一种荧光微珠网格标记的蛋白质结晶板的制作方法

本发明涉及荧光鉴定的结晶容器，尤其涉及荧光微珠网格标记的蛋白质结晶板的制作方法。

背景技术：

1、在蛋白质结构学中，如何快速获得蛋白质晶体并进行标记鉴定是解析结构当中的关键。现有的无侵入检测方法主要是光学成像法，蛋白质富集处可以被紫外荧光检测到，蛋白质晶体会在紫外波长下产生荧光信号，但实际检测过程，存在如下问题：

2、1、筛选蛋白质晶体时并不容易获得尺寸较大的蛋白质晶体(500微米)，一般都会获得较少尺寸且形貌不标准的晶体，为后续衍射考虑，希望能够在蛋白质结晶板中直接进行原位检测，所以首先如何从蛋白质结晶液滴当中标记鉴别一直是一个难点。

3、2、传统的96孔蛋白质结晶板的结构设计(目标晶体离正置显微镜检测的工作距离较远)不适用于高精确的检测，特别是微米尺寸晶体，非常难获得快速的精确鉴定，并且不能进行无侵入的原位衍射；虽然有微流控结晶板能够降低检测光镜与样品的距离(适合正置与倒置显微镜观察)且可带标记也有进行原位衍射的可能，但在无明场的荧光显微镜无法通过标记去定位，并且设计与制造费用价较高；

4、3、现在用于能够原位衍射的lcp三明治结晶板(由底部玻璃、96孔sbs板、盖玻片组成)，但对于微小尺寸的蛋白质晶体并不能实现实时的鉴定与定位，在后续的衍射中就会花费时间进行衍射，并且价格也不便宜。

技术实现思路

1、本发明的目的是提供一种荧光微珠网格标记的蛋白质结晶板，解决如何能够进行原位标记并进行无侵入的紫外荧光鉴定，并且可以进行衍射实验的结晶容器的问题。

2、为解决上述技术问题，本发明采用如下技术方案：

3、本发明提供了一种荧光微珠网格标记的蛋白质结晶板的制作方法，包括如下步骤：

4、s1、先将一厚度均匀的矩形pvc材料上粘上同面积的双面胶，并使用激光均匀间隔地雕刻出96孔；pvc的底部同1mm的玻片粘连，加上样品后用普通盖玻片贴合；

5、s2、将厚度为0.15mm的pet薄膜用激光蚀刻方格痕迹；

6、s3、将稀释的荧光微珠倒在切好方格的薄膜上，静置20s，然后用酒精清洗表面备用；

7、s4、将涂有荧光微珠的pet薄膜覆盖在有样品的三明治板上，将其一角处使用激光切出直径为3mm的小孔，用暗扣将其连接，以保证pet薄膜可灵活移动；

8、s5、在明场下，观察到所需晶体目标，记下所在定位的字母数字编号，通过再放在荧光显微镜下观察，通过荧光微珠标记的横、纵坐标进行定位观测。

9、优选的，s1中所用pvc材料的尺寸为127.8x85.5x1mm；激光雕刻出的孔洞尺寸为5mm，各个孔洞的间隔距离为5.575mm，其排布同手动排枪与移液机器人加液使用的矩阵形一致。

10、优选的，在s2中，其切割深度0.05mm，切为横项5格，标记a-e，纵项5格，标记为1-5，每格为1*1mm；其中s2中的方格位置对应在s1中开设每个孔洞的上方。

11、优选的，在s3中，先将1微升荧光微珠原液用水配成0.1％的溶液，再将溶液用水稀释500倍备用。

12、优选的，在s5中，若荧光微珠的背景信号太强，可通过暗扣移动pet薄膜，原位观测目标。

13、与现有技术相比，本发明的有益技术效果：本申请中的设计能够进行无侵入的标记并进行原位紫外荧光鉴定，并且此设计可以解决原位衍射实验的结晶容器问题。在生物大分子结构生物学研究时，可通过观察荧光微珠无侵入的标记网格，实现无侵入性标记蛋白质晶体在结晶板上的位置，从而更好地实现检测。在成像测试研究时，其中荧光网格蛋白质结晶板也可用于无明场成像系统、荧光系统的检测中。

技术特征：

1.一种荧光微珠网格标记的蛋白质结晶板的制作方法，其特征在于：

2.根据权利要求1所述的荧光微珠网格标记的蛋白质结晶板的制作方法，其特征在于：s1中所用pvc材料的尺寸为127.8x85.5x1mm；激光雕刻出的孔洞尺寸为5mm，各个孔洞的间隔距离为5.575mm，此排布同手动排枪与移液机器人加液使用的矩阵形相同。

3.根据权利要求1所述的荧光微珠网格标记的蛋白质结晶板的制作方法，其特征在于：在s2中，其切割深度0.05mm，切为横项5格，标记a-e，纵项5格，标记为1-5，每格为1*1mm；其中s2中的方格位置对应在s1中开设每个孔洞的上方。

4.根据权利要求1所述的荧光微珠网格标记的蛋白质结晶板的制作方法，其特征在于：在s3中，先将1微升荧光微珠原液用水配成0.1％的溶液，再将溶液用水稀释500倍备用。

5.根据权利要求1所述的荧光微珠网格标记的蛋白质结晶板的制作方法，其特征在于：在s5中，若荧光微珠的背景信号太强，可通过暗扣移动pet薄膜，原位观测目标。

技术总结
本发明涉及荧光鉴定的结晶容器技术领域，尤其涉及荧光微珠网格标记的蛋白质结晶板的制作方法；本申请中能够进行原位标记并进行紫外荧光鉴定。在蛋白质晶体鉴定研究时，可通过观察荧光微珠的标记网格，实现无侵入性标记蛋白质晶体在结晶板内的位置，从而更好地实现检测。同时在成像测试研究时，荧光网格蛋白质结晶板也可用于无明场成像系统中的定位标记。

技术研发人员：成清涤,纳宁,刘硕儒,郑桐,谭玉琴,张锐
受保护的技术使用者：中山大学附属第三医院
技术研发日：
技术公布日：2024/4/22