一种枸杞中甜菜碱的测定方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种测定枸杞中甜菜碱的分析方法，属于检测分析技术领域。
【背景技术】
[0002] 枸杞（medlar)为茄科、属多年生落叶灌木的干燥果实，是药食同源的产品，具有 滋补肝肾、明目的功效。现代药理学研宄一般认为枸杞的活性成分、微量元素等有药理效 果。枸杞的活性成分主要有3类，甜菜碱为其中之一。甜菜碱是一类季胺盐化合物，分子式 C5H11NO2，结构式（CH3) 3N+-CH2-COO_，相对分子量117. 15。是枸杞果、柄，叶中主要的生物碱之 一，它在植物体内起甲基供应体的作用。目前对甜菜碱含量测定方法的研宄日益增多，主要 有滴定法、比色法、高效液相色谱法等。这些方法各有其特点，滴定法成本低，但受样品中色 素成分的干扰，测定终点不易判断；比色法测定过程复杂，且洗脱溶剂为乙醚，其毒性大，环 境污染严重，不利于日常检测分析。在高效液相色谱法测定甜菜碱过程中，不可避免的采用 离子对试剂和专用柱，采用离子对试剂时，缓冲盐容易析出造成液相系统堵塞，缩短色谱柱 使用寿命；采用专用柱（阳离子交换柱SCX或氨柱NH2)分析，前处理操作较繁琐。而离子 色谱法成为较适宜的选择，目前涉及甜菜碱测定的国家标准GB/T 21515-2008《饲料添加 剂天然甜菜碱》和GB/T 23710-2009《饲料中甜菜碱的测定》。这两个标准均采用离子色谱 法，但并不适用于高含糖量样品中甜菜碱的测定，且测定过程存在钠离子的干扰，严重影响 定量分析结果。此外，其他涉及甜菜碱测定的标准，操作复杂，检测限高，如NY/T1746-2009 《甜菜中甜菜碱的测定》检测限为400mg/kg，远不能满足实际样品检测需求。
【发明内容】
[0003] 针对现有技术中的不足，本发明提供一种新的检测方法。本发明利用离子色谱 仪-脉冲安培检测器所具有的优势准确测定了枸杞中甜菜碱含量，该方法操作简便，无需 衍生和复杂样品前处理即可快速检测植食性样品中甜菜碱的含量，且灵敏度高，通常可检 测到mg/L数量级。
[0004] 本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：
[0005] 一种枸杞中甜菜碱的测定方法，包括以下步骤：
[0006] (1)以水提取溶剂对枸杞样品进行萃取，经过滤得到的滤液作为待测液；
[0007] (2)采用离子色谱结合脉冲安培检测器进行样品中甜菜碱的分析测定。
[0008] 优选的，所述步骤（1)中取粉碎的枸杞样品，精密称取，加水使溶解并定容，超声 处理，离心取上清液过滤后，过预活化处理RP柱，弃去最初滤液，取续滤液作为待测液。
[0009] 优选的，所述步骤（1)中所述枸杞样品包括固体样品或液体样品。
[0010] 优选的，所述步骤（1)中所述超声处理的时间为20~30min。
[0011] 优选的，所述步骤（1)中所述最初滤液为前1~3mL。
[0012] 优选的，所述步骤（1)中所述过滤孔径为0. 22 μ m。
[0013] 优选的，所述步骤（2)使用阴离子交换树脂为填料的色谱柱、以MSA作为流动相对 枸杞中的甜菜碱进行离子色谱分析测定。
[0014] 优选的，所述离子色谱仪使用的色谱柱为Ion Pac CS19(4X250mm);色谱分析条 件为：I〇n Pac CS19色谱柱、Ion Pac CG19预柱；进样量IOyL;流速为l.OmL/min，停泵时 间为IOmin ;柱温30°C，流动相为5mM甲基磺酸（MSA)。
[0015] 优选的，所述离子色谱仪为ICS-3000型离子色谱仪，包含四元梯度泵，ED 3000电 化学检测器，Au工作电极，pH/Ag/AgCl复合参比电极，Ti对电极。
[0016] 本发明的有益效果是：
[0017] 本发明使用结合有脉冲安培检测器的离子色谱方法测定枸杞中甜菜碱，本发明方 法的检测限0. 〇366mg/L，与现有技术相比，检测限更低。
[0018] 本发明以水为提取溶剂对枸杞样品进行萃取，以过滤得到的滤液作为待测样品， 以阴离子交换树脂为填料的色谱柱，同时以MSA作为流动相对枸杞中的甜菜碱进行分析。 从而避免了有毒有害有机溶剂的使用，只使用价格低的纯水作为提取溶剂，MSA作为流动相 就可以实现对枸杞中的甜菜碱快速、简单、准确、高灵敏测定。本发明具有操作简便、灵敏度 高、检测限低、重现性好，且可快速准确获得实验结果，充分满足了对各种功能性食品中甜 菜碱的检测，并可应用于大量实际样品的批量检测分析。
[0019] 本发明的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变 得明显，或通过本发明的实践了解到。
【附图说明】
[0020] 本发明的上述和/或附加的方面和优点从结合下面附图对实施例的描述中将变 得明显和容易理解，其中：
[0021] 图1甜菜碱标准物质色谱图（150mg/L);
[0022] 图2枸杞样品色谱图。
【具体实施方式】
[0023] 下面通过参考附图描述的实施例是示例性的，旨在用于解释本发明，而不能理解 为对本发明的限制。
[0024] 本发明实施例中使用的仪器和试剂如下：
[0025] 仪器与试剂
[0026] 仪器：ICS-3000型离子色谱仪（美国Dionex公司），包含四元梯度泵，ED 3000电 化学检测器，Au工作电极，pH/Ag/AgCl复合参比电极，Ti对电极；Chromeleon 680色谱工 作站；AS自动进样器；On Guard II RP固相萃取柱（美国Dionex公司）；0· 22 μ m微孔尼 龙膜（天津富集公司）；明澈D24UV超纯水机（美国Millipore公司）。
[0027] 试剂：甜菜碱（彡99. 7%，Sigma公司），本实施例中实验用水均为超纯水，由明澈 D24UV超纯水机制备。甲基磺酸MSA (国药集团）。
[0028] 实施例1离子色谱分析色谱条件的选择
[0029] (1)色谱柱的选择
[0030] 实验比对了常用的IonPac CS17色谱柱和IonPac CS19色谱柱。结果显示，采用 IonPac CS17色谱柱进行分析时，枸杞样品中其他杂质色谱峰与甜菜碱色谱峰不能完全分 离；采用IonPac CS19色谱柱，分离效果明显优于IonPac CS17,且甜菜碱的保留时间稳定， 在123天内保留时间的相对标准偏差小于I. 1%。
[0031] (2)柱温和分析时间条件
[0032]当温度维持在30°C时，获得最佳柱效，与邻近杂峰分离完全，分离度高、分离效果 好。
[0033] 本发明确定的色谱条件为：Ion Pac CS19为分析柱、Ion Pac CG19为预柱；进样 量10 μ L ;流动相流速为1.0 mL/min，停泵时间为IOmin ;柱温30°C，流动相为5mM MSA。
[0034] 实施例2枸杞样品中甜菜碱的测定实验
[0035] 应用本方法对枸杞样品进行甜菜碱的测定实验。
[0036] (1)样品前处理
[0037] 称取经粉碎的固体样品（固体样品为枸杞子）约0. 5g或液体样品约2. 5g，精密称 取，加水使溶解并定容至25ml，超声处理（500W/40KHz) 30min，离心10min (转速1000 Orpm)， 取上清液过滤膜后，过预活化处理RP柱，弃去前3mL，取续滤液，上机待测。
[0038] (2)标准溶液的配置
[0039] 甜菜碱标准储备液1000mg/L :准确称取标准物质0. 1000 g溶于纯水中，摇匀备用。 再逐级稀释成所需要的浓度即可。标准物质色谱图（色谱条件同本实施例步骤（3))如图 1所示。
[0040] (3)离子色谱分析
[0041] Ion Pac CS19 色谱柱、Ion Pac CG19 预柱；进样量