一种利用显微镜检测古代羊毛织品的方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种利用显微镜检测羊毛织品的检测方法，主要用于古代羊毛织品的检测。
【背景技术】
[0002]古代在北方地区毛织品广泛应用于服饰和毛毯，而羊毛织物占绝大多数。出土的大量毛织物其精美程度不亚于出土的丝绸文物，这不仅是古代纺织技术演变的重要实物证据，也对研究古代社会环境和人文活动具有重要参考价值。而现有技术中缺乏对古代丝织品中羊毛角蛋白鉴定的深入研究。
[0003]羊毛角蛋白是一种硬化，不易溶解的蛋白质，其中既有含羧基等在内的酸性基，也有含胺基，亚胺基等在内的碱性基，所以在酸、碱、盐、氧化剂、还原剂、卤素等中羊毛都具有一定的不稳定性。在丝织品文物鉴定中，这对羊毛制品的鉴别造成了一定困难。而Elisa法鉴定羊毛丝织品快捷，方便，能高效准确鉴别出羊毛织品，从而为古代羊毛织品发展研究提供依据。
【发明内容】
[0004]本发明要解决的技术问题是:针对上述现有技术存在的问题提供一种直观的，快捷的利用显微镜检测古代羊毛织品的方法，先将兔抗角蛋白多克隆抗体浸渍于文物样表面，洗涤干净后，加入胶体金标记的山羊抗兔lgG(H+L)抗体，形成抗原-一抗-二抗复合物，然后洗涤干净将文物样放在显微镜下观察，根据样品表面有没有呈现红色进行定性分析。
[0005]为解决技术问题，采取的技术方案是:利用显微镜检测古代羊毛织品的方法，其特征在于采用以下步骤:
[0006]A) PBS 7.4 缓冲液配制:KC1 0.2g，ΚΗ2Ρ040.27g，NaCl 8.0g，Na2HP04.12H20
3.58g，用蒸馈水定容至1000mL。
[0007]B)从文物样里面抽取三根单纤，分别放置于打孔皿中，标记为①，②，③；用PH =7.4的PBS缓冲溶液进行洗涤，保证表面附着物洗涤干净；分别向①中加入80-120 μ 1用PBS7.4溶液稀释10-50倍的兔抗角蛋白多克隆抗体，③中加入80-120 μ 1 PH = 7.4的PBS缓冲液，然后放置于冰箱，3-5°C过夜；然后分别加入l_3ml PH = 7.4的PBS溶液于打孔皿中，浸泡4-6min进行洗涤，洗涤2_4次；
[0008]C)分别向①，②中加入80-120 μ 1用PBS 7.4溶液稀释100-400倍的胶体金标记山羊抗兔lgG(H+L)抗体，③中加入80-120 μ 1 PH = 7.4的PBS溶液；然后分别将①，②，③放置于有湿毛巾垫着的盒子里，37-39°C孵育l_2h ;然后分别加入l_3ml PH = 7.4的PBS溶液于打孔皿中，浸泡4-6min进行洗涤，洗涤2_4次；再用盖玻片封片；
[0009]D)将①，②，③放置于显微镜下进行观察；比较测得的结果:②，③未发生颜色变化，而①呈现较亮的红色，说明文物样与兔抗角蛋白抗体发生了特异性结合，证明文物样为羊毛织品。
[0010]本发明的有益成果是:本发明采用免疫胶体金技术对古代羊毛织品进行检测，相比现有技术，该方法简单快捷，灵敏度高，特异性强，结果直观，更适合考古现场分析。
【具体实施方式】
[0011]下面对本发明的实施例作详细说明。以下实施例仅对本申请进行进一步说明，不应理解为对本申请的限制。
[0012]实施例1:
[0013]一种利用显微镜检测羊毛织品的检测方法，采用以下步骤:
[0014]A) PBS 7.4 缓冲液配制:KC1 0.2g，KH2P04 0.27g，NaCl 8.0g，Na2HP04.12H20
3.58g，用蒸馈水定容至1000mL。
[0015]B)从文物样里面抽取三根单纤，分别放置于打孔皿中，标记为①，②，③；用PH =7.4的PBS缓冲溶液进行洗涤，保证表面附着物洗涤干净。分别向①中加入80 μ 1用PBS7.4溶液稀释10倍的兔抗角蛋白多克隆抗体；(D，③中加入80 μ 1 PH = 7.4的PBS缓冲液，然后放置于冰箱，4°C过夜。然后分别加入2ml PH = 7.4的PBS溶液于打孔皿中，浸泡5min进行洗涤，洗涤3次；
[0016]C)分别向①，②中加入80 μ 1用PBS 7.4溶液稀释100倍的胶体金标记山羊抗兔lgG (H+L)抗体，③中加入80 μ 1 PH = 7.4的PBS溶液；然后分别将①，②，③放置于有湿毛巾垫着的盒子里，37°C孵育lh ;然后分别加入2ml PH = 7.4的PBS溶液于打孔皿中，浸泡5min进行洗涤，洗涤2次；再用盖玻片封片；
[0017]D)将①，②，③放置于显微镜下进行观察；比较测得的结果:②，③未发生颜色变化，而①呈现较亮的红色，说明文物样与兔抗角蛋白抗体发生了特异性结合，证明文物样为羊毛织品。
[0018]实施例2
[0019]一种利用显微镜检测羊毛织品的检测方法，采用以下步骤:
[0020]A) PBS 7.4 缓冲液配制:KC1 0.2g，KH2P04 0.27g，NaCl 8.0g，Na2HP04.12H20
3.58g，用蒸馈水定容至1000mL。
[0021]B)从文物样里面抽取三根单纤，分别放置于打孔皿中，标记为①，②，③；用PH =7.4的PBS缓冲溶液进行洗涤，保证表面附着物洗涤干净。分别向①中加入100 μ 1用PBS7.4溶液稀释25倍的兔抗角蛋白多克隆抗体；②，③中加入100 μ 1 PH = 7.4的PBS缓冲液，然后放置于冰箱，3°C过夜。然后分别加入1ml PH = 7.4的PBS溶液于打孔皿中，浸泡4min进行洗涤，洗涤2次；
[0022]C)分别向①，②中加入100 μ 1用PBS 7.4溶液稀释200倍的胶体金标记山羊抗兔lgG(H+L)抗体，③中加入100 μ 1 PH = 7.4的PBS溶液；然后分别将①，②，③放置于有湿毛巾垫着的盒子里，38°C孵育lh ;然后分别加入1ml PH = 7.4的PBS溶液于打孔皿中，浸泡5min进行洗涤，洗涤3次；再用盖玻片封片；
[0023]D)将①，②，③放置于显微镜下进行观察；比较测得的结果:②，③未发生颜色变化，而①呈现较亮的红色，说明文物样与兔抗角蛋白抗体发生了特异性结合，证明文物样为羊毛织品。
[0024]实施例3
[0025]一种利用显微镜检测羊毛织品的检测方法，采用以下步骤:
[0026]A) PBS 7.4 缓冲液配制:KC1 0.2g，KH2P04 0.27g，NaCl 8.0g，Na2HP04.12H20
3.58g，用蒸馈水定容至1000mL。
[0027]B)从文物样里面抽取三根单纤，分别放置于打孔皿中，标记为①，②，③；用PH =7.4的PBS缓冲溶液进行洗涤，保证表面附着物洗涤干净。分别向①中加入120 μ 1用PBS7.4溶液稀释50倍的兔抗角蛋白多克隆抗体，③中加入120 μ 1 PH = 7.4的PBS缓冲液，然后放置于冰箱，5°C过夜。然后分别加入3ml PH = 7.4的PBS溶液于打孔皿中，浸泡6min进行洗涤，洗涤4次；
[0028]C)分别向①，②中加入120 μ 1用PBS 7.4溶液稀释400倍的胶体金标记山羊抗兔lgG(H+L)抗体，③中加入120 μ 1 PH = 7.4的PBS溶液；然后分别将①，②，③放置于有湿毛巾垫着的盒子里，39°C孵育lh ;然后分别加入2ml PH = 7.4的PBS溶液于打孔皿中，浸泡5min进行洗涤，洗涤4次；再用盖玻片封片；
[0029]D)将①，②，③放置于显微镜下进行观察；比较测得的结果:②，③未发生颜色变化，而①呈现较亮的红色，说明文物样与兔抗角蛋白抗体发生了特异性结合，证明文物样为羊毛织品。
【主权项】
1.一种利用显微镜检测古代羊毛织品的方法，其特征在于包括如下步骤:A)PBS 7.4 缓冲液配制:KC1 0.2g，ΚΗ2Ρ040.27g，NaCl 8.0g，Na2HP04.12H20 .3.58g，用蒸馈水定容至1000mL。 B)从文物样里面抽取三根单纤，分别放置于打孔皿中，标记为①，②，③；用PH= .7.4的PBS缓冲溶液进行洗涤，保证表面附着物洗涤干净；分别向①中加入80-120 μ 1用PBS.7.4溶液稀释10-50倍的兔抗角蛋白多克隆抗体，③中加入80-120 μ 1 PH = 7.4的PBS缓冲液，然后放置于冰箱，3-5°C过夜；然后分别加入l_3ml PH = 7.4的PBS溶液于打孔皿中，浸泡4-6min进行洗涤，洗涤2_4次； C)分别向①，②中加入80-120μ 1用PBS 7.4溶液稀释100-400倍的胶体金标记山羊抗兔lgG (H+L)抗体，③中加入80-120 μ 1 PH = 7.4的PBS溶液；然后分别将①，②，③放置于有湿毛巾垫着的盒子里，37-39°C孵育l_2h ;然后分别加入l_3ml PH = 7.4的PBS溶液于打孔皿中，浸泡4-6min进行洗涤，洗涤2_4次；再用盖玻片封片； D)将①，②，③放置于显微镜下进行观察；比较测得的结果:②，③未发生颜色变化，而①呈现较亮的红色，说明文物样与兔抗角蛋白抗体发生了特异性结合，证明文物样为羊毛织品。
【专利摘要】一种利用显微镜检测古代羊毛织品的方法，包括如下步骤：A)PBS？7.4缓冲液配制；B)从文物样里面抽取三根单纤，分别放置于打孔皿中，标记为①，②，③；用PBS缓冲溶液进行洗涤，保证表面附着物洗涤干净；分别向①中加入兔抗角蛋白多克隆抗体；②，③中加入PBS缓冲液，然后放置于冰箱过夜；分别加入PBS溶液于打孔皿中，浸泡洗涤；C)分别向①，②中加入胶体金标记山羊抗兔lgG(H+L)抗体，③中加入PBS溶液；然后分别将①，②，③放置于有湿毛巾垫着的盒子里，孵育；分别加入PBS溶液于打孔皿中，浸泡洗涤；再用盖玻片封片；D)将①，②，③放置于显微镜下进行观察；比较测得的结果：②，③未发生颜色变化，而①呈现较亮的红色，说明文物样与兔抗角蛋白抗体发生了特异性结合，证明文物样为羊毛织品。
【IPC分类】G01N33/558
【公开号】CN105372420
【申请号】CN201510768133
【发明人】胡智文, 刘建军, 王秉, 游秋实
【申请人】浙江理工大学
【公开日】2016年3月2日
【申请日】2015年11月12日