妇科断红饮胶囊中益母草成分的鉴别方法
【专利摘要】本发明涉及妇科断红饮胶囊中益母草成分的鉴别方法，包括供试品溶液的制备、对照品溶液的制备以及照薄层色谱法鉴别；其中，所述供试品溶液的制备包括以下步骤：取妇科断红饮胶囊内容物1.4～1.8g，溶于25～35ml无水乙醇，80～100℃回流提取，过滤后收集滤液，蒸干，所得残渣加7ml～10ml水溶解，以3000～5000转/分钟离心后取上清液，蒸干，上样于活性炭?氧化铝柱，用无水乙醇洗脱后收集洗脱液、蒸干、用无水乙醇溶解，取上清液作为供试品溶液。采用本发明提供鉴别方法，供试品溶液在展板时无拖尾，分离效果好，显色斑点清晰，在高湿度环境下可实现快速、准确鉴别，稳定性好。
【专利说明】
妇科断红饮胶囊中益母草成分的鉴别方法
技术领域
[0001]本发明涉及中成药中有效成分的鉴别，具体涉及妇科断红饮胶囊中益母草成分的鉴别方法。
【背景技术】
[0002]妇科断红饮胶囊是株洲千金药业股份有限公司生产的独家产品，由赤芍、益母草、三七、仙鹤草、地榆炭、蒲黄炭等六味药材组成，经提取制成的纯中药复方制剂，具有凉血，化瘀，止血的功效。用于功能失调性子宫出血，表现为月经过多，经期延长，中医诊断为“漏证”，辩证属血热者，症见经血量多，或淋漓不净，色深红或紫红，质粘稠，夹有少量血块，伴有面赤头晕，烦躁易怒，口干喜饮，便秘尿赤。处方中的益母草为君药，有活血、祛淤、调经、利尿消肿、收缩子宫的作用。
[0003]专利文献CN101919942A公开了一种治疗妇科功血疾病的中药组合物胶囊剂的质量控制方法，具体公开了以下内容:取所述胶囊内容物0.9g?1.5g，加乙醇22mL?38mL，加热回流0.5h?I.5h，放冷，滤过，滤液浓缩至2.5mL?7.5mL，加于内径5mm?15mm、活性炭
0.3g?0.7g、100目?120目中性氧化招Ig?3g的活性炭-氧化招柱上，用15mL?45mL乙醇洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加0.2mL?0.SmL乙醇溶解，作为供试品溶液;取益母草对照药材
1.5g?4.5g，与供试品溶液同法制成对照药材溶液;取盐酸水苏碱对照品，加乙醇制成浓度为2.5mg/mL?7.5mg/mL的溶液，作为对照品溶液;吸取上述三种溶液各10μ1，以正丁醇:盐酸:水为3?5:0.5?1.5:0.2?0.8的混合溶液为展开剂，进行薄层色谱法试验，喷以稀碘化铋钾试液显色，供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。然而，该方法在实际操作中，存在展板时间长，显色时间长，灵敏度不高，受环境湿度影响大等问题，影响了妇科断红饮胶囊的生产与质量控制。
[0004]《中国药典2015版》第一部第290页公开了益母草的鉴别方法;其公开的供试品溶液制备方法为，鲜品干燥后粉碎，溶于无水乙醇，离心，取上清液作为供试品溶液;另取盐酸水苏碱对照品，加无水乙醇制成每Iml含Img的溶液，作为对照品溶液;照薄层色谱法为:吸取上述两种溶液各5?1ml，分别点于同一娃胶G薄层板上，以丙酮-无水乙醇-盐酸(10:6:1)为展开剂，展开，取出，晾干，在105°C加热15分钟，放冷，喷以稀碘化铋钾试液-三氯化铁试液(10:1)混合溶液至斑点显色清晰。在实际操作中，以该方法制备妇科断红饮胶囊的供试品溶液并检测，供试品难以实现有效分离，目标斑点模糊，且目标斑点之间的Rf值有差异，难以实现对益母草成分的准确鉴别。
【发明内容】
[0005]本发明的目的是克服现有技术的缺陷，提供一种针对妇科断红饮胶囊中益母草成分的鉴别方法，该方法专属性强、耐用性、灵敏度高，可作为该制剂的重要质量控制标准。
[0006]具体而言，本发明提供了一种妇科断红饮胶囊中益母草成分的鉴别方法，所述方法包括供试品溶液的制备、对照品溶液的制备以及照薄层色谱法鉴别。
[0007]其中，所述供试品溶液的制备包括以下步骤:取妇科断红饮胶囊内容物1.4?1.Sg,溶于25?35ml无水乙醇，80?100 °C回流提取，放冷、过滤后收集滤液，蒸干，所得残渣加7ml?1ml水溶解，以3000?5000转/分钟离心后取上清液，蒸干，上样于活性炭-氧化铝柱，用无水乙醇洗脱后收集洗脱液，蒸干，所得残渣用无水乙醇溶解，取上清液作为供试品溶液。
[0008]优选地，所述供试品溶液的制备包括以下步骤:取妇科断红饮胶囊内容物1.5g?1.7g，溶于28ml?32ml无水乙醇，80?100°C回流提取50min?70min，放冷、过滤后收集滤液，水浴蒸干，所得残渣加7ml?9ml水溶解，以3800?4200转/分钟离心8min?12min，取上清液，水浴蒸干，上样于活性炭-氧化铝柱，用无水乙醇洗脱后收集洗脱液，蒸干，所得残渣用无水乙醇溶解，取上清液作为供试品溶液。
[0009]更优选地，所述供试品溶液的制备包括以下步骤:取妇科断红饮胶囊内容物1.6g，溶于30ml无水乙醇，90 0C回流提取60min，放冷、过滤后收集滤液，水浴蒸干，所得残渣加8ml水溶解，以4000转/分钟离心1min，取上清液，水浴蒸干后加5ml无水乙醇溶解，上样于用无水乙醇润湿的活性炭-氧化铝柱，所述活性炭-氧化铝柱的内径20mm，其填料由活性炭0.5g和200?300目氧化铝2g均匀混合而成；用30ml无水乙醇洗脱后收集洗脱液，蒸干，所得残渣用Iml无水乙醇溶解，取上清液作为供试品溶液。
[0010]所述供试品溶液的制备方法中，为了实现优异的样品纯化效果，所述活性炭-氧化铝柱的填料由活性炭和200?300目中性氧化铝以重量比4?6:15?25均匀混合而成。
[0011 ]作为一种优选方案，所述活性炭-氧化招柱的内径可选用15mm或20_，优选为内径20mm;所述活性炭-氧化招柱的填料可由活性炭0.4?0.6g和200?300目氧化招1.5?2.5g均匀混合而成，所述活性炭和200?300目中性氧化铝均市售可得。
[0012]在上述活性炭-氧化铝柱的规格条件下，所述用无水乙醇洗脱的洗脱体积为20ml?40ml，优选为28ml?32ml，进一步优选为30ml。
[0013]本发明所述对照品溶液包括阳性对照，即益母草对照溶液。所述益母草对照溶液的制备方法为:取益母草药材2.9g?3.lg，采用与制备供试品溶液相同的方法制备。本发明所述对照品溶液还进一步包括盐酸水苏碱对照品溶液和阴性对照溶液;所述盐酸水苏碱对照品溶液的制备方法为:取盐酸水苏碱对照品，加无水乙醇溶解至浓度为4.8?5.2mg/ml，优选为5mg/ml;所述阴性对照溶液是以不含有益母草成分(其余成分完全相同)的妇科断红饮胶囊为样品，采用与供试品溶液完全相同的方法制备而成。
[0014]本发明所述照薄层色谱法鉴别采用的展开剂由丙酮、无水乙醇和盐酸以体积比9?11:5?7: I组成，优选以体积比10:6: I组成。
[0015]所述照薄层色谱法鉴别中，采用展开剂展开、晾干后，优选先在100?110°C加热10?20min，放冷后喷以8?12%硫酸乙醇溶液，在100?110°C烘干2?4min，再喷以显色剂进行显色。
[0016]所述照薄层色谱法鉴别采用的显色剂由稀碘化铋钾溶液与1%三氯化铁乙醇溶液以体积比8?12:1混合而成，优选以体积比1:1混合而成。所述稀碘化铋钾溶液的配置方法参见《中国药典》2010版一部附录VIB。
[0017]作为本发明的一种优选方案，所述妇科断红饮胶囊中益母草成分的鉴别方法包括以下步骤:
[0018](I)供试品溶液的制备:取妇科断红饮胶囊内容物1.4?1.8g，溶于25?35ml无水乙醇，80?100 °C回流提取50min?70min，放冷、过滤后收集滤液，水浴蒸干，所得残渣加7ml?1ml水溶解，以3000?5000转/分钟离心8min?12min，取上清液，水浴蒸干，上样于活性炭-氧化招柱，所述活性炭-氧化招柱的内径为15mm或20mm，其填料由活性炭0.4?0.6g和200?300目氧化招1.5?2.5g均勾混合而成；用20ml?40ml无水乙醇洗脱后收集洗脱液，蒸干，所得残渣用0.5ml?1.5ml无水乙醇溶解，取上清液作为供试品溶液；
[0019](2)益母草对照溶液的制备:取益母草药材2.9g?3.lg，采用与制备供试品溶液相同的方法，制备益母草对照溶液；
[0020]盐酸水苏碱对照品溶液的制备:取盐酸水苏碱对照品，加无水乙醇溶解至浓度为4.8?5.2mg/ml；
[0021 ] (3)照薄层色谱法鉴别:取所述供试品溶液、益母草对照溶液和盐酸水苏碱对照品溶液各10?15μ1，平行点样于同一块娃胶G板上，以体积比为9?11:5?7: I的丙酮_无水乙醇-盐酸为展开剂展开，晾干后，在100?110°C加热10?20min，放冷，喷以8?12%硫酸乙醇溶液，在100?110 °C烘干2?4min，再喷以体积比为8?12:1的稀碘化铋钾试液_1 %三氯化铁乙醇混合溶液，日光下检视，即可。
[0022 ]进一步优选地，所述方法包括以下步骤:
[0023](I)供试品溶液的制备:取妇科断红饮胶囊内容物1.5g?1.7g，溶于28ml?32ml无水乙醇，80?100°C回流提取50min?70min，放冷、过滤后收集滤液，水浴蒸干，所得残渣加7ml?9ml水溶解，以3800?4200转/分钟离心8min?12min，取上清液，水浴蒸干，上样于活性炭-氧化招柱，所述活性炭-氧化招柱的内径为15mm或20mm，其填料由活性炭0.4?0.6g和200?300目氧化招1.5?2.5g均勾混合而成；用28ml?32ml无水乙醇洗脱后收集洗脱液，蒸干，所得残渣用0.8ml?1.2ml无水乙醇溶解，取上清液作为供试品溶液；
[0024](2)益母草对照溶液的制备:取益母草药材2.9g?3.lg，采用与制备供试品溶液相同的方法，制备益母草对照溶液；
[0025]盐酸水苏碱对照品溶液的制备:取盐酸水苏碱对照品，加无水乙醇溶解至浓度为4.8?5.2mg/ml；
[0026](3)照薄层色谱法鉴别:取所述供试品溶液、益母草对照溶液和盐酸水苏碱对照品溶液各10?15μ1，平行点样于同一块娃胶G板上，以体积比为9?11:5?7: I的丙酮_无水乙醇-盐酸为展开剂展开，晾干后，在100?110°C加热10?20min，放冷，喷以8?12%硫酸乙醇溶液，在100?110 °C烘干2?4min，再喷以体积比为8?12:1的稀碘化铋钾试液_1 %三氯化铁乙醇混合溶液，日光下检视，即可。
[0027]作为发明的最优选方案，所述方法包括以下步骤:
[0028](I)供试品溶液的制备:取妇科断红饮胶囊内容物1.6g，溶于30ml无水乙醇，90°C回流提取60min，放冷、过滤后收集滤液，水浴蒸干，所得残渣加8ml水溶解，以4000转/分钟离心lOmin，取上清液，水浴蒸干后加5ml无水乙醇溶解，上样于用无水乙醇润湿的活性炭-氧化铝柱，所述活性炭-氧化铝柱的内径20mm，其填料由活性炭0.5g和200?300目氧化铝2g均匀混合而成；用30ml无水乙醇洗脱后收集洗脱液，蒸干，所得残渣用Iml无水乙醇溶解，取上清液作为供试品溶液；
[0029](2)益母草对照溶液的制备:取益母草药材3g，采用步骤(I)所述方法，制备益母草对照溶液；
[0030]盐酸水苏碱对照品溶液的制备:取盐酸水苏碱对照品，加无水乙醇溶解至浓度为5mg/ml；
[0031 ] (3)照薄层色谱法鉴别:取所述供试品溶液、益母草对照溶液和盐酸水苏碱对照品溶液各10μ1，平行点样于同一块硅胶G板上，以体积比为10:6:1的丙酮-无水乙醇-盐酸为展开剂展开，晾干后，在105 °C加热15min，放冷，喷以10 %硫酸乙醇溶液，在105 °C烘干3min，再喷以体积比为10:1的稀碘化铋钾试液-1 %三氯化铁乙醇混合溶液，日光下检视，即可。
[0032]经实际鉴别，所述方法得到的供试品色谱与对照品和对照药材色谱相应位置显相同颜色的斑点，阴性对照无干扰，方法可行。
[0033]本发明提供的妇科断红饮胶囊中益母草成分的鉴别方法，采用本发明提供鉴别方法，供试品溶液在展板时无拖尾，分离效果好，显色斑点清晰，在高湿度环境下可实现快速、准确鉴别，稳定性好，可以有效的用于妇科断红饮胶囊的鉴别。
【附图说明】
[0034]图1为实施例1所述鉴别结果的示意图；其中，序号I?6依次代表:1、批号20130701的样品，2、批号20130901的样品，3、批号20131101的样品，4、益母草对照，5、盐酸水苏碱对照，6、阴性对照。
[0035]图2为对比例3所述鉴别结果的示意图；
[0036]图3为实验例I所述鉴别结果的示意图；其中，图3A为自制薄层硅胶G板，图3B为预制薄层硅胶G板，图3C为高效薄层硅胶G板；图3A?3C中，序号I?6依次代表:1、批号20130701的样品，2、批号20130901的样品，3、批号20131101的样品，4、益母草对照，5、盐酸水苏碱对照，6、阴性对照。
[0037]图4为实验例2所述鉴别结果的示意图；其中，图4A为5°C下的鉴别结果，图4B为30°(:下的鉴别结果；图4A、4B中，序号I?6依次代表:1、批号20130701的样品，2、批号20130901的样品，3、批号20131101的样品，4、益母草对照，5、盐酸水苏碱对照，6、阴性对照。
[0038]图5为实验例3所述鉴别结果的示意图；其中，图5A为湿度30%下的鉴别结果，图5B为湿度75%下的鉴别结果；图5A、5B中，序号I?6依次代表:1、批号20130701的样品，2、批号20130901的样品，3、批号20131101的样品，4、益母草对照，5、盐酸水苏碱对照，6、阴性对照。
【具体实施方式】
[0039]以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。
[0040]以下各实施例中涉及的仪器以及试剂包括:939全自动薄层制板器(重庆南岸贝尔德仪器技术厂)；薄层层析硅胶(化学纯，青岛海洋化工有限公司)；活性炭(株洲石英化玻有限公司)；中性氧化铝(上海纳辉干燥试剂厂)；正丁醇(分析纯，天津市恒兴化学试剂制造有限公司)；盐酸(分析纯，株洲石英化玻有限公司)；丙酮(分析纯，株洲石英化玻有限公司)；无水乙醇(分析纯，株洲石英化玻有限公司)；水(纯化水，临用前制备)。
[0041 ] 实施例1
[0042]按照以下方法鉴别妇科断红饮胶囊中的益母草成分:
[0043](I)供试品溶液的制备:取妇科断红饮胶囊内容物1.6g，溶于30ml无水乙醇，90°C回流提取60min，放冷、过滤后收集滤液，水浴蒸干，所得残渣加8ml水溶解，以4000转/分钟离心lOmin，取上清液，水浴蒸干后加5ml无水乙醇溶解，上样于用无水乙醇润湿的活性炭-氧化铝柱，所述活性炭-氧化铝柱的内径20mm，其填料由活性炭0.5g和200?300目氧化铝2g均匀混合而成；用30ml无水乙醇洗脱后收集洗脱液，蒸干，所得残渣用Iml无水乙醇溶解，取上清液作为供试品溶液；
[0044](2)益母草对照溶液的制备:取益母草药材3g，采用步骤(I)所述方法，制备益母草对照溶液；
[0045]盐酸水苏碱对照品溶液的制备:取盐酸水苏碱对照品，加无水乙醇溶解至浓度为5mg/ml；
[0046](3)照薄层色谱法鉴别:取所述供试品溶液、益母草对照溶液、盐酸水苏碱对照品溶液以及阴性对照各ΙΟμΙ，平行点样于同一块硅胶G板上，以体积比为10:6:1的丙酮-无水乙醇-盐酸为展开剂展开，晾干后，在105 °C加热15min，放冷，喷以10 %硫酸乙醇溶液，在105°C烘干3min，再喷以体积比为10:1的稀碘化铋钾试液-1 %三氯化铁乙醇混合溶液，日光下检视，即可。
[0047]本实施例采用以上方法，分别鉴别了株洲千金药业股份有限公司生产的生产批号分别为20130701、20130901、20131101的三个不同批次的妇科断红饮胶囊，鉴别结果如图1所示。由图1可知，采用本实施例所述方法进行鉴别，3组供试品与益母草对照在相同位置显相同颜色的斑点，阴性对照无干扰，展板无拖尾，目标斑点清晰。
[0048]实施例2
[0049]与实施例1相比，区别仅在于，所述步骤(I)中:取妇科断红饮胶囊内容物1.7g，溶于32ml无水乙醇，100 °C回流提取70min，放冷、过滤后收集滤液，水浴蒸干，所得残渣加9ml水溶解，以4200转/分钟离心12min，取上清液，水浴蒸干后加5ml无水乙醇溶解，上样于用无水乙醇润湿的活性炭-氧化铝柱;其余步骤与实施例1相同。
[0050]本实施例采用以上方法，分别鉴别了株洲千金药业股份有限公司生产的生产批号分别为20130701、20130901、20131101的三个不同批次的妇科断红饮胶囊；由鉴别结果可知，3组供试品与益母草对照在相同位置显相同颜色的斑点，阴性对照无干扰，展板无拖尾，目标斑点清晰。
[0051 ] 实施例3
[0052]与实施例1相比，区别仅在于，所述步骤(I)中:取妇科断红饮胶囊内容物1.5g，溶于28ml无水乙醇，80°C回流提取50min，放冷、过滤后收集滤液，水浴蒸干，所得残渣加7ml水溶解，以3800转/分钟离心8min，取上清液，水浴蒸干后加5ml无水乙醇溶解，上样于用无水乙醇润湿的活性炭-氧化铝柱;其余步骤与实施例1相同。
[0053]本实施例采用以上方法，分别鉴别了株洲千金药业股份有限公司生产的生产批号分别为20130701、20130901、20131101的三个不同批次的妇科断红饮胶囊；由鉴别结果可知，3组供试品与益母草对照在相同位置显相同颜色的斑点，阴性对照无干扰，展板无拖尾，目标斑点清晰。
[0054]实施例4
[0055]与实施例1相比，区别仅在于，所述步骤(I)具体为:取妇科断红饮胶囊内容物1.4g，溶于25ml无水乙醇，80°C回流提取50min，放冷、过滤后收集滤液，水浴蒸干，所得残渣加7ml水溶解，以3000转/分钟离心8min，取上清液，水浴蒸干后加5ml无水乙醇溶解，上样于用无水乙醇润湿的活性炭-氧化铝柱，所述活性炭-氧化铝柱的内径20mm，其填料由活性炭
0.4g和200?300目氧化铝1.5g均匀混合而成；用20ml无水乙醇洗脱后收集洗脱液，蒸干，所得残渣用Iml无水乙醇溶解，取上清液作为供试品溶液;其余步骤与实施例1相同。
[0056]本实施例采用以上方法，分别鉴别了株洲千金药业股份有限公司生产的生产批号分别为20130701、20130901、20131101的三个不同批次的妇科断红饮胶囊；由鉴别结果可知，3组供试品与益母草对照在相同位置显相同颜色的斑点，且阴性对照无干扰;斑点清晰程度略差于实施例1?3。
[0057]实施例5
[0058]与实施例1相比，区别仅在于，所述步骤(I)具体为:取妇科断红饮胶囊内容物
1.Sg，溶于35ml无水乙醇，100°C回流提取70min，放冷、过滤后收集滤液，水浴蒸干，所得残渣加1ml水溶解，以5000转/分钟离心12min，取上清液，水浴蒸干后加5ml无水乙醇溶解，上样于用无水乙醇润湿的活性炭-氧化铝柱，所述活性炭-氧化铝柱的内径15mm，其填料由活性炭0.6g和200?300目氧化铝2.5g均匀混合而成；用40ml无水乙醇洗脱后收集洗脱液，蒸干，所得残渣用Iml无水乙醇溶解，取上清液作为供试品溶液;其余步骤与实施例1相同。
[0059]本实施例采用以上方法，分别鉴别了株洲千金药业股份有限公司生产的生产批号分别为20130701、20130901、20131101的三个不同批次的妇科断红饮胶囊；由鉴别结果可知，3组供试品与益母草对照在相同位置显相同颜色的斑点，且阴性对照无干扰;斑点清晰程度略差于实施例1?3。
[0060]对比例I
[0061]与实施例1相比，区别仅在于，所述步骤(I)中，取妇科断红饮胶囊内容物1.2g，溶于30ml无水乙醇，90 0C回流提取60min，放冷、过滤后收集滤液，水浴蒸干，所得残渣加7ml水溶解，以5500转/分钟离心8min，取上清液;其余操作与实施例1相同。
[0062]本对比例采用以上方法，分别鉴别了株洲千金药业股份有限公司生产的生产批号分别为20130701、20130901、20131101的三个不同批次的妇科断红饮胶囊；由鉴别结果可知，采用本对比例所述方法进行鉴别，目标斑点之间的Rf值有差异，难以准确判断供试品与益母草对照的斑点是否在相同位置，且斑点清晰程度差于实施例1?5。
[0063]对比例2
[0064]与实施例1相比，区别仅在于，采用超声处理方法制备供试样品溶液，具体为:取所述胶囊内容物1.6g，加乙醇30ml，超声提取45min，放冷，过滤，滤液水浴蒸干，残渣加8ml水溶解，以4000转/分钟离心1min，取上清液，水浴蒸至近干，加5ml乙醇溶解，，上样于用无水乙醇润湿的活性炭-氧化铝柱;其余步骤与实施例1相同。
[0065]本对比例采用以上方法，分别鉴别了株洲千金药业股份有限公司生产的生产批号分别为20130701、20130901、20131101的三个不同批次的妇科断红饮胶囊；由检测结果可知，采用本对比例所述方法进行鉴别，目标斑点之间的Rf值有差异，难以准确判断供试品与益母草对照的斑点是否在相同位置，且斑点清晰程度差于实施例1?5。
[0066]对比例3
[0067]与实施例1相比，区别仅在于，采用专利文献CN101919942A公开的供试样品处理方法，制备供试样品溶液，具体为:取所述胶囊内容物1.2g，加乙醇30mL，加热回流lh，放冷，滤过，滤液浓缩至5mL，加于内径10mm、活性炭0.5g、100目-120目中性氧化招2g的活性炭-氧化铝柱上，用30mL乙醇洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加0.5mL乙醇溶解，作为供试品溶液;其余步骤同实施例1。
[0068]本对比例采用以上方法，分别鉴别了株洲千金药业股份有限公司生产的生产批号分别为20130701、20130901、20131101的三个不同批次的妇科断红饮胶囊，鉴别结果如图2所示(样品以及对照品对应的位置同实施例1)。由图2可知，采用本对比例所述方法进行鉴别，展板时出现严重拖尾，供试品难以实现有效分离，目标斑点模糊;且目标斑点之间的Rf值有差异，难以准确判断供试品与益母草对照的斑点是否在相同位置。
[0069]对比例4
[0070]与实施例1相比，区别仅在于，采用专利文献CN101919942A公开的薄层色谱法进行鉴别，具体为:以正丁醇-盐酸-水(4:1:0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾溶液至斑点显色，日光下检视;其余步骤同实施例1。
[0071]本对比例采用以上方法，分别鉴别了株洲千金药业股份有限公司生产的生产批号分别为20130701、20130901、20131101的三个不同批次的妇科断红饮胶囊；由检测结果可知，采用本对比例所述方法进行鉴别，展开时间需6?8小时(实施例1?5仅需I?1.5小时)，需反复喷显色剂，显色时间长达2-3天(实施例1?5可即刻显色)，且难以准确判断供试品与益母草对照的斑点是否颜色相同，斑点清晰度差于实施例1?5。
[0072]对比例5
[0073]采用《中国药典2015版》第一部第290页公开的益母草的鉴别方法对妇科断红饮胶囊进行检测;其中:
[0074]供试品溶液制备方法为，取所述胶囊内容物1.2g，加乙醇30mL，加热回流Ih，放冷，过滤，取滤液1ml蒸干，残渣加无水乙醇Iml使溶解，离心，取上清液作为供试品溶液；
[0075]另取盐酸水苏碱对照品，加无水乙醇制成每Iml含Img的溶液，作为对照品溶液；
[0076]照薄层色谱法为:吸取上述两种溶液各5?10μ1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以丙酮-无水乙醇-盐酸(10:6:1)为展开剂，展开，取出，瞭干，在105°C加热15分钟，放冷，喷以稀碘化铋钾试液-三氯化铁试液(10:1)混合溶液至斑点显色清晰。
[0077]由检测结果可知，采用本对比例所述方法进行鉴别，检测效果与对比例3类似，展板时出现严重拖尾，供试品难以实现有效分离，目标斑点模糊;且目标斑点之间的Rf值有差异，难以准确判断供试品与益母草对照的斑点是否在相同位置。
[0078]实验例1:不同薄层硅胶板耐用性考察
[0079]采用实施例1提供的方法，对三个批次的药品进行鉴别。其中，步骤(3)分别用自制薄层硅胶G板、购买自青岛海洋集团的预制薄层硅胶G板及高效薄层硅胶G板试验，点样量10μ?;鉴别结果如图3所示。
[0080]结果显示:使用不同的硅胶G板，供试品色谱中与对照品和对照药材色谱相应位置显相同颜色的斑点，阴性对照无干扰。说明此鉴别方法对不同硅胶G板具有较好的耐用性。
[0081]实验例2:不同温度条件下进行鉴别的效果考察
[0082]采用实施例1提供的方法，对三个批次的药品进行鉴别。其中，步骤(3)分别在5°C和30°C的环境温度下进行展开;鉴别结果如图4所示。
[0083]结果显示:按照上述不同温条件下进行试验，供试品色谱中与对照品和对照药材色谱相应位置显相同颜色的斑点，且斑点清晰，阴性对照无干扰，说明此鉴别方法在不同的环境温度条件下具有较好的耐用性。
[0084]实验例3:不同湿度条件下展开的薄层色谱条件耐用性考察
[0085]采用实施例1提供的方法，对三个批次的药品进行鉴别。其中，步骤(3)分别在30%和75 %的环境湿度下进行展开;鉴别结果如图5所示。
[0086]结果显示:按照上述不同湿度件下进行试验，供试品色谱中与对照品和对照药材色谱相应位置显相同颜色的斑点，且斑点清晰，阴性对照无干扰，说明此鉴别方法在不同的环境湿度条件下具有较好的耐用性。
[0087]本实验例分别采用专利文献CN101919942A的实施例6、7和8中“D、益母草的鉴别”公开的具体鉴别方案，在75%的环境湿度下进行展开，结果显示，该方法在75%的环境湿度条件下，在长时间内难以实现有效分离和显色；相比较而言，本发明实施例1?5提供的方法，仅需展开I?1.5小时、喷显色剂后3?6h，即可获得清晰且可以用于准确鉴别的斑点。
[0088]在所述高湿度的环境下，本发明实施例1?5可以获得清晰完整的斑点，展开所需时间以及获得可用于准确鉴别的清晰斑点所需的显色时间均明显短于对比例I?5。
[0089]由于本发明提供鉴别方法受环境湿度影响小，可适用于我国南方大部分地区常年潮湿多雨、湿度较大的环境，稳定性高，斑点清晰，明显缩短了鉴别时间，为妇科断红饮胶囊的快速、稳定鉴别提供了重要有效的手段。
[0090]虽然，上文中已经用一般性说明、【具体实施方式】及试验，对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。
【主权项】
1.妇科断红饮胶囊中益母草成分的鉴别方法，其特征在于，包括供试品溶液的制备、对照品溶液的制备以及照薄层色谱法鉴别； 所述供试品溶液的制备包括以下步骤:取妇科断红饮胶囊内容物1.4?1.Sg，溶于25?35ml无水乙醇，80?10 °C回流提取，放冷、过滤后收集滤液，蒸干，所得残渣加7ml?I Oml水溶解，以3000?5000转/分钟离心后取上清液，蒸干，上样于活性炭-氧化铝柱，用无水乙醇洗脱后收集洗脱液，蒸干，所得残渣用无水乙醇溶解，取上清液作为供试品溶液。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述供试品溶液的制备包括以下步骤:取妇科断红饮胶囊内容物1.5g?1.7g，溶于28ml?32ml无水乙醇，80?100°C回流提取50min?70min，放冷、过滤后收集滤液，水浴蒸干，所得残渣加7ml?9ml水溶解，以3800?4200转/分钟离心Smin?12min，取上清液，水浴蒸干，上样于活性炭-氧化铝柱，用无水乙醇洗脱后收集洗脱液，蒸干，所得残渣用无水乙醇溶解，取上清液作为供试品溶液。3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述活性炭-氧化铝柱的填料由活性炭和200?300目中性氧化铝以重量比4?6:15?25均匀混合而成； 优选由活性炭0.4?0.6g和200?300目氧化铝I.5?2.5g均匀混合而成。4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述活性炭-氧化铝柱的内径为15mm或20mm，优选为内径20mm ； 所述用无水乙醇洗脱的洗脱体积为20ml?40ml，优选为28ml?32ml。5.根据权利要求1?4任意一项所述的方法，其特征在于，所述对照品溶液包括益母草对照溶液和盐酸水苏碱对照品溶液； 所述益母草对照溶液的制备方法为:取益母草药材2.9g?3.lg，采用与制备供试品溶液相同的方法制备； 所述盐酸水苏碱对照品溶液的制备方法为:取盐酸水苏碱对照品，加无水乙醇溶解至浓度为4.8?5.2mg/ml，即可。6.根据权利要求1?5任意一项所述的方法，其特征在于，照薄层色谱法鉴别采用的展开剂由丙酮、无水乙醇和盐酸以体积比9?11:5?7:1组成，优选以体积比10:6:1组成。7.根据权利要求1?6任意一项所述的方法，其特征在于，照薄层色谱法鉴别中，采用展开剂展开、晾干后，先在100?110°C加热10?20min，放冷后喷以8?12%硫酸乙醇溶液，在100?110°C烘干2?4min，再喷以显色剂进行显色。8.根据权利要求1?7任意一项所述的方法，其特征在于，照薄层色谱法鉴别采用的显色剂由稀碘化铋钾溶液与I %三氯化铁乙醇溶液以体积比8?12:1混合而成，优选以体积比10:1混合而成。9.妇科断红饮胶囊中益母草成分的鉴别方法，其特征在于，包括以下步骤: (1)供试品溶液的制备:取妇科断红饮胶囊内容物1.4?1.8g，溶于25?35ml无水乙醇，80?100 °C回流提取50min?70min，放冷、过滤后收集滤液，水浴蒸干，所得残渣加7ml?1ml水溶解，以3000?5000转/分钟离心8min?12min，取上清液，水浴蒸干，上样于活性炭-氧化招柱，所述活性炭-氧化招柱的内径为15mm或20mm，其填料由活性炭0.4?0.6g和200?300目氧化招1.5?2.5g均勾混合而成；用20ml?40ml无水乙醇洗脱后收集洗脱液，蒸干，所得残渣用0.5ml?1.5ml无水乙醇溶解，取上清液作为供试品溶液； (2)益母草对照溶液的制备:取益母草药材2.9g?3.lg，采用与制备供试品溶液相同的方法，制备益母草对照溶液； 盐酸水苏碱对照品溶液的制备:取盐酸水苏碱对照品，加无水乙醇溶解至浓度为4.8?.5.2mg/ml； (3)照薄层色谱法鉴别:取所述供试品溶液、益母草对照溶液和盐酸水苏碱对照品溶液各10?15μ1，平行点样于同一块娃胶G板上，以体积比为9?11:5?7:1的丙酮_无水乙醇-盐酸为展开剂展开，晾干后，在100?110°C加热10?20min，放冷，喷以8?12%硫酸乙醇溶液，在100?110°C烘干2?4min，再喷以体积比为8?12:1的稀碘化铋钾试液-1 %三氯化铁乙醇混合溶液，日光下检视，即可。10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，包括以下步骤: (1)供试品溶液的制备:取妇科断红饮胶囊内容物1.5g?1.7g，溶于28ml?32ml无水乙醇，80?100 0C回流提取50min?70min，放冷、过滤后收集滤液，水浴蒸干，所得残渣加7ml?9ml水溶解，以3800?4200转/分钟离心8min?12min，取上清液，水浴蒸干，上样于活性炭_氧化招柱，所述活性炭-氧化招柱的内径为15mm或20mm，其填料由活性炭0.4?0.6g和200?300目氧化招1.5?2.5g均勾混合而成；用28ml?32ml无水乙醇洗脱后收集洗脱液，蒸干，所得残渣用0.8ml?1.2ml无水乙醇溶解，取上清液作为供试品溶液； (2)益母草对照溶液的制备:取益母草药材2.9g?3.lg，采用与制备供试品溶液相同的方法，制备益母草对照溶液； 盐酸水苏碱对照品溶液的制备:取盐酸水苏碱对照品，加无水乙醇溶解至浓度为4.8?.5.2mg/ml； (3)照薄层色谱法鉴别:取所述供试品溶液、益母草对照溶液和盐酸水苏碱对照品溶液各10?15μ1，平行点样于同一块娃胶G板上，以体积比为9?11:5?7:1的丙酮_无水乙醇-盐酸为展开剂展开，晾干后，在100?110°C加热10?20min，放冷，喷以8?12%硫酸乙醇溶液，在100?110°C烘干2?4min，再喷以体积比为8?12:1的稀碘化铋钾试液-1 %三氯化铁乙醇混合溶液，日光下检视，即可。
【文档编号】G01N30/90GK105911210SQ201610220329
【公开日】2016年8月31日
【申请日】2016年4月11日
【发明人】张英帅, 凌勇根, 白璐, 伍实花
【申请人】株洲千金药业股份有限公司