本发明涉及药物检测，具体为一种维生素b1中间体烯胺含量的检测方法。
背景技术：
1、烯胺，化学名：α-(邻-氯苯基)-氨亚甲基-β-甲酰胺基丙腈)，结构式为是维生素b1生产过程中的一个中间体，其含量测定可以采用紫外-可见分光光度法、hplc法等常用方法，现在采用的是紫外-可见分光光度法对照品比较法测定烯胺样品的含量，烯胺对照品是通过精制烯胺样品后制得的工作对照品，在测定过程中发现样品含量差别很大，有时只有89％，有时可能会达到102％以上，不能很好的指导生产。通过液相色谱检测发现烯胺在hplc色谱图中呈现双峰，且两峰的面积百分比不固定，由于其分子结构中含有双键，有顺反异构体两种结构，两种结构在特定波长下的紫外响应值存在一定的差异性，且由于生产过程中工艺参数(如ph值、温度等)的微小变化，都可导致两种结构的比例不一致，而对照品和样品中两峰的比例可能不一致，导致分析结果不能反映样品的真实含量；通过用hplc法外标法测定，结果差别也很大，与紫外-可见分光光度法基本一致，不能很好的测定样品的含量。
2、因此，有必要提出一种维生素b1中间体烯胺含量的检测方法，克服现有技术检测结果准确性差的缺陷。
技术实现思路
1、本发明提供了一种维生素b1中间体烯胺含量的检测方法，通过制备色谱将烯胺中两种异构体分离，制备两种结构的对照品，再用hplc外标法测定样品的含量，克服现有技术含量测定准确性差的缺陷。
2、有鉴于此，本发明的方案为：
3、一种维生素b1中间体烯胺含量的检测方法，所述检测方法使用hplc法，色谱条件为：色谱柱填充十八烷基硅烷键合硅胶，流动相为体积比(36-44):(56-64)的乙腈和水的混合液，流速0.9-1.1ml/min，检测波长为285-289nm，柱温为38-42℃；
4、所述检测方法包括如下步骤：
5、烯胺对照品的制备：将样品进行制备色谱进样，分别按照出峰顺序收集烯胺的顺式异构体与反式异构体组分，再旋转蒸干，分别制得烯胺顺式异构体、烯胺反式异构体对照品工作液；
6、烯胺含量的检测：将样品进行色谱进样，根据色谱图按外标法计算烯胺的含量：烯胺的含量＝烯胺反式异构体峰面积乘以校正因子+烯胺顺式异构体峰面积；
7、所述烯胺为α-(邻-氯苯基)-氨亚甲基-β-甲酰胺基丙腈，结构式为：
8、
9、进一步地，所述检测过程中，分别绘制烯胺反式异构体、顺式异构体的标准曲线，所述校正因子为顺式异构体的标准曲线与烯胺反式异构体标准曲线的系数比。
10、进一步地，所述校正因子为0.82。
11、进一步地，所述烯胺含量检测过程进样量为10μl。
12、进一步地，所述样品和/或对照品工作液浓度为20--200μg/ml；优选地，工作对照液的稀释剂为流动相。
13、进一步地，所述色谱柱为xb-c18 4.6mm*250mm*5um。
14、进一步地，所述色谱条件为：流动相为体积比40:60的乙腈和水的混合液，流速1.0ml/min，检测波长为2887nm，柱温为40℃。
15、与现有技术相比，本发明具备以下有益效果：
16、本发明提供的检测方法通过制备色谱将中间体烯胺的两种异构体分离，制备两种结构的对照品，再用hplc外标法测定样品的含量，经方法学验证，专属性、线性关系、精密度、重复性及稳定性均良好，能够满足维生素b1中间体烯胺含量的准确测定，克服现有技术含量测定准确性差的缺陷，为指导维生素b1生产提供检测依据。
1.一种维生素b1中间体烯胺含量的检测方法，其特征在于，所述检测方法使用hplc法，色谱条件为：色谱柱填充十八烷基硅烷键合硅胶，流动相为体积比(36-44):(56-64)的乙腈和水的混合液，流速0.9-1.1ml/min，检测波长为285-289nm，柱温为38-42℃；
2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述检测过程中，分别绘制烯胺反式异构体、顺式异构体的标准曲线，所述校正因子为顺式异构体的标准曲线与烯胺反式异构体标准曲线的系数比。
3.根据权利要求1或2所述的检测方法，其特征在于，所述校正因子为0.82。
4.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述烯胺含量检测过程进样量为10μl。
5.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述样品和/或对照品工作液浓度为20--200μg/ml。
6.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述色谱柱为xb-c18 4.6mm*250mm*5um。
7.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述色谱条件为：流动相为体积比40:60的乙腈和水的混合液，流速1.0ml/min，检测波长为2887nm，柱温为40℃。