次氯酸的检测方法与流程

本发明涉及探针分析检测领域，特别涉及次氯酸的检测方法。

背景技术：

1、内源性次氯酸(hypochlorous acid,hclo)是广泛存在于人体细胞以及人类生存环境中的重要活性氧物种。在细胞中，内源性次氯酸主要是通过髓过氧化物酶(myeloperoxidase,mpo)催化过氧化氢(h2o2)和氯离子(cl-)氧化生成。在生物体内，次氯酸主要以次氯酸根(clo-)的形式存在，参与体内的多种新陈代谢。内源性次氯酸是一把双刃剑，正常浓度的次氯酸能够调节细胞内的微环境，维持基本的生命活动，同时也可以在免疫系统中起到防御疾病的效果。然而，过量的次氯酸会导致生命体内生物分子氧化，进而损坏组织的防御系统，造成组织损伤，引发一系列不良的后果，比如心血管疾病、肺损伤、肝脏疾病、动脉粥硬化、关节炎以及各种肿瘤疾病等。此外，由于次氯酸的强氧化性，次氯酸还被广泛的应用于饮用水消毒、废水处理、研发抗菌药物以及生产漂白剂等领域。因此，开发方便、快速的检测次氯酸的方法对于研究疾病的病理以及环境监测都具有重要意义。

2、当前，基于次氯酸检测的方法较多，如碘还原滴定法、分光光度法、化学发光分析法和电化学法等。但上述方法大多操作手续繁琐，给实际操作带来一定的困难。近年来，荧光检测方法因其操作简单、对样品无损性、对检测物可视化等优点，日益受到广泛的关注，被广泛应用于生化分析和环境检测等领域。然而，已经报导过的次氯酸荧光探针往往合成产率低、合成步骤多、花费时间长、综合成本昂贵等缺点。特别是部分探针生物相容性较差，大大限制了其在生物检测中的应用。

3、天然产物是动物(包括海洋生物)、植物和微生物的组成成分或其代谢产物的统称。过去对天然产物的关注，往往聚焦在其生物活性或作为新药发现的重要来源。天然产物往往具有特定的骨架结构，当前，基于天然产物特定骨架的荧光探针研究还较少。

技术实现思路

1、有鉴于此，本发明提供了次氯酸的检测方法。本发明提供了如式i所示的化合物或其衍生物作为荧光探针的应用，以及次氯酸的检测方法。本发明提供了一种来源于天然产物骆驼蓬灵生物碱的次氯酸荧光探针，可以高敏性、高选择性检测次氯酸。

2、为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

3、本发明提供了如式i所示的化合物或其衍生物作为荧光探针的应用：

4、

5、本发明还提供了如式i所示的化合物或其衍生物在clo-检测中的应用：

6、

7、本发明还提供了如式i所示的化合物或其衍生物在次氯酸检测中的应用：

8、

9、在本发明的一些具体实施方案中，所述次氯酸检测包括对细胞外和/或细胞内的次氯酸进行检测。

10、在本发明的一些具体实施方案中，所述次氯酸检测包括对水体中的次氯酸进行检测；所述水体包括：etoh和pbs缓冲液体积比为7:3的溶液，所述水体的ph值包括7.40。

11、本发明还提供了次氯酸的检测方法，以如式i所示的化合物或其衍生物作为探针进行检测；

12、

13、在本发明的一些具体实施方案中，取(i)和(ii)混合，根据产生的荧光强度建立标准曲线；取(ii)和(iii)混合，检测，获得待测样品的荧光强度；根据所述标准曲线和所述待测样品的荧光强度获得所述待测样品中次氯酸的浓度；

14、(i)、不同浓度的次氯酸溶液；

15、(ii)、如式i所示的化合物或其衍生物；

16、(iii)、待测样品。

17、在本发明的一些具体实施方案中，所述检测荧光强度的激发波长包括380nm；所述检测荧光强度的发射波长包括479nm。

18、在本发明的一些具体实施方案中，所述如式i所示的化合物或其衍生物的工作浓度包括10μm。

19、在本发明的一些具体实施方案中，所述检测方法的检测限为2.54×10-6mol·l-1。

20、在本发明的一些具体实施方案中，所述检测方法包括对细胞外和/或细胞内的次氯酸进行检测。

21、在本发明的一些具体实施方案中，采用etoh和pbs缓冲液体积比为7:3的溶液，配置含有如式i所示的化合物或其衍生物的荧光探针溶液；取所述荧光探针溶液和不同浓度的次氯酸溶液混合，采用激发波长380nm，获取发射波长479nm处的荧光强度，建立标准曲线；取所述荧光探针溶液和待测样品混合，采用激发波长380nm，获取发射波长479nm处待测样品的荧光强度，根据所述标准曲线和所述待测样品的荧光强度获得所述待测样品中次氯酸的浓度；

22、所述荧光探针溶液中所述如式i所示的化合物或其衍生物的工作浓度包括10μm。

23、在本发明的一些具体实施方案中，所述检测方法不受干扰物的影响；所述干扰物包括f-、cl-、br-、co32-、hco3-、no3-、no2-、so42-、s2o32-、so32-、hso3-、hs-、cys、gsh、hpo42-、h2po4-、ch3coo-、na+、k+、nh4+、ca2+、mg2+、al3+、h2o2、no、·oh或1o2中的一种或多种。

24、本发明提供了如下有益效果：

25、(1)本发明检测次氯酸的荧光探针对次氯酸检测的选择性高，专一性好。经过荧光分光光度仪检测可以发现，该荧光探针对次氯酸检测灵敏度高，荧光颜色变化效果明显，便于识别。

26、(2)本发明检测次氯酸的荧光探针来源于天然β-卡波林类生物碱骆驼蓬灵，不用复杂的合成，适合大规模推广应用。

技术特征：

1.如式i所示的化合物或其衍生物作为荧光探针的应用：

2.如式i所示的化合物或其衍生物在clo-检测中的应用：

3.如式i所示的化合物或其衍生物在次氯酸检测中的应用：

4.如权利要求3所述的应用，其特征在于，所述次氯酸检测包括对细胞外和/或细胞内的次氯酸进行检测。

5.次氯酸的检测方法，其特征在于，以如式i所示的化合物或其衍生物作为探针进行检测；

6.如权利要求5所述的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：

7.如权利要求5或6所述的检测方法，其特征在于，所述检测荧光强度的激发波长包括380nm；所述检测荧光强度的发射波长包括479nm。

8.如权利要求5至7任一项所述的检测方法，其特征在于，所述如式i所示的化合物或其衍生物的工作浓度包括10μm。

9.如权利要求5至8任一项所述的检测方法，其特征在于，包括对细胞外和/或细胞内的次氯酸进行检测。

10.如权利要求5至9任一项所述的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：

技术总结
本发明涉及探针分析检测领域，特别涉及次氯酸的检测方法。本发明提供了如式I所示的化合物或其衍生物作为荧光探针的应用，以及次氯酸的检测方法。本发明所述的荧光探针是一种化学结构简单并且直接来源于天然产物。该探针化合物对次氯酸具有很好的选择性和灵敏性，且可以应用于细胞内的的检测和成像。

技术研发人员：周厚成,方玉宇,彭成,郑东滨,邓赟
受保护的技术使用者：四川新绿色药业科技发展有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/5/16