拟黑多刺蚁中棕榈酸和油酸含量的测定方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及药用昆虫中特定成分含量的测定方法，特别是一种拟黑多刺蚁中棕榈 酸和油酸含量的测定方法。
【背景技术】
[0002] 拟黑多刺蚁为药用昆虫拟黑多刺蚁的干燥虫体。 收载于《中华本草》、《中药大辞典》等，产于广西，云南等地。其性平、微温、味咸酸、微腥。拟 黑多刺蚁富含锌、硒、锰、铜、铁等量元素81、82、8633以及28种人体必须的氨基酸，具有 补益肝肾、调理奇经、行气和血、消肿止痛、抗风湿、镇静、消炎、降脂、降糖、抗疲劳、解痛镇 静、改善睡眠的功能及抑制肿瘤等药理作用，能改善全身营养状况，强身益寿。
[0003]研究表明，拟黑多刺蚁有降低痛风模型血清尿酸水平及抗炎作用，而拟黑多刺蚁 脂溶性成分为其降低高尿酸血症模型小鼠血清尿酸水平的成分。拟黑多刺蚁中脂溶性成分 中的主要成分为棕榈酸及油酸，棕榈酸和油酸均为长链脂肪酸，挥发性较差，若直接采用气 相色谱法法对其进行含量测定，则有可能气化不完全，导致测量出现偏差。
[0004]目前，尚无拟黑多刺蚁中棕榈酸和油酸含量测定等方面的研究内容报道。为了促 进拟黑多刺蚁的深入开发与利用，急需研发一种灵敏度高、重现性好的拟黑多刺蚁中棕榈 酸和油酸含量的测定方法，为拟黑多刺蚁质量标准提供了研究基础。
【发明内容】
[0005]本发明的目的是提供一种操作简便，准确度高，重复性好的拟黑多刺蚁中棕榈酸 和油酸含量的测定方法。
[0006]本发明是这样实现的： 一种拟黑多刺蚁中棕榈酸和油酸含量的测定方法，其特征在于，包括如下步骤： (1)内标储备液的制备： 取正十八烷250mg，精密称定，置于100mL容量瓶中，加60~90°C石油醚溶解并稀释至100ml，即得内标储备液。
[0007](2 )对照品溶液的制备： A)精密称取对照品棕榈酸甲酯100mg、油酸甲酯lOOmg，置于同一 25ml容量瓶中，用 60~90°C石油醚溶解并稀释至25ml，摇匀，即得对照品储备液。
[0008] B)精密量取对照品储备液2ml，置于25ml容量瓶中，用60~90°C石油醚溶解并稀 释至25ml，摇匀，即得对照品溶液。
[0009](3 )供试品溶液的制备： C)取拟黑多刺蚁样品适量，研碎，精密称取样品lg，置于100mL塞锥形瓶中，加入60~ 90°C石油醚IOml，摇匀，置于90°C水浴中回流60min，然后放置冷却。
[0010] D)用60~90°C石油醚补足水浴回流中减失的重量，然后滤过，取2ml滤液至容量 为IOml具塞试管中，加入含有lmol/L氢氧化钾的甲醇溶液2ml，在50°C水浴中震荡加热 15min，取出冷却，加入超纯水3ml，然后将滤液放入离心机进行离心，取上清液，即得供试品 储备液； E)精密量取内标储备液、供试品储备液各0. 5ml置于同一 5ml容量瓶中，加60~90°C石油醚稀释至5ml，摇匀，即得供试品溶液。
[0011] (4)用气相色谱仪、检测器及色谱检测软件配套使用，精密吸取IML供试品溶液和 对照品溶液分别注入气相色谱仪中，测定棕榈酸和油酸的色谱分析图，即得拟黑多刺蚁中 棕榈酸和油酸的含量。
[0012] (5)设定色谱测定条件为：色谱柱为RtxK_5毛细管色谱柱，色谱柱规格为 30mX0. 32mmX0. 25Mm;柱温采用程序升温方式，以15°C/min的方式从80°C升温到220°C后 保持5分钟；柱流量为2. 0ml/min;载气为高纯氦气；进样口温度230 °C;进样量1ML，分 流比10:1。
[0013] F)线性关系的测定：精密吸取对照品储备液0. 1、0. 5、1.0、2.0、3.0、4.0ml于 IOml容量瓶中，加入内标储备液I.Oml,用石油醚稀释至10ml，摇匀；按步骤（5)的色谱条 件下测定，以对照品与内标物的峰面积比（Awms /Aws)为纵坐标，以对照品与内标物浓度 比（C对照品/C_)为横坐标，绘制标准曲线；棕榈酸甲酯的回归方程为Y=0. 9808X-0. 1563 (Y=O. 9994);油酸甲酯的回归方程为Y=L1033X+ 0. 1467 (Y=O. 9994)。结果显示，棕榈 酸甲酯、油酸甲酯分别在〇. 〇399~1. 597吒、0. 0394~1. 576吒范围内线性良好。
[0014]G)精密度的测定：取同一批适量供试品溶液，精密吸取供试品溶液1ML，按步骤 (5)的色谱条件连续进样6次，测定各种成分的峰面积，计算对照品与内标物的峰面积比（A 对照品/A内标），测得A様榈酸酷/A正十八烧的RSD=L7%;A油酸甲酯/A正十八烧的RSD=O. 17%，表明仪器精? 度良好。
[0015]H)稳定性的测定：取同一批适量供试品溶液，按步骤（5)的色谱条件于0、2、4、 8、24h分别测定各种成分的峰面积；结果显示，棕榈酸甲酯、油酸甲酯的峰面积RSD分别为 0. 26%、0. 22%，表明供试品溶液在24h内基本稳定。
[0016] I)重复性的测定：取同一批拟黑多刺蚁样品适量，按步骤（3)平行制备6份供试品 溶液，分别吸取1W，在步骤（5)的色谱条件下进样测定各种成分的峰面积，计算棕榈酸甲 酯及油酸甲酯的平均含量、相对标准偏差（RSD);结果表明棕榈酸甲酯平均含量为22. 0mg/ g;油酸甲酯平均含量为51. 3mg/g，RSD分别为2. 9%、2. 9%，表明该方法重现性良好。
[0017] J)加样回收的测定：精密量取浓度为3. 887mg/ml的棕榈酸甲酯对照品储备液3ml 和浓度为3. 869mg/ml的油酸甲酯对照品储备液7ml，置于水浴上挥干溶剂，平行制备6份， 然后在每1份中加入棕榈酸甲酯含量为22. 0mg/g及油酸甲酯含量为51. 3mg/g的样品 〇. 5g，然后按步骤（3)制备供试品溶液，在步骤（5)的色谱条件下测定各种成分的峰面积， 计算回收率。结果见表1、表2。
[0018] 表1棕榈酸甲酯加样回收率试验结果（n=6)
【主权项】
1. 一种拟黑多刺蚁中棕榈酸和油酸含量的测定方法，其特征在于，包括如下步骤： (1) 内标储备液的制备： 取正十八烷250mg，精密称定，置于100ml容量瓶中，加60~90°C石油醚溶解并稀释至 100ml，即得内标储备液； (2) 对照品溶液的制备： A) 精密称取对照品棕榈酸甲酯100mg、油酸甲酯100mg，置于同一 25ml容量瓶中，用 60~90°C石油醚溶解并稀释至25ml，摇匀，即得对照品储备液； B) 精密量取对照品储备液2ml，置于25ml容量瓶中，用60~90°C石油醚溶解并稀释至 25ml，摇匀，即得对照品溶液； (3) 供试品溶液的制备： C) 取拟黑多刺蚁样品适量，研碎，精密称取样品lg，置于100ml塞锥形瓶中，加入60~ 90°C石油醚10ml，摇匀，置于90°C水浴中回流60min，然后放置冷却； D) 用60~90°C石油醚补足水浴回流中减失的重量，然后滤过，取2ml滤液至容量 为10ml具塞试管中，加入含有lmol/L氢氧化钾的甲醇溶液2ml，在50°C水浴中震荡加热 15min，取出冷却，加入超纯水3ml，然后将滤液放入离心机进行离心，取上清液，即得供试品 储备液； E) 精密量取内标储备液、供试品储备液各0. 5ml置于同一 5ml容量瓶中，加60~90°C 石油醚稀释至5ml，摇匀，即得供试品溶液； (4) 用气相色谱仪、检测器及色谱检测软件配套使用，精密吸取1ML供试品溶液和对照 品溶液分别注入气相色谱仪中，测定棕榈酸和油酸的色谱分析图，即得拟黑多刺蚁中棕榈 酸和油酸的含量； (5) 设定色谱测定条件为：色谱柱为RtxK-5毛细管色谱柱，色谱柱规格为 30mX0. 32mmX0. 25Mm ;柱温采用程序升温方式，以15°C/min的方式从80°C升温到220°C后 保持5分钟；柱流量为2. 0 ml/min ;载气为高纯氦气；进样口温度230 ° C ;进样量1ML，分 流比10:1。
2. 根据权利要求1所述的拟黑多刺蚁中棕榈酸和油酸含量的测定方法，其特征在于： 所述的所述的气相色谱仪为GC2010PLUS气相色谱仪。
3. 根据权利要求1所述的拟黑多刺蚁中棕榈酸和油酸含量的测定方法，其特征在于： 所述的检测器为FID检测器。
4. 根据权利要求1所述的拟黑多刺蚁中棕榈酸和油酸含量的测定方法，其特征在于： 所述的正十八烷的纯度为98%。
【专利摘要】本发明涉及一种拟黑多刺蚁中棕榈酸和油酸含量的测定方法，其特征在于：将棕榈酸和油酸与甲醇在碱催化甲酯化后，采用气相色谱法，以色谱柱为RtxR-5毛细管色谱柱，色谱柱规格为30m×0.32mm×0.25μm；柱温采用程序升温方式，以15oC/min的方式从80℃升温到220℃后保持5分钟；柱流量为2.0 ml/min；载气为高纯氦气；进样口温度230 °C；进样量1μL，分流比10:1。本发明测定结果准确度高，操作简便，重复性好，可用于拟黑多刺蚁中油酸和棕榈酸的含量测定。
【IPC分类】G01N30-88
【公开号】CN104655774
【申请号】CN201510064283
【发明人】陆国寿, 韦桂宁, 刘吉成, 黄建猷, 卢文杰, 谭晓, 黄周峰, 何飞, 苏华, 曾宪彪, 韦宝伟
【申请人】广西壮族自治区中医药研究院
【公开日】2015年5月27日
【申请日】2015年2月9日