芒果苷：y3＝0.64143x3-0.09414，所述y3为异芒果苷对照品峰面积，x3为异芒果苷对照品浓度；

17、毛蕊异黄酮葡萄糖苷y4＝0.55130x4-0.05247，所述y4为毛蕊异黄酮葡萄糖苷对照品峰面积，x4为毛蕊异黄酮葡萄糖苷对照品浓度；

18、异阿魏酸：y5＝0.84090x5-0.02974，所述y5为异阿魏酸对照品峰面积，x5为异阿魏酸对照品浓度；

19、桔梗皂苷d：y6＝1.6366x6+5.5864，所述y6为桔梗皂苷d对照品峰面积的常用对数，x6为桔梗皂苷d对照品浓度的常用对数；

20、黄芪甲苷：y7＝1.6521x7+5.6869，所述y7为黄芪甲苷对照品峰面积的常用对数，x7为黄芪甲苷对照品浓度的常用对数；

21、柴胡皂苷a：y8＝1.4414x8+5.4936，所述y8为柴胡皂苷a对照品峰面积的常用对数，x8为柴胡皂苷a对照品浓度的常用对数。

22、上述检测分析方法应用于现阶段中药经典方新药行业的处方汤剂、提取液、浓缩液、基准物质及制剂等产业。

23、根据上述质量检测建立升陷汤的质量检测标准为以毛蕊异黄酮葡萄糖苷、新芒果苷、芒果苷、异芒果苷、异阿魏酸、黄芪甲苷、桔梗皂苷d、柴胡皂苷a的含量来确定产品的标准，且各成分含量标准制定如下：毛蕊异黄酮葡萄糖苷≥0.008％、新芒果苷≥0.02％、芒果苷≥0.08％、异芒果苷≥0.008％、异阿魏酸≥0.015％、黄芪甲苷≥0.01％、桔梗皂苷d≥0.008％、柴胡皂苷a≥0.008％。

24、本发明提供一种升陷汤的质量检测方法及其应用和质量标准，与现有技术相比优点在于：

25、本发明提供毛蕊异黄酮葡萄糖苷、新芒果苷、芒果苷、异芒果苷、异阿魏酸、黄芪甲苷、桔梗皂苷d、柴胡皂苷a这8种成分为质量检测组分，能够有效全面的对升陷汤的质量进行评价和检测，并且通过hplc-dad及hplc-elsd联用法能够准确的检测上述各种成分的含量，为升陷汤整体质量控制的评价提供科学实验依据，且能够有效监测制备过程中各工艺步骤的稳定性。