专利名称：用于单步骤分析全血的方法与装置的制作方法
技术领域：
本发明涉及分析生物液体样品的方法与装置，具体而言，本发明涉及检测全血样品中分析物的方法与装置，该样品不需在进行分析之前将细胞部分自样品分离出来。
用于分析多种体液的充满试剂的毛细管膜的发展，早已促使简便使用且快速产生结果(即10分钟之短或更短)的测试装置的生产。或许这类装置最常见的应用是用于测定人类绒毛膜促性腺激素，其是作为人类怀孕的指标。这类装置的范例在常引用的美国专利第5,384,264号，EPO公开0560411A2,PCT申请PCT/GB/00322与美国专利第4,366,241号中有说明。这类装置的最简单型式中，可在单一步骤中允许分析法进行且判读结果；例如将液体样品(诸如尿液)置于吸收性膜上，其中任何待分析物则与对应配体(ligand)结合，并且结果(即特定复合体的形成)在与样品置放区分隔的测试区内显见。
虽然这类装置分析液体样品运作良好，这些液体样品传统上不含有大细胞，因此可借毛细管等作用快速通过充满试剂的膜，但是这类装置至今尚未适用于检测含有大细胞的液体(例如全血)中分析物的分析法上。换句话说，分析全血中存在的分析物在传统上是用基本上无细胞的血浆或血清部分进行，因此这类分析需要在进行分析法之前，除去样品中的红细胞和其它细胞。
美国专利第5,304,468号中描述的装置表面上避免了分析分析物(特别是葡萄糖)之前将血浆或血清部分由全血分离的需要。所述的装置是一种试条，包括对照细胞导入处与测试表面，后者充满试剂。阳性或阴性结果是由测试表面上折射比的改变而显示，其由视觉测定。根据此揭示，测定折射比的改变不受测试样品中红细胞存在的影响，因此全血样品可施加至样品导入处表面。然而，因为结果是测定折射比的变化，因此需要光学测量装置来实施使用其揭示装置的分析法。
本发明是由进行单步骤分析法的装置与方法组成，借此检测含有细胞的液体样品中的分析物，但不需要在进行分析之前将无细胞液体部分与样品中的细胞分开。再者，本发明不需要使用疏水性薄膜来阻挡样品中的细胞组分或随后的清洗步骤，借此将被阻挡的组分由分析装置除去。此外，根据本发明进行的分析结果可目视判读，不需使用另外的测量仪器且与测试样品的折射比无关。因此，进行本发明的分析法只需要使用者将所需量的测试样品(优选是全血)导入本发明的装置，然后观察装置的测试区中随后快速显见的任何颜色变化等等。
至此，本发明装置包括在入口一端的样品贮器垫，其用于将测试样品导入亲水性样品导入膜。此样品贮器垫优选是多层亲水性网，其具有比分析物样品中细胞的预期直径更小的有效直径的孔，此亲水性网置放成与样品导入膜有液体相通。因此，使用时只有测试样品的液体部分会通过样品贮器垫而进入样品导入膜。依序地，进入样品导入膜的液体通过此导入膜而进入充满试剂的染料区，接着进入测试区和对照区。本发明装置的最佳实施方案中，使用目视可测得的特别染料(例如由含金属的无机物化合物组成的溶胶)，由此得知阳性或阴性测试结果。
本发明装置可呈任何适合的形状或形式，包括含有此装置的多种成分的试条与试匣。
根据本发明的方法，少量测试样品(优选是全血)逐滴吸取或添加，或以其它方式(例如直接与采血打孔的手指接触)添加至样品贮器垫。样品中存在的任何分析物(不与具有被分离细胞组分的膜结合)与一种或一种以上特定配体结合的现象，会形成显示测试结果的特定可见图案。
本发明可用于测试液体样品中存在的任何分析物(例如全血中的可溶性抗原)，其中至少一种特定配体(即结合配对物(bindingpatner))是已知的(例如多克隆或单克隆抗体)。本发明特别可用来检测单抗原决定位或多抗原决定位的抗原和抗体，该抗体和抗体与传染性或非传染性病理学及生理学化合物及药物有关。本发明装置虽然特别适用于分析全血样品，其亦可用于分析其它液体样品，特别是样品中已知会存在近似大小的细胞或其它干扰颗粒时。
为了利于了解，下列定义适用于此说明书全文；a)分析物含有一个或一个以上结合位点(例如抗原决定位)的分子或化合物，该结合位点即为另一分子或化合物与之结合之处。
b)配体与结合配对物可与分析物的特定结合位点结合而形成“结合对”的分子或化合物。任何希望的分析物/配体结合对均可用于本发明。结构上而言，配体上可包括蛋白质、肽、碳水化合物、多糖、核酸、寡核苷酸、半抗原及其组合。功能上而言，配体可包括(但不受此限制)抗体、抗原(例如，微生物抗原、前列腺特异抗原)、激素(例如，甲状腺刺激激素)、药物、酶、过敏原及片段，修饰物以及其组合。本领域技术人员熟悉或可容易确认这类配体及对应结合配对物。
c)测试样品推测含有待分析物的液体，针对此液体将有特异的分析法进行。
d)标记物直接或间接促成信号形成(例如颜色变化)的分子或化合物，其是在分析法中用以指出测试样品中所欲分析物的有或无，或其浓度范围。标记物可包括酶、萤光素、脂微粒、红细胞血影细胞、聚合物微胶囊、显色聚合物颗粒(树乳)，且优选包括含有金属化合物的溶胶。
e)金属标记物含金属的溶胶标记物；即金属或金属化合物，诸如金属氧化物、金属氢氧化物、与聚合物混合或涂覆在聚合物核心上的金属盐、金属或含金属的化合物。这些金属标记物可包括上述金属或金属化合物溶胶的无水形式，优选包括无水形式的胶态金。
f)复合体根据所用的内容，“复合体”应表示由分析物与一个或一个以上配体，标记配体或固定化配体所形成的任何多分子复合体。在夹心免疫分析法中，举例而言，形成下列复合体分析法中首先产生的分析物/标记配体的双体(“第一复合体”)，及分析法中第二个形成的分析物/标记配体/固定化配体三元体(“第二复合体”)。
g)细胞组分表示细胞膜与细胞内构造，例如线粒体与细胞核。
h)非细胞部分表示测试样品的液相，包括样品中存在的任何分析物，以及不被本发明装置的样品贮器垫捕获的细胞组分。
虽然本发明的装置可采用任何形状或构造，其包括本发明的材料元件，在功能考虑上则建议装置的较佳构造是内附本发明装置的内部组分的试条与试匣。因此，本发明的装置在本说明书中被描述为试条与试匣型(cassette)装置，当然可了解本发明不受这些特别构造的限制。
图1是本发明的试条的展开图。
图2是本发明的试条的透视图。
图3是图1中线条3-3的放大拆卸图，其是通过含有样品贮器垫1层面观之。
图4是本发明的试匣装置的透视图。
图5是本发明的试匣装置的展开图。
图6是本发明的试条(无盖者)的透视图，其显示测试区中的目视结果，表示样品中有分析物的存在。
图7是本发明试条(无盖者)的透视图，其显示测试区中另一种目视结果，表示样品中没有分析物的存在。
根据本发明所构成的试条示于图1。在图1的左边，样品贮器垫1示为层状网，其覆盖在样品导入膜3上。施加测试样品至样品贮器垫是通过封盖5上的窗口4达成。封盖5是薄层物或薄膜，其是由延伸覆盖试条整个上方表面或覆盖试条部分区域的疏水性材质组成。封盖5纳入了窗口4。虽然封盖5可自试条省略，但欲避免样品贮器垫1污染且防止样品贮器垫与样品导入膜3分开，封盖5有助于通过窗口4而正确添加样品，因此，包含封盖5的本发明试条是较佳的。相对封盖5的是薄且疏水性的基质6。基质6是作为上述试条的所有功能性组分的固定支持物，及作为防止液体通过装置底面而流出试条之外的屏障。适用作为封盖5与基质6的物质包括纤维素衍生物、聚乙烯与聚丙烯化合物，以及其它固体聚合物，其可用于形成封盖5与基质6，或用来作为涂覆剂，当封盖5与基质6是由不同材质(例如纸)构成时。封盖5与基质6在试条上的较佳置放方式示于图2。
样品贮器垫1的结构进一步详示于图3。如图3所示，样品贮器垫是由多层纤维(由纤维6a与6b表示)组成，这些纤维呈重叠十字交叉面排列形成一网(重叠纤维之下层示于内部构造中)。由重叠纤维形成的孔绝不能大于，优选小于测试样品中红细胞或其它细胞的预估直径。为便于过滤，样品贮器垫的纤维层上层的孔大小可与纤维层下层的孔大小不同。本发明中，样品贮器垫中有些层面最小孔大小表示为样品贮器垫的有效孔大小。以人红细胞为例，平均直径是7.7微米且平均厚度约2微米。为便于理解，本说明书中，样品贮器垫中欲分离的细胞意指红细胞，但可明了本发明不局限于使用含有红细胞的测试样品。
如图3所示(未示比例)，样品贮器垫的任何孔(由孔7代表)所具有的有效大小是稍小于被捕捉的细胞的大小(由图3中的细胞10代表)。形成每个孔的边界的纤维呈聚密地编织，如此才不致在接触测试样品时变形；换句话说，才不致扩大孔大小。为使细胞有效分离，一般样品贮器垫1的有效孔大小优选小于欲予捕捉细胞的预期直径至少10％。更小的孔亦可用来增强本发明装置捕捉细胞组分与完整细胞的能力。孔大小绝对不应太小以致于测试样品中的非细胞液体部分通过受阻，使其不能流过孔至样品导入膜。
本领域普通技术人员将可理解，若测试样品中存在的红细胞或其它细胞不是预期大小，当小于预期大小时，会通过样品贮器垫1的孔。因此，为了提高样品贮器垫1的捕捉细胞效力，应至少2层，较好3层以上的重叠纤维一层一层地以横向摆放的叠积方式来形成样品贮器垫。
再者，虽然整齐重叠的纤维示于图3，本领域技术人员应理解随意摆放的纤维亦可用于样品贮器垫1。这种构造下，并非所有孔都有均一大小。因此，施加至样品贮器垫1的分析物样品中的红细胞有可能通过一层或多层重叠纤维。样品贮器垫中每层重叠纤维应横向摆放，如此不被表层捕捉的细胞可在贮器垫的较深层被捕捉。因此，优选在样品贮器垫中包含至少三层重叠纤维。为了使测试样品的非细胞液体部分快速浸透样品贮器垫而渗入样品导入膜，样品贮器垫优选具有0.1微米至3微米的总厚度。样品贮器垫的样品添加区表面积(即可通过图1所示窗口4施加测试样品的面积)应根据测试样品体积与施加方法而改变；欲根据本发明测试绝大多数全血样品时，预期表面积约3平方毫米至25平方毫米是合适的。
样品贮器垫的纤维并非必须具有某一特定电价或独特的厚度才可捕捉红细胞。然而，为了协助测试样品的非细胞部分通过样品贮器垫而达样品导入膜，样品贮器垫优选有些亲水性，如此液体才不会被排斥而致不能浸透贮器垫的孔。具有上述特性的任何纤维性材料均可用来作为样品贮器垫。具多层尼龙或纤维素滤膜材质(例如硝化纤维素)的预成形垫子或试条是适合采用的。
返回图1，样品导入膜3位于样品贮器垫1之下并与其液体相通。本说明书中，“液体相通”表示彼此有接触，但不必要固定住的结构。优选地，样品导入膜比样品贮器垫有更多孔，且同样地更具亲水性以利液体由样品贮器垫单向流动过来。换句话说，形成样品贮器垫所用的材料亦可形成样品导入膜，其是作为样品贮器垫下方的其它层面。如图1所示，样品导入膜3完全位于样品贮器垫1下方。然而，一旦图1试条的全部结构经过说明，本领域技术人员应理解样品导人膜可在样品贮器垫下方，以液体流向充满试剂之膜20的方向延伸。同样地，样品导入膜的尺寸可与样品贮器垫的尺寸有些不同。在任一构形中，样品导入膜与样品贮器垫应彼此液体相通。
当样品导入膜是具有比样品贮器垫更多孔的另一种材质时，可使用任何吸收性、多孔性、吸取性或者亲水性材料形成该膜。这类材料的范例是现有技术中公知的，包括紧密编织的纸，硝化纤维素，玻璃纤维与多孔塑料，例如高分子量的聚丙烯与丙烯腈。优选的材料的多孔性应足以在数秒钟内吸附血液中约20至40微升液体组分。下文将进一步说明使用本发明试条的方法，缓冲液优选在分析法进行时亦添加至样品导入膜的近端，以协助相当少量的分析物通过试条的多种膜而前进。因此，缓冲液区13以阴影线示于图1，其可以是充满染料之膜和/或样品贮器垫分别向样品贮器垫近端延伸的区域。本发明范围内的有些装置不使用缓冲液，所有液体的流动由来自测试样品的液体推动。尽管如此，为使所需测试样品的体积至最小且加快分析速率，使用缓冲液的实施方案是较佳的。
样品导入膜与充满染料之膜15呈液体相通，该染料是一种经标记物标记的配体。更特别地，一种或多种经标记物标记的配体(例如抗原或抗体)，由使用本领域技术人员公知的可溶性氨基硅烷类或其它适合的结合方式而结合至多孔性、吸收性或吸取性膜上。较佳的膜材料是玻璃纤维，例如Lydall公司以“MANN IWEB”或“MANNIGLAS”为商标而上市的产品。其它适合的材料包括聚乙烯或硝化纤维素垫子与试条；用于将配体结合在这些材料上的方法是本领域公知的。或者，充满染料之膜可以是样品导入膜的一部分。但为了将标记配体回流至样品导入膜的情形减至最低，优选的是充满染料之膜是一个分开的结构，最好将具有纤维的纤性材质(例如上述玻璃纤维)置放如下所述的充满试剂之膜的同一方向。
经标记物标记的配体可根据本领域已知的方法制备。欲产生清晰可见的反应，优选的标记物是含有金属溶胶的标记物，其中具有胶态金或硒的标记物是最佳的。适合产物的例子有得自Janssen LifeScience Products公司的胶态金。这些胶态金属会产生可鉴别的目视图案且不需添加其它试剂；然而，萤光素类(例如萤光素)与酶类(例如美国专利4,275,149所述的酶，其并入本说明书中作参考)亦可使用。为了使测试样品与经标记物标记的配体有最充分的接触，被后者占据的区域(染料区)应横跨膜面，即染料区应由膜的一端延伸至另一端。
第一固定配体是固定在充满试剂之膜20(其紧临充满染料之膜)的测试区21中的配体。其将是样品测试区的位置。充满试剂之膜20优选是涂覆明胶的多孔性试条，明胶有助于延长试条的寿命并可增加测试中产生的任何可见反应的清晰度。第一固定配体可根据本领域已知方法而不能移动地结合至充满试剂之膜20，包括共价连接或交联在不溶性的由蛋白质涂覆的表面上(参见美国专利第4,200,690，该专利揭示的内容并入本文作参考)。
优选地，被第一固定配体占据的区域具有棒状或椭圆形的形状，由测试区21中充满试剂之膜20的一端延伸至另一端。使用简单且单向的构形，例如棒状，避免了使用者决定更复杂形状(例如“+”或“-”)是否已充分形成而足以表示特定结果。再者，使用简单的形状克服了精细边界作用的挤压并使得反应结果的目视判读对使用者而言更简易。
在充满染料之膜15的远端，第二固定配体位于充满试剂之膜的对照区22中。第二固定配体应对至少一种经标记物标记的配体具有特异亲和力。第二固定配体的固定化反应可使用上述结合第一固定配体的相同方法进行。为了便于比较，对照区22的形状与定向应与测试区的形状与定向类似。本领域技术人员知道，在充满试剂之膜20上的测试区21与对照区22的位置可予以互换，如此前者在充满染料之膜15的远端而后者在近端。
吸收垫23与充满试剂之膜呈液体相通，其是作为过量液体的积蓄处，以及提供液体沿着充满试剂之膜20呈单向流动的抽吸作用。为达后述目的，吸收垫优选在其远端且远离对照区，与充满试剂之膜有重叠。本领域技术人员将明了，本发明的一些实施方案可不包括吸收垫。吸收垫的功能可由，例如充满试剂之膜20的延伸远端来完成。然而，为达最佳表现，纳入吸收垫的实施方案较佳。
试条的使用说明可印在封盖上或在试条的包装上，和/或印在与试条一并包装的说明书上。优选地试条是试剂盒的一部分，此试剂盒可由试条、使用说明、干燥包装袋、测量测试样品的毛细装置、缓冲液、测量缓冲液的吸管及反应器组成，该容器例如为一只杯子，在分析物样品施加至测试样品之后，杯内置放缓冲液与试条的缓冲液导入区。这类用于进行分析法的试剂盒的组件(例如不包括印刷说明书)优选密封在一个或多个空气密闭的包装内，例如铝箱包装。
另一种实施方案可为试匣装置。
优选地，上述有关本发明试条的所有组件(除了封盖5与基质6)可装入一保护鞘内，此鞘由一固体塑料封盖25组成，其紧密地固定在图4所示的固体塑料底座26之上。添加测试样品至样品贮器垫上方的入口27贯穿封盖25。较佳实施方案中，施加缓冲液至装置的入口28亦贯穿封盖25。然而，另一种实施方案中，测试样品与缓冲液是经由相同的入口添加，此亦属于本发明范围之内。展现口29亦贯穿封盖25，其用于观看充满试剂之膜20。
用于本发明的特别优选的试匣设计揭示在常被引用的美国专利第5,384,264号，其揭示内容并入本文作为参考。简言之，根据第5,384,264号专利组装的试匣装置示于图5的展开图。此图中，可见底座26被分割成两个不同区域，第一区为低洼区30，其由底表面31，侧壁32与斜面33界定其范围。较佳实施方案中，有一垂直棒(未显示)由封盖25向下延伸至低洼区30，正好紧临斜面33，如此可将充满染料之膜15沿着斜面33定位。
底座26的第二区由斜面33的顶端开始，其由形成平台36的延伸表面组成，该平台与低洼区30平行且由该区延伸向外。液体小沟40优选包括在平台36的近端，其作为过量液体的另一积蓄处。平台36可将基底26的长度由斜面33开始延伸，其可终止在稍短于基底26远端之处，如此留下一空间可让第二液体小沟41收集过量液体。充满试剂之膜是沿着平台36的绝大部分长度置放(位于相反位置的展现口29的下方)，而吸收垫23位于平台36的远端，其可延伸盖过液体小沟41。干燥锭可置入液体小沟41中。干燥剂可提供低湿度条件，此乃装置展售期间保存试剂所必须的。换句话说，干燥锭或干燥包装可与装置一并纳入空气密闭的保护性封袋内。
测试样品可代表任何体液，包括血液、尿液、淋巴液、腹水、粗制组织萃取液或均质液，这些体液源自胎儿、新生儿、青少年或成人，但优选是微血管或静脉全血。对于绝大多数的应用，约5微升至50微升测试样品即足以用于本发明，优选是20微升至30微升。
本发明方法的进行是将测试样品添加至根据本发明构成的装置(试条或试匣)的样品贮器垫。欲测定含有(或怀疑含有)细胞组分的测试样品时，要提供充分时间让细胞与非细胞部分分开，通常约60至120秒。上述步骤完成之后，经由装置的缓冲液区或其入口添加缓冲液。
缓冲液所添加的体积必须限制在避免将测试样品洗掉。一般而言，少于5滴(较好3大滴)缓冲液即足以用来推动测试样品沿着测试装置的膜前进。合适的缓冲液包括任何药学上可接受的缓冲水溶液，其不与测试样品或其组分反应。本领域技术人员对这类缓冲液，包括生理盐水，林格氏液等等，相当熟悉且可轻易确定。缓冲液可逐滴添加至缓冲液入口(针对试匣型装置)，或者将所需体积的缓冲液置入反应容器(杯子)，然后将试条的缓冲液区浸入(针对本发明的试条实施方案而言)。测试样品与缓冲液两者皆应在室温下添加至装置。
添加测试样品与缓冲液之后，结果在约10分钟后即可判读。不需使用缓冲液的实施方案中，结果显示较慢，其取决于测试样品中非细胞部分通过测试装置的膜的流动速率。不使用缓冲液，约在当其对照区出现一带状图案的同一时间判读结果。若不出现带状图案，或者对照的带状图案无法区别或未完全形成时，该分析应视为不能表示测试样品中有或无分析物，故应再进行分析。
更详细说明，夹心分析法中，测试样品中待分析物若存在，将会与染料区的标记配体结合，形成第一复合体。第一复合体及未结合的标记配体将与测试样品混合且由毛细作用(“蕊吸作用”)通过充满染料之膜(染料区)，被携至装置中充满试剂之膜。
样品携带着第一复合体(若存在)通过充满试剂之膜而与充满试剂之膜上固定的未标记配体接触，该配体用于结合第一复合体而形成标记配体-分析物-固定配体的第二复合体。若形成了第二复合体，目视可见的有色图案将会出现在测试区。
未与测试样品中分析物结合的标记配体会继续由蕊吸作用游动至对照区并与该处固定配体接触。标记配体与对照区内的固定配体结合而形成第三复合体，由此而被捕获在对照区内。本发明范围内，对照区内形成复合体的标记配体可与形成第一与第二复合体的标记配体相同，或者其可为另一种标记配体。固定在对照区的配体应具有特异亲合力，以结合意图形成第三复合体的标记配体。第三复合体的形成由对照区内的可目视图案显示。
除了夹心式免疫分析法之外，其它分析法亦可应用本发明的装置。这些方法可包括竞争分析法与抑制分析法。
竞争分析法中，分析物与标记配体具有类似的亲和特性，故竞争与固定配体结合。如此，若无分析物，测试区内的图案(例如带状)会有最高强度。若有分析物，分析物会结合固定配体，因此阻止标记配体被捕获在测试区内。缘此之故，测试带状图案的强度会随测试样品中分析物的浓度而降低。
抑制分析法中，测试区中的分析物与固定配体对标记配体具亲和力。若无分析物，标记配体会被固定配体捕捉而在测试区内形成一可目视图案。若有分析物，分析物会与标记配体结合，因此阻止分析物与测试区内的固定配体结合。所生成的测试用带状图案的强度则随测试样品中分析物的浓度而降低。
本发明范围内的所有分析物皆可设计成以下两种模式之一，以判读测试结果；即目测鉴定模式与比较模式。目测鉴定模式中，正或负结果(有或无超过特定浓度的分析物)是由测试区内特定图案或颜色予以决定。对照区内的图案仅作为装置功能的内部对照。比较模式中，正或负结果是由目视比较测试区与对照区所形成的图案强度而得。在后述情况中，对照区图案是作为内部品质对照，同时也作为判读比较模式的结果的参考标准。
目测鉴定模式的测试结果范例示于图6、7。如图6所示结果，正结果是由形成测试区21与对照区22的类似平行棒状图案而监知。相反的，如图7所示，负结果是由只出现在对照区22的可辨别的平行棒状图案而监知。
可提供其它对照用或比较用的结果信号，包括显示是否获得无效结果的信号，其由本领域已知的类似方法达成(参见，欧洲专利申请第8611367.0号(公开号021740392)所述的信号系统)。
本发明可应用在测定广泛多种分析物的装置与程序上。兹举分析物的种类为例，下列可被提及蛋白质与蛋白质衍生物，包括抗体、免疫球蛋白、激素、酶、肽；传染性病原，包括细菌、病毒、真菌、霉浆菌(myoplasma)、寄生虫与其产物及组分；药物，包括治疗用药品和毒品；癌症标记。特别的范例有抗HIV抗体，抗幽门螺旋菌(H.pylori)的抗体，抗C型肝炎病毒的抗体，人类绒毛膜促性腺激素，雌二醇、胸腺刺激激素、前列腺特异抗原、B型肝炎病毒表面抗原、肌血红素、免疫球蛋白E。
说明本发明的实施例如下所示，此实施例不应用来限定本发明的范围，本发明范围由所附的权利要求书限定。标准缩写(例如“h”为小时的缩写)及测量单位(例如“ml”表示毫升)用于实施例。
实施例1人类血液中抗细菌抗体的测定微血管全血的测试样品得自成人，其使用指针打孔的公知采样技术。将约20微升血液与根据本发明所构成的试条的样品贮器垫表面直接接触，后者包含多表位的微生物抗原试剂(幽门螺旋菌试剂)，其与抗幽门螺旋菌的人类抗体的所有同基因型反应。90秒后，添加三大滴的缓冲液(生理盐水)至试条的缓冲液区，此是将试条浸入含有三滴缓冲液的杯子中而进行。添加至试条的测试样品与缓冲液在添加时皆为约15-30℃的温度。
添加缓冲液之后，令试条静置室温缓冲液杯中，历10分钟。在试条的测试区与对照区看见有色的两条带状图案，表示其为胜任之测试(由对照区内对照用带状图案出现而监知)且对测试样品中的抗幽门螺旋菌抗体呈正反应(由测试区中显色的带状图案而监知)。然后根据公知生物废弃物处理技术，丢弃此试条与全部未使用的测试样品。
实施例2全血中前列腺特异抗原的测定静脉全血的测试样品得自成人，使用公知血样采集技术，即静脉内导管。将约20微升测试样品汲取而置于根据本发明所构成的容器装置的样品贮器垫上，后者含有对人类前列腺特异抗原具特异性的单克隆抗体试剂。90秒之后，用吸管将三大滴缓冲液(生理盐水)逐滴加至样品贮器垫。添加至试条的测试样品与缓冲液在添加时皆为约15-30℃的温度。
添加缓冲液之后，令装置在一平坦的水平表面上室温下静置10分钟。两条有色带状图案出现在试条的测试区与对照区，表示其为胜任的测试(由对照区内对照用带状图案的出现而监知)且对于测试样品中人类前列腺特异抗原呈正反应(由测试区中显色的带状图案而监知)。然后根据公知生物废弃物处理技术，丢弃该装置与所有未使用的测试样品。
本发明已充分说明，对于上述实施方案的改良是本领域技术人员显而易知的。这类改良全部视为本发明的一部分且纳入所附权利要求书中的范围内。
权利要求
1.一种用于分析血液测试样品的装置，该样品含有细胞，细胞组分及预期含有的待分析物，该装置包括(1)样品贮器垫，其具有足够的孔隙度与容积以容纳待进行测试的血液样品，并且由至少三层的重叠纤维组成，该重叠纤维所形成的有效孔小于测试样品中任何细胞的最小预期直径至少10％；(2)样品导入膜，其由多孔吸收性材料构成，位于样品贮器垫下方并与样品贮器垫呈液体相通；(3)充满染料之膜，位于样品贮器垫的远端，其是由多孔吸收性材料构成并与样品导入膜呈液体相通，该膜含有染料，此染料为经标记物标记的配体；(4)充满试剂之膜，其由多孔吸收性材料构成，位于充满染料之膜的远端并与充满染料之膜呈液体相通，其上具有一个对照区与至少一个测试区，该对照区与测试区内分别含有分布呈设定图案的试剂，此试剂为一固定配体；至少一种经标记物标记的配体，其位于充满染料之膜内，该配体能够与分析物结合，或者与分析物竞争结合测试区内的固定配体；测试区内的固定配体，其能够结合分析物或经标记物标记的配体；及对照区内的固定配体，其能够结合至少一种经标记物标记的配体；其中样品导入膜，充满染料之膜与充满试剂之膜各自位于疏水性基质之上。
2.如权利要求1的装置，其中在至少一层的纤维对纤维之间的有效孔大小不超过8微米。
3.如权利要求1的装置，其中在至少一层的纤维对纤维之间的有效孔大小不超过2微米。
4.如权利要求1的装置，其中样品贮器垫位于样品导入膜之上。
5.如权利要求1的装置，其中样品导入膜具有等于或大于样品贮器垫的有效孔大小。
6.如权利要求1的装置，其中样品贮器垫由选自下列的亲水性材料组成，所述材料包括纤维素衍生物，尼龙，玻璃纤维及其组合。
7.如权利要求1的装置，其中样品导入膜由选自下列的亲水性材料组成，所述材料包括纤维素衍生物，尼龙、玻璃纤维及其组合。
8.如权利要求1的装置，其进一步包括覆盖该装置的样品贮器垫与膜的疏水性封盖，其中该封盖具有至少一个贯穿封盖的窗口，该窗口位于样品贮器垫上方。
9.如权利要求1的装置，其中该基质是试条。
10.如权利要求8的装置，其中基质与封盖形成包含该装置的样品贮器垫与膜的保护鞘。
11.如权利要求10的装置，其进一步含有吸收性材料与充满试剂之膜呈液体相通。
12.如权利要求1的装置，其中该装置的样品贮器垫与膜在试条中的排列，可令测试样品由样品贮器垫，经过样品导入膜、充满染料之膜与充满试剂之膜而流动。
13.如权利要求1的装置，其中充满染料之膜中的标记物选自酶、萤光素、脂微粒、红细胞血影细胞、聚合物微胶囊或显色聚合物颗粒(树乳)，含有金属的化合物溶胶。
14.如权利要求13的装置，其中标记物是胶态金。
15.如权利要求1的装置，其中配体选自抗原、抗体、激素、酶、肽、蛋白质、核酸、寡核苷酸、糖蛋白、碳水化合物、多糖类或其组合。
16.如权利要求1-15中任一项的装置，其进一步含有吸收性材料构成的吸收垫，位于充满试剂之膜的远端且与该膜呈液体相通，通过吸收垫的吸液力促使样品由样品贮器垫区移向充满试剂之膜。
17.如权利要求1-15中任一项的装置，其进一步含有缓冲液区，其由多孔吸收性材料构成，并为充满染料之膜和/或样品贮器垫分别向样品贮器垫近端延伸的区域。
18.如权利要求16的装置，其进一步含有缓冲液区，其由多孔吸收性材料构成，并为充满染料之膜及/或样品贮器垫分别向样品贮器垫近端延伸的区域。
19.一种分析血液测试样品的方法，该样品含有细胞和细胞组份，及预期含有的待分析物，该方法包括下列步骤将血液样品添加至如权利要求1的装置的样品贮器垫上；适当反应时间之后，观察对照区内的目视可见图案与测试区内的目视可见图案；或者比较测试区与对照区内图案的强度；其中对照区内的监别图案表示进行了胜任的分析法，而测试区内的监别图案或其强度则表示测试样品中分析物的有无及其含量。
20.如权利要求19的方法，其中在添加血液样品之后，额外添加缓冲液至装置的缓冲液区，或将装置的缓冲液区浸泡于缓冲液中。
全文摘要
本发明涉及用于分析液体测试样品中待分析物的装置,其中样品含有或预测含有细胞及细胞组分。本发明的装置包括亲水性样品贮器垫,其用来从测试样品的单细胞部分分离出细胞部分。其余部分通过此装置的多孔、吸收性或吸取性膜而移行,该膜至少在三个分隔区域(包括染料区、测试区及对照区)充满着试剂。对照区内形成可鉴别的目视图案即显示此测试适当地进行;测试区内形成或有机对强度的目视图案则显示测试样品中有或无分析物。本发明亦揭示了进行上述发明分析法的方法。
文档编号G01N33/52GK1215163SQ97119039
公开日1999年4月28日 申请日期1997年10月20日 优先权日1997年10月20日
发明者李金波 申请人:李金波