一种黄芪发酵产物对防治糖尿量低下的研究方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及中药检测技术领域，具体是一种黄芪发酵产物对防治糖尿量低下的研 究方法。
【背景技术】
[0002] 现有的黄芪发酵产物的检测以及对糖尿量底下的研究技术存在很多缺点，如研究 不够深入，受体内多种因素的影响，导致研究不确定因素多，因而误差较大，不能真正的探 究出更深的原因。
【发明内容】
[0003] 本发明的目的在于提供一种黄芪发酵产物对防治糖尿量低下的研究方法，以解决 上述【背景技术】中提出的问题。
[0004] 为实现上述目的，本发明提供如下技术方案： 一种黄芪发酵产物对防治糖尿量低下的研究方法，具体步骤如下： (1) 药物的配制 称取黄芪发酵产物溶于0. 9%的生理盐水后配成混悬液，称取文迪雅粉碎后溶于0. 9% 的生理盐水后配成混悬液，放-4°C冰箱中保存备用；D-半乳糖用生理盐水按500mg/Kg · d 配成30mg/ml，即用即配；胰岛素注射液，临用前用生理盐水配制成0. 025U/mL ; (2) 使用剂量 根据临床用药情况，折算成小鼠使用剂量；黄芪发酵产物大、中、小剂量分别是60kg成 人日用药量的20倍、10倍、5倍，并稀释成相同的给药容量；对照组文迪雅取60kg成人日用 药量的10倍，并稀释成相同的给药容量； (3) 分组及给药方法：动物购置后适应性喂养一周后，按体重随机分组；除正常对照组 灌服等容量生理盐水并同时腹腔注射等量生理盐水外，其余模型对照组、文迪雅组、黄芪发 酵产物小剂量组、黄芪发酵产物中剂量组、黄芪发酵产物大剂量组，每组12只小鼠，分别灌 服等容量配制溶液的同时腹腔注射D-gal 500mg/kg，每天1次共42天，检测完血液各项指 标后，处死并取右大腿股四头肌肌肉-70°C下冷冻保存备用； (4) 观察指标 给药期间每周称体重，共6周，每隔一周的体重进行比较； ① 葡萄糖耐量试验 于末次给药后禁食12h，剪尾取血，用血糖测试仪及试纸测定空腹血糖作为0时血糖， 然后灌胃4g/kg葡萄糖溶液，按同样方法取血检测30min、60min和120min时的血糖值； ② 胰岛素耐量试验 喂养2天后禁食12h，剪尾取血作为0时血糖，然后皮下注射0. δμυ/kg胰岛素，取血检 测 15min、30min、60min、90min 和 120min 时血糖； ③ 胰岛素抵抗指数测定及计算 继续喂养2天后禁食12h，眼眶取血，于4000r/min离心15min分离血清，并储存 于-70°C温度下待测，采用放免法测定血清胰岛素，并计算胰岛素抵抗指数，计算公式，胰岛 素抵抗指数=空腹胰岛素 X空腹血糖/22. 5 ; (5)数据统计处理：对实验数据进行处理，计量资料数据以均数土标准差表示，采用方 差分析对各组均数进行显著性检验。
[0005] 与现有技术相比，本发明的有益效果是：本发明方法能有效降低口服葡萄糖耐量 试验后的血糖，增加胰岛素耐量试验后胰岛素的敏感性，降低空腹胰岛素和胰岛素抵抗指 数水平，因此探究层次深，精确度高。
【附图说明】
[0006] 图1为黄芪发酵产物对D-gal诱导IGT小鼠胰岛素抵抗的影响示意图。
[0007] 图2为黄芪发酵产物对IGT小鼠骨骼肌GLUT-4基因表达水平的影响示意图。
[0008] 图中：1-正常对照组；2-模型对照组；3-文迪雅对照组；4-黄芪发酵产物小剂量 组；5-黄芪发酵产物中剂量组；6-黄芪发酵产物大剂量组。
【具体实施方式】
[0009] 下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完 整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于 本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他 实施例，都属于本发明保护的范围。
[0010] -种黄芪发酵产物对防治糖尿量低下的研究方法，具体步骤如下： (1) 药物的配制 称取黄芪发酵产物溶于〇. 9%的生理盐水后配成混悬液，称取文迪雅粉碎后溶于0. 9% 的生理盐水后配成混悬液，放-4°C冰箱中保存备用；D-半乳糖用生理盐水按500mg/Kg · d 配成30mg/ml，即用即配；胰岛素注射液，临用前用生理盐水配制成0. 025U/mL ; (2) 使用剂量 根据临床用药情况，折算成小鼠使用剂量；黄芪发酵产物大、中、小剂量分别是60kg成 人日用药量的20倍、10倍、5倍，并稀释成相同的给药容量；对照组文迪雅取60kg成人日用 药量的10倍，并稀释成相同的给药容量； (3) 分组及给药方法：动物购置后适应性喂养一周后，按体重随机分组；除正常对照组 灌服等容量生理盐水并同时腹腔注射等量生理盐水外，其余模型对照组、文迪雅组、黄芪发 酵产物小剂量组、黄芪发酵产物中剂量组、黄芪发酵产物大剂量组，每组12只小鼠，分别灌 服等容量配制溶液的同时腹腔注射D-gal 500mg/kg，每天1次共42天，检测完血液各项指 标后，处死并取右大腿股四头肌肌肉-70°C下冷冻保存备用； (4) 观察指标 给药期间每周称体重，共6周，每隔一周的体重进行比较； ①葡萄糖耐量试验（OGTT) 于末次给药后禁食12h，剪尾取血，用血糖测试仪及试纸测定空腹血糖（FBG)作为0时 血糖，然后灌胃4g/kg葡萄糖溶液，按同样方法取血检测30min、60min和120min时的血糖 值； ② 胰岛素耐量试验（ITT) 喂养2天后禁食12h，剪尾取血作为O时血糖，然后皮下注射0. δμυ/kg胰岛素，取血检 测 15min、30min、60min、90min 和 120min 时血糖； ③ 胰岛素抵抗指数（HOM-IR) 继续喂养2天后禁食12h，眼眶取血，于4000r/min离心15min分离血清（储存于-70°C 待测），采用放免法测定血清胰岛素（FINS)，并计算胰岛素抵抗指数（HOMA-IR)，计算公式： 胰岛素抵抗指数（HOMA-IR)=空腹胰岛素（μLυ/mL) X空腹血糖（mmol/L)/22. 5 ; (5)数据统计处理：对实验数据进行处理，计量资料数据以均数土标准差表示（±S)， 采用方差分析对各组均数进行显著性检验，P〈〇. 05时有统计学意义。
[0011] 研究结果 ①一般观察 模型对照组小鼠第4周开始出现多饮、多食、多尿、体重增长缓慢，毛发稀松欠光泽，精 神萎靡不振；其它各组与正常对照组相比，无明显多饮、多食、多尿，体重增长稍缓，毛发及 精神状态无明显改变；实验期间，除模型对照组和黄芪发酵产物中剂量组各有1只小鼠死 亡外，其余各组均无死亡。
[0012] ②实验各组小鼠体重的变化 与正常对照组比较，给药前各组体重差异无统计学意义（/M). 05)，给药后模型对照组 体重增加值明显减少，差异有统计学意义（K0. 01);随着时间的推移，各组小鼠的体重增 加，但模型对照组小鼠体重的增长趋势较其它各组缓慢；与模型对照组比较，给药后文迪 雅对照组、黄芪发酵产物小、中、大剂量组体重增加值增大，差异有统计学意义（代〇. 01); 与文迪雅对照组相比，给药后黄芪发酵产物小、中、大剂量组体重增加值差异无统计学意义 {m. 〇5) 〇
[0013] ③黄芪发酵产物对D-gal诱导IGT小鼠 OGTT的影响 与正常对照组比较，给小鼠葡萄糖灌胃前各组空腹血糖（FBS)差异无统计学意义 (P>0. 05)，给予葡萄糖灌胃120min后模型对照组2h血糖值9. 46±0. 91，为葡萄糖耐量低减 (IGT)状态，说明D-gal诱导小鼠 IGT模型成功； 由表1可以看出，葡萄糖负荷60min内各组血糖值逐渐升高，60min达血糖峰值，模型对 照组血糖峰值明显偏高，表明对葡萄糖的耐受量明显降低；与模型对照组比较，文迪雅对照 组、黄芪发酵产物小、中、大剂量组2h血糖值降低，差异有统计学意义（K0. 01)，