一种采用高效液相色谱法测定药用辅料苋菜红的含量的制作方法
【技术领域】
[0001]本发明属于药品检验领域，涉及药用辅料的分析测定方法。具体涉及苋菜红的测定方法。
【背景技术】
[0002]近年来，随着药用辅料的广泛应用，所造成的安仝事故也越来越多。最典型的事件就是发生在2006年的“齐二药”假药事件，采用二甘醇替代丙二醇造成数人身亡。且有关辅料的质量控制标准多数停留在行业标准的层次上，因此，完善药用辅料的质量控制标准迫在眉睫。人上合成色素是被广泛使用的药用辅料，它是以苯、甲苯、萘等化上产品为原料，经过一系列的上艺过程合成的，其色泽鲜艳，着色力强，色调多，且成本低廉，但对人体有一定的毒性。苋菜红是常用的人上合成色素之一，在药学领域主要用作胶囊壳的着色剂等，收载于中国医药行业标准YY 0146— 93。该标准中采用三氯化钛滴定法测定含量，其操作方法烦琐，测定结果误筹较大。本试验在参考相关文献的基础上，对其含量测定方法进行了研究。
【发明内容】
[0003]本试验通过对药用辅料苋菜红的前处理方法以及高效液相色谱检测方法的研究，以建立一种快速、高效的检测方法。本发明包括以下步骤:
(I)样品预处理
取本品约0.1g精密称定，置100 mL量瓶中，加水适量溶觯，并稀释至刻度，摇匀，精密量取1.0mL置20 mL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，以0.45 μ m微孔滤膜过滤，即得。
[0004](2)高效液相色谱仪检测，记录色谱图，内标峰高(Hi)与苋菜红峰高(Hs)，用标准曲线换算浓度。
[0005]根据权利要求1所述的苋菜红含量的测定方法，其特征在于该方法是以安捷伦C18柱(4.6 mmX250 mm, 5 u m)为色谱柱，以甲醇-0.02 mol.L 1乙酸铵溶液(I 5:85)为流动相，流速为1.0 mL.min 检测波长为2 18 nm，柱温为35°C。
[0006]本发明的有益效果是:本发明应用高效液相色谱法检测药用辅料苋菜红的含量具有较好的准确度与精密度。
【附图说明】
[0007]图1为药用辅料苋菜红的HPLC分析色谱图。
【具体实施方式】
[0008]下面将详细说明本发明的【具体实施方式】:
1.仪器与试剂
仪器: LC - 201A高效液相色谱仪试剂:
觅菜红对照品(纯度:9910% ,批号:61219,由D r.Ehrensto rfer实验室所提供)；苋菜红(批号=2OO9O3Ol, 20090302, 20090303, 20090304,
20090305, 200090306, 20090307, 20090308, 20090309, 20090310 ;由湖南尔康制药有限公司生产)；甲醇为色谱纯，水为超纯水，其他试剂均为分析纯。
[0009]2.方法与结果色谱条件:
安捷伦C18柱(4.6 mmX 250 mm，5 μ m)为色谱柱，以甲醇-0.02 mol.L 1乙酸铵溶液(I 5:85)为流动相，流速为1.0 mL.min 检测波长为218nm，柱温为35°C。
[0010]标准曲线的制作
精密称取苋菜红对照品适量，加水制成每I HiL约含50 μ g的溶液，即得对照品溶液，取本品约0.lg，精密称定，置10mL量瓶中，加水适量溶解，并稀释至刻度，摇匀，精密量取l.0mL，置20mL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，以0.45 μ m微孔滤膜过滤，艮P得供试品溶液。精密吸取空白溶剂、对照品溶液和供试品溶液10 UL,注入液相色谱仪，按色谱条件测定，色谱图见图1。理论板数以苋菜红峰计算应不低于2000。精密吸取苋菜红对照品溶液(58.21yg*mL 1 ) I, 5，10，15，20 μ L,注入高效液相色谱仪，测定，得峰面积。以峰面积为纵坐标，溶液浓度(μ g.mL O为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程为:Υ= 4.428 X 14X + 2.826 X 14, r= 0.9999( η = 5)结果表明，苋菜红在
5.82?116.42yg*mL 1范围内线性关系良好。
[0011]3.精密度和回收率
精密吸取供试品溶液1yL在上述色谱条件下连续进样6次，苋菜红峰面积的RSD为
0.13% ( η = 6)。结果表明精密度良好。
[0012]精密称取已知含量(100.4% )的苋菜红样品0.1 g，置于10mL量瓶中，加水适量溶解，加水至刻度，摇匀；精密量取0.5 mL置20 mL棕色量瓶中，共9份，分别精密加入苋菜红标准储备溶液(浓度为116.42 μ g.ιΛ 1 ) 4,5,6 mL,每个浓度平行3份，作为供试品溶液，按本文色谱条件测定苋菜红含量，低、中、高浓度的回收率分别为100.0%，100.0%，99.9%，结果表明本方法准确。
[0013]4.检出限试验
精密吸取苋菜红对照品溶液(116.42 μ g.mL 1 ) ImL置200mL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，过0.45 μ Lm微孔滤膜，精密吸取10 μ L注入高效液相色谱仪，测定。结果，信噪比约为3,故得最小检出浓度为0.5821 μ g.mL、
【主权项】
1.药用辅料苋菜红的测定方法，其特征在于将待测样品预处理后，用高效液相色谱法检测，包括以下步骤: 样品预处理 (1)取本品约0.1g精密称定，置100 mL量瓶中，加水适量溶觯，并稀释至刻度，摇匀，精密量取1.0mL置20 mL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，以0.45 μ m微孔滤膜过滤，即得； (2)高效液相色谱仪检测，记录色谱图，内标峰高(Hi)与苋菜红峰高(Hs)，用标准曲线换算浓度。2.根据权利要求1所述的苋菜红含量的测定方法，其特征在于该方法是以安捷伦C18柱(4.6 mmX250 mm, 5 μ m)为色谱柱，以甲醇-0.02 mol.L 1乙酸铵溶液(I 5:85)为流动相，流速为1.0 mL.min 检测波长为2 18 nm，柱温为35°C。
【专利摘要】本发明属于药品检验领域，涉及药用辅料的分析测定方法。具体涉及苋菜红的测定方法。该方法采用采州安捷伦C18柱(4.6mm×250mm，5μm)，以甲醇-0.02mol·L-1乙酸铵溶液(15：85)为流动相，流速为l.0mL·min-1,检测波长为218nm，柱温为35℃。该方法准确度、精密度高、操作简便、迅速。结果表明检出限为5.82μg·mL-1，可直接判断样品是否超标，为进一步研究药用辅料苋菜红提供技术支持。
【IPC分类】G01N30/02
【公开号】CN105628800
【申请号】CN201410617487
【发明人】杜霞, 张淑雅, 洪霞
【申请人】镇江亿特生物科技发展有限公司
【公开日】2016年6月1日
【申请日】2014年11月6日