固相载体、固相载体的制造方法、亲和精制用载体、亲和色谱用填充剂的制造方法、亲和色...的制作方法

固相载体、固相载体的制造方法、亲和精制用载体、亲和色谱用填充剂的制造方法、亲和色 ...的制作方法
【专利摘要】本发明提供一种在固定有配体时发挥高的动态结合容量，而且，具有优异的防污性且杂质难以非特异吸附的固相载体和亲和精制用载体。一种固相载体，是具有可固定配体的官能团的固相载体，其特征在于，具有如下基团：具有亚磺酰基、硫醚基、氧基或亚氨基与羟基、硫醇基、氨基、羧基、硫酸基、磷酸基或烷酰基的基团。
【专利说明】
固相载体、固相载体的制造方法、亲和精制用载体、亲和色谱 用填充剂的制造方法、亲和色谱用填充剂、色谱柱和精制方法
技术领域
[0001] 本发明设及固相载体、固相载体的制造方法、亲和精制用载体、亲和色谱用填充剂 的制造方法、亲和色谱用填充剂、色谱柱和精制方法。
【背景技术】
[0002] 亲和色谱在包含单克隆抗体的蛋白质的研究、开发和制造中承担重要的作用。一 般而言，其中使用的亲和精制用载体包含与祀物质选择性结合的配体、具有用于结合该配 体的反应性基团的固相载体。亲和色谱法中，固相载体上的配体相对于祀物质具有高的选 择性，因此与离子色谱法、凝胶过滤色谱法、反相液体色谱法等其它色谱法相比，能够W优 异的收率且W高速进行经济的精制。
[0003] -般而言，作为蛋白精制用的亲和色谱所要求的性能，可举出祀蛋白质W外的杂 质难W非特异吸附、在固定有配体时具备对与该配体所对应的祀蛋白质的动态结合容量。
[0004] 在运种情况下，作为亲和精制用载体的固相载体，提出了琼脂糖粒子(专利文献1、 2)、由苯乙締-二乙締基苯的共聚物构成的多孔粒子(专利文献3、4)、由甲基丙締酸醋系乙 締基单体的聚合体构成的多孔粒子(专利文献5、6)。
[0005] 现有技术文献
[0006] 专利文献
[0007] 专利文献1:日本特表2008-523140号公报 [000引专利文献2:日本特表2009-522580号公报
[0009] 专利文献3:日本特开平08-278299号公报
[0010] 专利文献4:日本特表平10-501173号公报
[0011] 专利文献5:国际公开第2011/125674号
[0012] 专利文献6:日本特开2012-141212号公报

【发明内容】

[0013] 在如上述的背景下，本发明的课题是提供一种在固定有配体时发挥高的动态结合 容量，而且，具有优异的防污性且杂质难W非特异吸附的固相载体和亲和精制用载体。
[0014] 因此，本发明的发明人等进行了深入研究，其结果发现，除具有可固定配体的官能 团W外，进一步具有W下基团的固相载体具有优异的防污性，而且在固定有配体时发挥高 的动态结合容量，从而完成了本发明，所述基团是:具有亚横酷基、硫酸基、氧基或亚氨基与 径基、硫醇基、氨基、簇基、硫酸基、憐酸基或烧酷基的基团。
[0015] 此外，本发明的发明人等进行了深入研究，其结果发现，具有由高分子化合物构成 的固相载体的亲和精制用载体具有优异的防污性，且在固定有配体时发挥高的动态结合容 量，从而完成了本发明，上述高分子化合物具有介由硫基、亚横酷基或横酷基的特定的末端 结构。
[0016] 目P，本发明提供<1> 一种固相载体（W下将该固相载体也称为固相载体A),是具 有可固定配体的官能团的固相载体，其特征在于，具有W下基团：具有亚横酷基、硫酸基、氧 基或亚氨基与径基、硫醇基、氨基、簇基、硫酸基、憐酸基或烧酷基的基团。
[0017] 此外，本发明提供<2>-种固相载体的制造方法下将该制造方法也称为制造 方法B)，该固相载体具有可固定配体的官能团和由下述式(5-1)、（5-2)或（5-3)表示的基 团，上述固相载体的制造方法包括:使具有可固定配体的官能团的固相载体与由下述式(4) 表示的化合物接触的工序。
[001 引 R2-Y-H (4)
[0019] 〔式(4)中，
[0020] R2表示碳原子数1~10的1价的有机基团，
[0021] Y表示硫酸基、氧基或亚氨基。）
[0022]
[0023] 〔式(5-1)中，
[0024] R嗦示碳原子数1~6的2价的控基，
[00巧]**表示结合位点，
[0026] R2和Y与上述同义。）
[0027]
[002引〔式(5-2)中，R2、Y和**与上述同义。）
[0029]
[0030] 〔式(5-3)中，R2、Y和**与上述同义。）
[0031] 进而，本发明提供<3>-种亲和色谱用填充剂的制造方法下将该制造方法也 称为制造方法C)，其包括:将配体固定于上述<1>的固相载体或通过上述<2>的制造方 法制造的固相载体的工序。
[0032] 进而，本发明提供<4>一种亲和色谱用填充剂，其是通过上述<3>的制造方法 而得到的。
[0033] 进而，本发明提供<5>-种亲和精制用载体下将该亲和精制用载体也称为亲 和精制用载体D)，是具有固相载体与配体或用于键合配体的反应性基团的亲和精制用载 体，
[0034] 上述配体或用于键合配体的反应性基团与固相载体键合，
[0035] 构成上述固相载体的高分子具有介由硫基、亚横酷基或横酷基在链的末端具有选 自径基、硫醇基、幾基、氨基、硫基、二硫酸基、亚横酷基、横酷基、簇基、硫酸基和憐酸基中的 至少一个的末端结构。
[0036] 进而，本发明提供<6>-种色谱柱用填充剂，其W上述<5>的亲和精制用载体 为载体。
[0037] 进而，本发明提供<7>-种色谱柱，在柱容器中填充有上述<4>或<6>的填充 剂。
[0038] 进而，本发明提供<8>-种祀物质的精制方法，其特征在于，包括:准备含有祀物 质的组合物的工序，W及使上述组合物通液于上述<7>的色谱柱的工序。
[0039] 本发明的固相载体A具有优异的防污性，如宿主细胞蛋白质化CP =化St Cell Protein)等的杂质难W非特异吸附。而且，在固定有配体时发挥高的动态结合容量。
[0040] 此外，本发明的亲和精制用载体D具有优异的防污性，如宿主细胞蛋白质化CP = 化St Cell Protein)等的杂质难W非特异吸附。而且，在固定有配体时发挥高的动态结合 容量。
[0041] 因此，对于本发明的亲和色谱用填充剂和色谱柱，与配体所对应的祀物质的动态 结合容量大，具有优异的防污性。
[0042] 此外，根据本发明的固相载体的制造方法B、本发明的亲和色谱用填充剂的制造方 法C，可W简便地制造具有如上述的性能的固相载体、亲和色谱用填充剂。
【附图说明】
[0043] 图1是表示本发明的固相载体的制造方法的一个例子的图。
[0044] 图2是表示本发明的亲和色谱用填充剂的制造方法的一个例子的图。
【具体实施方式】
[0045] <固相载体八>
[0046] 本发明的固相载体A的特征在于，除具有可固定配体的官能团W外，还具有如下基 团：具有亚横酷基（>S(=0))、硫酸基（>S)、氧基（>0)或亚氨基（>NH)与径基(-OH)、硫醇 基(-SH)、氨基(-顺）、簇基(-C00H)、硫酸基(-〇S(=〇M〇H))、憐酸基(-0P(=0)(0H)2)或烧 酷基的基团。另外，该烧酷基可W是直链状也可W是支链状，其碳原子数优选为2~10,更优 选为2~6,特别优选为2~4。作为烧酷基，可举出乙酷基、丙酷基、下酷基、戊酷基。
[0047] 此外，本发明的固相载体A是配体未固定于可固定配体的官能团的固相载体。
[0048] 作为上述可固定配体的官能团，例如，可举出环状酸基、簇基、下二酷亚胺氧基、甲 酷基、异氯酸醋基、氨基。运些之中，优选环状酸基，更优选构成环的原子数为3~7个的环状 酸基，进一步优选为由下述式或（1-3)表示的基团，特别优选为由下述式（1-1) 表示的基团。
[0049]
[0化0]〔式（1-1)中，
[0051] Ri表示碳原子数1~6的2价的控基，
[0化2] *表示结合位点。）
[0化3]
[0化4]〔式（1-2)中，*与上述同义。）
[0化5]
[0化6]〔式（1-3)中，*与上述同义。）
[0057]式（1-1)中，Ri表示碳原子数1~6的2价的控基。作为运样的2价的控基的碳原子 数，优选为1~4,更优选为1或2,特别优选为1。此外，2价的控基可W是直链状也可W是支链 状。
[005引此外，上述2价的控基优选为2价的脂肪族控基，更优选为烧二基。作为优选的具体 例，可举出甲烧-1,1-二基、乙烧-1,1-二基、乙烧-1,2-二基等。
[0059] 此外，本发明的固相载体A具有如下基团：具有亚横酷基、硫酸基、氧基或亚氨基与 径基、硫醇基、氨基、簇基、硫酸基、憐酸基或烧酷基的基团，在径基、硫醇基、氨基、簇基、硫 酸基、憐酸基、烧酷基中，从在固定有配体时的动态结合容量、防污性的观点出发，优选为径 基、硫醇基、簇基、硫酸基、烧酷基，更优选为径基、簇基、硫酸基，特别优选为径基。作为具有 亚横酷基、硫酸基、氧基或亚氨基与径基的基团的优选具体例，可举出由下述式（2-1)、（2- 2)或(2-3)表示的基团，特别优选为由下述式(2-1)表示的基团。
[0060]
[0061] 〔式(2-1)中，
[0062] R2表示碳原子数1~10的1价的有机基团，
[0063] X表示亚横酷基、硫酸基、氧基或亚氨基，
[0064] **表示结合位点，
[0065] Ri与上述同义，表示碳原子数1~6的2价的控基。）
[0066]
[0067]〔式(2-2)中，R2、X和**与上述同义。）
[006引
[00例〔式(2-3)中，R2、X和**与上述同义。）
[0070] 式（2-1)~（2-3)中，X表示亚横酷基、硫酸基、氧基或亚氨基，从防污性的观点出 发，优选为亚横酷基、硫酸基、氧基，特别优选为亚横酷基。
[0071] 此外，式(2-1)~（2-3)中，R2表示碳原子数1~10的1价的有机基团。作为运样的1 价的有机基团的碳原子数，从在固定有配体时的动态结合容量、防污性的观点出发，优选为 1~8,更优选为1~6,进一步优选为2~4。
[0072] 此外，作为上述1价的有机基团，可举出1价的控基、该1价的控基所含的氨原子的 至少1个W上被亲水性基团取代的基团、-(护〇)m-H(R6表示碳原子数2~4的烧二基，m表示1 ~50的整数）。它们可W是直链状也可W是支链状。
[0073] 此外，上述1价的控基是包含1价的脂肪族控基、1价的脂环式控基和1价的芳香族 控基的概念，优选为1价的脂肪族控基，更优选为烷基。作为运样的烷基的碳原子数，从亲水 性、在固定有配体时的动态结合容量的观点出发，优选为1~8,更优选为1~6,进一步优选 为2~4。
[0074] 作为上述烷基的具体例，可举出甲基、乙基、正丙基、异丙基、正下基、异下基、仲下 基、叔下基、戊基、己基、庚基、辛基等。
[0075] 此外，作为上述亲水性基团，可举出径基、簇基、氨基、横基、硫醇基、憐酸基、醒基 等，从在固定有配体时的动态结合容量、防污性的观点出发，优选为径基。
[0076] 此外，亲水性基团的取代位置和个数是任意的，从在固定有配体时的动态结合容 量、防污性的观点出发，其个数优选为1~6个，更优选为1~4个，特别优选为2个。
[0077] 此外，上述-(R60)m-H中，作为由R6表示的烧二基的碳原子数，优选为2或3,更优选 为2。此外，运样的烧二基可W是直链状也可W是支链状。作为具体例，可举出乙烧-1,1-二 基、乙烧-1,2-二基、丙烷-1,1-二基、丙烷-1,2-二基、丙烷-1,3-二基、丙烷-2,2-二基、下 烧-1,2-^基、了烧-1,3-^基、了烧-1,4-^基等。
[0078] 此外，m表示1~50的整数，从防污性、在固定有配体时的动态结合容量、耐压性能 的观点出发，优选为1~30的整数，更优选为1~25的整数，进一步优选为1~20的整数，进一 步优选为1~15的整数，进一步优选为1~10的整数，进一步优选为1~5的整数，特别优选为 1~3的整数。
[0079] 运样的R2中，优选为上述1价的控基所含的氨原子的至少1个W上被亲水性基团取 代的基团，作为优选的具体例，可举出由下述式(3)表示的1价的有机基团。
[0080]
[0081] 〔式(3)中，
[0082] R3表示碳原子数1~10的2价或3价的有机基团，
[0083] η 表示 1 或2。）
[0084] 式(3)中，作为由R3表示的2价或3价的有机基团的碳原子数，从在固定有配体时的 动态结合容量、防污性的观点出发，优选为1~8,更优选为1~6,进一步优选为2~4。
[0085] 此外，作为上述2价的有机基团，可举出2价的控基，可W是直链状也可W是支链 状。上述2价的控基优选为2价的脂肪族控基，更优选为烧二基。作为运样的烧二基的碳原子 数，从在固定有配体时的动态结合容量、防污性的观点出发，优选为1~8,更优选为1~6,进 一步优选为2~4。
[0086] 作为上述烧二基的具体例，可举出甲烧-1,1-二基、乙烧-1,1-二基、乙烧-1,2-二 基、丙烷-1,1-二基、丙烷-1,2-二基、丙烷-1,3-二基、丙烷-2,2-二基等。
[0087] 此外，作为上述3价的有机基团，可举出3价的控基，可W是直链状也可W是支链 状。上述3价的控基优选为3价的脂肪族控基，更优选为烧Ξ基。作为运样的烧Ξ基的碳原子 数，从在固定有配体时的动态结合容量、防污性的观点出发，优选为1~8,更优选为1~6,进 一步优选为2~4。
[0088] 作为上述烧Ξ基的具体例，可举出甲烷基、乙烧-1，1，2-Ξ基、丙烷-1， 2，3-Ξ基、丙烷-1，2，2-Ξ基等。
[0089] 此外，式(3)中，作为η，从在固定有配体时的动态结合容量、防污性的观点出发，优 选为2。
[0090] 此外，作为可固定配体的官能团的含量，从可固定的配体量和在固定有配体时的 动态结合容量的观点出发，相对于Ig的固相载体A，优选为0.05~6.5mmol，更优选为0.2~ 3.5mmol，特别优选为0.5~2mmol。
[0091] 可固定配体的官能团的含量只要按照各官能团的定量方法即可，例如若为环氧 基，则能够在W酸开环并W碱中和后，通过W酸进行反向滴定等来进行测定。
[0092] 此外，作为亚横酷基、硫酸基、氧基或亚氨基的含量，从在固定有配体时的动态结 合容量和防污性的观点出发，相对于Ig的固相载体A，优选为0.1~6.5mmol，更优选为0.5~ 4.5mmo 1，特别优选为1~3mmo 1。
[0093] 此外，固相载体A含有亚横酷基时，作为亚横酷基的含量，从在固定有配体时的动 态结合容量和防污性的观点出发，相对于Ig的固相载体A，优选为0.1~6.5mmol，更优选为 0.5~4.5mmol，特别优选为1~3mmol。
[0094] 此外，固相载体A具有硫酸基时，作为硫酸基的含量，从在固定有配体时的动态结 合容量和防污性的观点出发，相对于Ig的固相载体A，优选为0.1~6.5mmol，更优选为0.5~ 4.5mmo 1，特别优选为1~3mmo 1。
[00M]此外，固相载体A具有亚横酷基和硫酸基时，亚横酷基与硫酸基的含量的比率W摩 尔比计优选为100:0~30:70，更优选为100:0~50:50，特别优选为100:0~70:30。
[0096] 此外，本发明的固相载体A优选在表面具有上述可固定配体的官能团。此外，优选 在表面具有上述具有亚横酷基、硫酸基、氧基或亚氨基与径基、硫醇基、氨基、簇基、硫酸基、 憐酸基或烧酷基的基团。
[0097] 此外，作为本发明的固相载体A，优选为包含具有上述可固定配体的官能团和上述 具有亚横酷基、硫酸基、氧基或亚氨基与径基、硫醇基、氨基、簇基、硫酸基、憐酸基或烧酷基 的基团的树脂的固相载体，更优选为在表面包含上述树脂的固相载体。
[0098] 此外，固相载体A的形态可W是整块、膜、中空纤维、粒子、盒、薄片等中的任一者， 优选为粒子。此外，固相载体A可W是多孔质也可W是非多孔质，从提高表面积的观点出发， 优选为多孔粒子等经多孔化的固相载体。此外，作为多孔粒子，优选为多孔聚合物粒子。此 夕h上述树脂只要具有上述可固定配体的官能团和上述具有亚横酷基、硫酸基、氧基或亚氨 基与径基、硫醇基、氨基、簇基、硫酸基、憐酸基或烧酷基的基团则没有特别限定，可W是由 琼脂糖、葡聚糖、纤维素等多糖类构成的天然高分子，也可W是合成高分子。作为树脂，优选 为具有来自締键式不饱和单体的结构单元的树脂。例如，具有来自选自苯乙締系单体、乙締 基酬系单体、（甲基)丙締腊系单体、（甲基)丙締酸醋系单体和（甲基)丙締酷胺系单体中的1 种或巧巾W上的单体的结构单元的树脂等。
[0099] 此外，本发明的固相载体A由高分子构成时，该高分子可W具有介由硫基、亚横酷 基或横酷基在链的末端具有选自径基、硫醇基、幾基、氨基、硫基、二硫酸基、亚横酷基、横酷 基、簇基、硫酸基和憐酸基中的至少一个的末端结构。运样的高分子、其末端结构与亲和精 制用载体D所具有的同样。
[0100] 此外，本发明的固相载体A为粒子时，从耐压性能的观点出发，其平均粒径(体积平 均粒径)优选为20~150μηι，更优选为40~100μηι。此外，平均粒径的变动系数优选为40% W 下，更优选为30%W下。
[0101] 此外，从在固定有配体时的动态结合容量的观点出发，本发明的固相载体A的比表 面积W孔径lOnm~5000nm的比表面积计，优选为TOmVgW上，更优选为90mVgW上。
[0102] 此外，从在固定有配体时的动态结合容量的观点出发，本发明的固相载体A的比表 面积W孔径lOnm~5000nm的比表面积计，优选为TOmVgW上，更优选为90mVgW上。
[0103] 平均粒径和比表面积可W利用激光衍射?散射式粒度分析测定装置、水银孔率计 等进行测定。
[0104] 接着，对本发明的固相载体A的制造方法详细地进行说明。
[0105] 本发明的固相载体A只要适当组合常法来制造即可，没有特别限定，例如，可W通 过W下方法〔PR-n和〔PR-2)得至Ij。根据方法〔PR-υ和〔PR-2)，可W简便地得到具有优异的 防污性，且在固定有配体时发挥高的动态结合容量的固相载体A。
[0106] 〔PR-1)使具有可固定配体的官能团的固相载体下也称为原料载体(1))与由式 (4)表示的化合物接触的方法。具体而言，可举出<工序1-1>按照常法得到原料载体（I)， <工序1-2>使原料载体(1)与由式(4)表示的化合物接触的方法。
[0107] 根据运样的方法〔PR-1)，可得到具有可固定配体的官能团和由式(5-1)、（5-2)或 (5-3)表示的基团的固相载体。
[0108] 〔PR-2)使由式(4)表示的化合物中Y为硫酸基的化合物与原料载体（I)接触，得到 具有可固定配体的官能团和由式(5-1)、巧-2)或(5-3)表示的基团的固相载体中Y为硫酸基 的固相载体下也称为含硫酸基固相载体(II))，使含硫酸基固相载体(II)与氧化剂接触 的方法。
[0109] 具体而言，是 <工序2-1 >按照常法得到原料载体（I )，<工序2-2>使由式(4)表 示的化合物中Y为硫酸基的化合物与原料载体(1)接触，得到含硫酸基固相载体(II)，<工 序2-3>使含硫酸基固相载体(II)与氧化剂接触的方法。
[0110] 根据运样的方法〔PR-2)，可得到具有可固定配体的官能团和由式(6-1)、（6-2)或 (6-3)表示的基团的固相载体。
[0111] r2-Y-H (4)
[0112] 〔式(4)中，
[0113] Υ表示硫酸基、氧基或亚氨基，
[0114] R2与上述同义，表示碳原子数1~10的1价的有机基团。）
[0115]
[0116] 〔式(5-1)中，
[0117] Ri与上述同义，表示碳原子数1~6的2价的控基，
[011引R2与上述同义，表示碳原子数1~10的1价的有机基团，
[0119] Y与上述同义，表示硫酸基、氧基或亚氨基。
[0120] 此外，**表示结合位点。）
[0130]〔式(6-3)中，R哺**与上述同义。）
[0131] W下，对上述各工序详细地进行说明。
[0132] < 工序 1-1 和 2-1>
[0133] 工序1-1和2-1是得到原料载体(1)的工序。例如，只要使具有可固定配体的官能团 的单体(共)聚合即可。上述(共)聚合的方法例如可举出接种聚合、悬浮聚合等，优选为悬浮 寧厶 來口 〇
[0134] 运里，作为原料载体（I)所含的可固定配体的官能团，例如，可举出环状酸基、簇 基、下二酷亚胺氧基、甲酯基、异氯酸醋基、氨基。运些之中，优选为环状酸基，更优选构成环 的原子数为3~7个的环状酸基，进一步优选为由下述式（1-1)、（1-2)或（1-3)表示的基团， 特别优选为由下述式(1-1)表示的基团。
[0135]
[0136] 〔式(1-1)中，
[0137] Ri表示碳原子数1~6的2价的控基，
[013引*表示结合位点。）
[0139]
[0140] 〔式（1-2)中，*与上述同义。）
[0141]
[0142] 〔式（1-3)中，*与上述同义。）
[0143] 式（1-1)中，Ri表示碳原子数1~6的2价的控基。作为运样的2价的控基的碳原子 数，优选为1~4,更优选为1或2,特别优选为1。此外，2价的控基可W是直链状也可W是支链 状。
[0144] 此外，上述2价的控基优选为2价的脂肪族控基，更优选为烧二基。作为优选的具体 例，可举出甲烧-1,1-二基、乙烧-1,1-二基、乙烧-1,2-二基等。
[0145] 作为具有可固定配体的官能团的单体，优选为具有由式（1-1)表示的基团的单体， 例如，可举出含环氧基不饱和单体。作为运样的含环氧基不饱和单体，优选为（甲基)丙締酸 醋系单体、苯乙締系单体等，更优选为（甲基)丙締酸醋系单体，特别优选为由下述式(7)表 示的（甲基)丙締酸醋系单体。
[0146]
[0147] 〔式(7)中，
[014引 R4表示氨原子或甲基，
[0149] R5表示单键、碳原子数1~10的2价的控基或-(R60)m-(R6表示碳原子数2~4的烧二 基，m表示1~50的整数），
[0150] Ri与上述同义，表示碳原子数1~6的2价的控基。）
[0151] 作为由R5表示的2价的控基的碳原子数，优选为1~8,更优选为1~6,进一步优选 为1~4。2价的控基可W是直链状也可W是支链状。
[0152] 此外，上述2价的控基优选为2价的脂肪族控基，更优选为烧二基。作为运样的烧二 基的碳原子数，优选为1~8,更优选为1~6,进一步优选为1~4。
[0153] 作为上述烧二基的具体例，可举出甲烧-1,1-二基、乙烧-1,1-二基、乙烧-1,2-二 基、丙烷-1,1-二基、丙烷-1,2-二基、丙烷-1,3-二基、丙烷-2,2-二基等。
[0154] 作为由R6表示的烧二基的碳原子数，优选为2或3,更优选为2。此外，运样的烧二基 可W是直链状也可W是支链状。作为具体例，可举出乙烧-1,1-二基、乙烧-1,2-二基、丙烷- 1,1-二基、丙烷-1,2-二基、丙烷-1,3-二基、丙烷-2,2-二基、下烧-1,2-二基、下烧-1,3-二 基、下烧-1，4-二基等。
[01W] 此外，m表示1~50的整数，优选为1~30的整数，更优选为1~25的整数，进一步优 选为1~20的整数，进一步优选为1~15的整数，进一步优选为1~10的整数，进一步优选为1 ~5的整数，特别优选为1~3的整数。
[0156] 此外，如上述的R5中，优选为单键。
[0157] 此外，作为上述具有可固定配体的官能团的单体，可举出（甲基)丙締酸缩水甘油 醋、4-径基下基（甲基）丙締酸醋缩水甘油酸、α-(甲基）丙締酸醋基-ω-缩水甘油基聚乙二 醇、（4-乙締基苄基)缩水甘油酸、（甲基)丙締酸(7-氧杂双环[4.1.0]庚烧-3-基）甲醋、締丙 基缩水甘油酸、3,4-环氧-1-下締、3,4-环氧-3-甲基-1-下締等，可W单独使用1种或组合使 用2种W上。
[0158] 此外，作为上述具有可固定配体的官能团的单体的合计使用量，从可固定的配体 量和在固定有配体时的动态结合容量的观点出发，相对于单体总量100质量份，优选为1~ 90质量份，更优选为20~80质量份，特别优选为30~70质量份。
[0159] 此外，工序1-1和2-1中，也可W与具有可固定配体的官能团的单体一起使用其它 单体。作为该其它单体，也可W使用非交联性单体、交联性单体中的任一者，也可W并用它 们。
[0160] 作为上述非交联性单体，可举出含径基的非交联性不饱和单体、不含径基的非交 联性不饱和单体，作为交联性单体，可举出含径基的交联性不饱和单体、不含径基的交联性 不饱和单体。
[0161] 作为上述含径基的非交联性不饱和单体，优选为（甲基）丙締酸醋系单体、（甲基） 丙締酷胺系单体，更优选为（甲基)丙締酸醋系单体。其中，特别优选为由下述式(8)表示的 (甲基)丙締酸醋系单体。另外，作为上述含径基的非交联性不饱和单体所含的径基的个数， 优选为1~5,更优选为1~3。
[0162]
[0163] 试(8)中，
[0164] 护表示氨原子或甲基，
[0165] R8表示碳原子数1~6的3价的控基。）
[0166] 由R8表示的3价的控基可W是直链状也可W是支链状。此外，其碳原子数优选为2 ~4。
[0167] 此外，上述3价的控基优选为3价的脂肪族控基，更优选为烧Ξ基。具体而言，可举 出乙烧-1，1，2-Ξ基等。
[0168] 作为上述含径基的非交联性不饱和单体，例如可举出甘油单（甲基)丙締酸醋、Ξ 径甲基乙烧单（甲基）丙締酸醋、Ξ径甲基丙烷单（甲基）丙締酸醋、下Ξ醇单（甲基）丙締酸 醋、聚乙二醇单（甲基)丙締酸醋、季戊四醇单（甲基)丙締酸醋、二季戊四醇单（甲基)丙締酸 醋、肌醇单（甲基)丙締酸醋、（甲基)丙締酸径基乙醋、（甲基)丙締酸径基丙醋、径基乙基（甲 基)丙締酷胺等，可W单独使用1种或组合使用巧巾W上。
[0169] 此外，作为上述含径基的非交联性不饱和单体的合计使用量，从动态结合容量、防 污性的观点出发，相对于单体总量100重量份，优选为0~70质量份，更优选为3~50质量份， 特别优选为5~20质量份。
[0170] 此外，作为上述不含径基的非交联性不饱和单体，优选为（甲基)丙締酸醋系单体、 (甲基)丙締酷胺系单体，更优选为（甲基)丙締酸醋系单体。其中，特别优选为由下述式(9) 表示的（甲基)丙締酸醋系单体。
[0171]
[0172] 〔式(9)中，
[0173] R9表示氨原子或甲基，
[0174] RW表示碳原子数2~4的烧二基，
[0175] Rii表示碳原子数1~6的1价的控基，
[0176] P表示0~50的整数。）
[0177] 作为由rW表示的烧二基的碳原子数，优选为2或3,更优选为2。此外，运样的烧二基 可W是直链状也可W是支链状。作为具体例，可举出乙烧-1,1-二基、乙烧-1,2-二基、丙烷- 1,1-二基、丙烷-1,2-二基、丙烷-1,3-二基、丙烷-2,2-二基、下烧-1,2-二基、下烧-1,3-二 基、下烧-1，4-二基等。
[0178] 作为由Rii表示的1价的控基的碳原子数，优选为1~4,更优选为1或2。
[0179] 上述1价的控基是包含1价的脂肪族控基、1价的脂环式控基和1价的芳香族控基的 概念，优选为1价的脂肪族控基。1价的脂肪族控基可W是直链状也可W是支链状。
[0180] 作为1价的脂肪族控基，优选为烷基。作为运样的烷基的碳原子数，优选为1~4,更 优选为1或2。
[0181] 作为上述烷基的具体例，可举出甲基、乙基、正丙基、异丙基、正下基、异下基、仲下 基、叔下基、戊基、己基等。
[0182] P表示0~50的整数，优选为1~25的整数，更优选为1~15的整数。
[0183] 作为上述不含径基的非交联性不饱和单体，例如，可举出甲氧基聚乙二醇（甲基） 丙締酸醋、（甲基）丙締酸甲醋、（甲基）丙締酸乙醋、（甲基）丙締酸下醋、（甲基)丙締酸环己 醋、（甲基）丙締酸甲氧基乙醋、（甲基）丙締酷胺、二甲基（甲基）丙締酷胺、（甲基）丙締酷基 吗嘟、双丙酬（甲基)丙締酷胺等，可W单独使用1种或组合使用巧巾W上。
[0184] 此外，作为不含径基的非交联性不饱和单体的合计使用量，从动态结合容量、防污 性的观点出发，相对于单体总量100质量份，优选为0~70质量份，更优选为3~50质量份，特 别优选为5~30质量份。
[0185] 此外，作为上述含径基的交联性不饱和单体，优选为2~5官能的不饱和单体，更优 选为2或3官能的不饱和单体。此外，作为含径基的交联性不饱和单体所含的径基的个数，从 动态结合容量和防污性的观点出发，优选为1~5,更优选为1~3。
[0186] 此外，作为含径基的交联性不饱和单体，优选为（甲基）丙締酸醋系单体。其中，特 别优选为由下述式(10)表示的（甲基)丙締酸醋系单体。
[0187]
[018 引〔式（10)中，
[01例 Ri哺R13各自独立地表示氨原子或甲基，
[0190] RM表示碳原子数1~8的3价的控基。）
[0191] 由RM表示的3价的控基可W是直链状也可W是支链状。此外，其碳原子数优选为1 ~5。
[0192] 此外，上述3价的控基优选为3价的脂肪族控基，更优选为烧Ξ基。具体而言，可举 出甲烷基等。
[0193] 作为上述含径基的交联性不饱和单体，例如，可举出甘油二（甲基)丙締酸醋、Ξ径 甲基乙烧二（甲基炳締酸醋、立径甲基丙烷二（甲基)丙締酸醋、下立醇二（甲基)丙締酸醋、 季戊四醇二（甲基)丙締酸醋、季戊四醇Ξ(甲基)丙締酸醋、二季戊四醇二（甲基)丙締酸醋、 二季戊四醇=(甲基）丙締酸醋、二季戊四醇四（甲基)丙締酸醋、二季戊四醇五（甲基）丙締 酸醋、肌醇二（甲基）丙締酸醋、肌醇Ξ(甲基）丙締酸醋、肌醇四（甲基）丙締酸醋等，可W单 独使用1种或组合使用巧巾W上。
[0194] 此外，使用含径基的交联性不饱和单体时，作为其合计使用量，从动态结合容量、 防污性的观点出发，相对于单体总量100质量份，优选为0~70质量份，更优选为3~50质量 份，优选为5~20质量份。
[01Μ]此外，作为上述不含径基的交联性不饱和单体，优选为2~5官能的不饱和单体，更 优选为2或3官能的不饱和单体。
[0196]此外，作为不含径基的交联性不饱和单体，优选为（甲基）丙締酸醋系单体。其中， 特别优选为由下述式(11)或（12)表示的（甲基)丙締酸醋系单体。
[0197]
[019 引〔式（11)中，
[0199] Ris~RU各自独立地表示氨原子或甲基，
[0200] R"表示碳原子数1~6的3价的控基。）
[0201]
[0202]〔式(12)中，
[020；3] Ri哺r2〇各自独立地表示氨原子或甲基，
[0204] R2嗦示碳原子数2~4的烧二基，
[0205] r表示1~50的整数。）
[0206] 式（11)中，由Ris表示的3价的控基可W是直链状也可W是支链状。此外，其碳原子 数优选为2~4。
[0207] 此外，上述3价的控基优选为3价的脂肪族控基，更优选为烧Ξ基。具体而言，可举 出丙烷基等。
[0208] 此外，作为式(12)中的由护1表示的烧二基的碳原子数，优选为2或3,更优选为2。此 夕h运样的烧二基可W是直链状也可W是支链状。作为具体例，可举出乙烧-1,1-二基、乙 烧-1,2-二基、丙烷-1,1-二基、丙烷-1,2-二基、丙烷-1,3-二基、丙烷-2,2-二基、下烧-1,2- -基、了烧-1,3-^基、了烧-1,4-^基等。
[0209] 此外，r表示1~50的整数，优选为1~30的整数，更优选为1~25的整数，进一步优 选为1~20的整数，进一步优选为1~15的整数，特别优选为1~10的整数。
[0210] 作为上述不含径基的交联性不饱和单体，可举出Ξ径甲基丙烷Ξ(甲基）丙締酸 醋、（聚）乙二醇二（甲基)丙締酸醋、（聚)丙二醇二（甲基)丙締酸醋、1,4-下二醇二（甲基)丙 締酸醋、1,6-己二醇二（甲基)丙締酸醋、季戊四醇四（甲基)丙締酸醋等，可W单独使用1种 或组合使用巧巾W上。
[0211] 此外，作为上述不含径基的交联性不饱和单体的合计使用量，从动态结合容量、防 污性的观点出发，相对于单体总量100质量份，优选为1~90质量份，更优选为5~70质量份， 进一步优选为10~60质量份，特别优选为20~50质量份。
[0212] 作为具有可固定配体的官能团的单体与其它单体的组合，从在固定有配体时的动 态结合容量、防污性的观点出发，优选为至少包含具有可固定配体的官能团的单体、含径基 的非交联性不饱和单体和不含径基的交联性不饱和单体的组合，更优选为具有可固定配体 的官能团的单体、含径基的非交联性不饱和单体和不含径基的交联性不饱和单体的组合， 具有可固定配体的官能团的单体、含径基的非交联性不饱和单体、不含径基的非交联性不 饱和单体和不含径基的交联性不饱和单体的组合，特别优选为具有可固定配体的官能团的 单体、含径基的非交联性不饱和单体和不含径基的交联性不饱和单体的组合。
[0213] 此外，作为工序1-1和2-1的具体方法，例如，可举出将聚合引发剂溶解于包含单体 和根据需要的多孔化剂的混合溶液(单体溶液）中，使其悬浮于水系介质中，加热至规定溫 度使其聚合的方法;将聚合引发剂溶解于包含单体和根据需要的多孔化剂的混合溶液(单 体溶液）中，添加到加热至规定溫度的水系介质中使其聚合的方法;使包含单体和根据需要 的多孔化剂的混合溶液(单体溶液)悬浮于水系介质中，加热至规定溫度，添加聚合引发剂 使其聚合的方法等。
[0214] 作为聚合引发剂，优选为自由基聚合引发剂。作为自由基聚合引发剂，例如，可举 出偶氮系引发剂、过氧化物系引发剂、氧化还原系引发剂等，具体而言，可举出偶氮双异下 腊、偶氮双异下酸甲醋、偶氮双-2,4-二甲基戊腊、过氧化苯甲酯、二叔下基过氧化物、过氧 化苯甲酯-二甲基苯胺等。聚合引发剂的合计使用量通常相对于单体总量100质量份为0.01 ~10质量份左右。
[0215] 上述多孔化剂为了制造多孔粒子而使用，在油滴内的聚合中与单体一起存在，具 有作为非聚合成分而形成孔的作用。多孔化剂只要可在多孔质表面容易地除去则没有特别 限定，例如，可举出可溶于各种有机溶剂、混合单体的线状聚合物等，也可W并用它们。
[0216] 作为上述多孔化剂，例如，可举出己烧、庚烧、辛烧、壬烧、癸烧、十一烧等脂肪族控 类;环己烧、环戊烧等脂环式控类;苯、甲苯、二甲苯、糞、乙基苯等芳香族控类;四氯化碳、1， 2-二氯乙烧、四氯乙烧、氯苯等面代控类;下醇、戊醇、己醇、庚醇、己醇、4-甲基-2-戊醇、2- 乙基-1-己醇等脂肪族醇类;环己醇等脂环式醇类;2-苯基乙醇、节醇等芳香族醇类;二乙基 酬、甲基异下基酬、二异下基酬、苯乙酬、2-辛酬、环己酬等酬类;二下基酸、二异下基酸、苯 甲酸、乙氧基苯等酸类；乙酸异戊醋、乙酸下醋、乙酸-3-甲氧基下醋、丙二酸二乙醋等醋类， 除此W外，还可举出非交联性乙締基单体的均聚物等线状聚合物。多孔化剂可W单独使用 或混合使用巧巾W上。
[0217] 上述多孔化剂的合计使用量通常相对于单体总量100质量份为40~400质量份左 -6" 〇
[021引作为上述水系介质，例如可举出水溶性高分子水溶液等，作为水溶性高分子，例如 可举出径基乙基纤维素、聚乙締醇、簇甲基纤维素、聚乙締基化咯烧酬、淀粉、明胶等。
[0219] 水系介质的合计使用量相对于单体总量100质量份通常为200~7000质量份左右。
[0220] 此外，使用水作为水系介质的分散介质时，例如，可使用氯化钢、硫酸钢、碳酸钢、 碳酸巧、憐酸巧等分散稳定剂。
[0221] 此外，工序1-1和2-1中，也可W使用W烷基硫酸醋盐、烷基芳基硫酸醋盐、烷基憐 酸醋盐、脂肪酸盐等阴离子性表面活性剂为首的各种表面活性剂。
[0222] 此外，也可W使用亚硝酸钢等亚硝酸盐、舰化钟等舰化物盐、叔下基邻苯二酪、苯 酿、苦味酸、氨酿、氯化铜、氯化铁等聚合抑制剂。
[0223] 此外，也可W使用十二烷基硫醇等聚合调整剂。
[0224] 此外，工序1-1和2-1的聚合溫度只要根据聚合引发剂而决定即可，例如，使用偶氮 双异下腊作为聚合引发剂时，优选为50~100°C，更优选为60~90°C。
[0225] 此外，聚合时间通常为5分钟~48小时，优选为10分钟~24小时。
[02%] < 工序 1-2 和 2-2>
[0227] 工序1-2是使原料载体（I)与由下述由式(4)表示的化合物接触，得到具有可固定 配体的官能团和由下述式(5-1)、（5-2)或(5-3)表示的基团的固相载体的工序。
[0228] 此外，工序2-2是使原料载体(1)与由下述式(4)表示的化合物中Y为硫酸基的化合 物接触，得到含硫酸基固相载体(II)的工序。
[0229] R2-Y-H (4)
[0230] 〔式(4)中，
[0231] Y表示硫酸基、氧基或亚氨基，
[0232] R2与上述同义，表示碳原子数1~10的1价的有机基团。）
[0233]
[0234] 〔式(5-1)中，
[0235] Ri与上述同义，表示碳原子数1~6的2价的控基，
[0236] R2与上述同义，表示碳原子数1~10的1价的有机基团，
[0237] Y与上述同义，表示硫酸基、氧基或亚氨基。
[023引此外，**表示结合位点。）
[0239]
[0240] 〔式(5-2)中，R2、Y和**与上述同义。）
[0241]
[0242] 〔式（5-3)中，R2、Y和**与上述同义。）
[0243] 作为工序1-2和2-2中使用的化合物(4)，可举出硫代甘油、琉基乙醇、单乙醇胺等， 优选为硫代甘油。
[0244] 上述化合物(4)的合计使用量相对于可固定配体的官能团1摩尔，通常为0.1~12 摩尔当量，优选为1~10摩尔当量，更优选为2~8摩尔当量。
[0245] 另外，工序1-2和2-2可W在碱性催化剂存在下进行。作为运样的碱性催化剂，可举 出Ξ乙基胺、N，N-二甲基-4-氨基化晚、二异丙基乙基胺等，可W单独使用1种或组合使用2 种W上。
[0246] 此外，工序1-2和2-2的反应时间没有特别限定，通常为0.5~72小时左右，优选为1 ~48小时。此外，反应溫度只要在溶剂的沸点W下适当选择即可，通常为2~100°C左右。
[0247] < 工序 2-3>
[0248]工序2-3是使工序2-2中得到的含硫酸基固相载体(II)与氧化剂接触，将硫酸基氧 化为亚横酷基，得到具有可固定配体的官能团和由下述式(6-1)、（6-2)或(6-3)表示的基团 的固相载体的工序。
[0254]〔式(6-3)中，R哺林与上述同义。）
[0255] 工序2-3中使用的氧化剂被大致区别为有机氧化剂和无机氧化剂，作为有机氧化 剂，例如，可举出过乙酸、过苯甲酸、间氯过苯甲酸等。另一方面，作为无机氧化剂，例如，可 举出过氧化氨、铭酸、高儘酸盐等。另外，运些氧化剂可W单独使用1种或组合使用巧巾W上。
[0256] 此外，氧化剂的合计使用量相对于硫酸基1摩尔，通常为0.1~10摩尔当量左右，优 选为0.5~3摩尔当量。
[0257] 此外，工序2-3优选在溶剂存在下进行。作为运样的溶剂，可举出水;二甲基甲酯 胺、二甲基乙酷胺等酷胺系溶剂；甲醇、乙醇等醇系溶剂等，运些溶剂可W单独使用1种或组 合使用巧巾W上。
[0258] 上述溶剂的合计使用量相对于成为原料的固相载体通常为1~50质量倍左右，优 选为5~15质量倍。
[0259] 此外，工序2-3的反应时间没有特别限定，通常为1~72小时左右，反应溫度只要在 溶剂的沸点W下适当选择即可，通常为1~90°C左右。
[0260] 另外，上述各工序中得到的固相载体可W根据需要通过将多孔化剂、未反应单体 通过蒸馈、萃取、清洗等进行除去而得到。
[0261] 然后，W上述方式得到的本发明的固相载体A在固定有配体时发挥高的动态结合 容量，而且，具有优异的防污性，如宿主细胞蛋白质(HCP =化St Cell Protein)等的杂质难 W非特异吸附。
[0262] 本发明的固相载体A作为用于亲和色谱用填充剂或流道、传感器忍片等的固相载 体有用。
[0263] <亲和色谱用填充剂的制造方法C>
[0264] 本发明的亲和色谱用填充剂的制造方法C的特征在于，包括:将配体固定于本发明 的固相载体A或W本发明的制造方法B得到的固相载体的工序。
[0265] 上述配体只要是与祀物质结合的分子即可，例如，可举出如蛋白A、蛋白G、蛋白L、 化结合蛋白、抗生物素蛋白等蛋白质;膜岛素等肤;单克隆抗体等抗体;酶;激素;DNA;RNA; 肝素、路易斯X、神经节巧脂等糖质;亚氨基二乙酸、合成色素、2-氨基苯基棚酸、4-氨基苯甲 脉、谷脫甘肤、生物素或其衍生物的低分子化合物。另外，上述例示的配体可使用其整体，也 可W使用重组体、通过酶处理等得到的其部分。此外，也可W是人工合成的肤、肤衍生物。
[0266] 运样的配体中，精制的祀物质为抗体时，优选包含氨基，更优选为蛋白质、肤，进一 步优选为蛋白质，进一步优选为免疫球蛋白结合蛋白质。作为免疫球蛋白结合性蛋白质，优 选为选自蛋白A、蛋白G、蛋白LJc结合蛋白和它们的功能性变异体中的至少1种W上。其中， 优选为蛋白A、蛋白G、它们的功能性变异体，更优选为蛋白A、其功能性变异体。
[0267] 此外，配体的合计使用量相对于Ig的固相载体A通常为50~300mg左右，优选为120 ~ISOmgo
[0268] 配体的固定除使用上述固相载体AW外，与常法同样地进行即可，优选在添加盐的 缓冲液中进行。
[0269] 作为上述盐的种类，可举出巧樣酸Ξ钢、硫酸钢等，作为上述缓冲液，可举出憐酸 钢缓冲液、憐酸钟缓冲液、棚酸缓冲液等。
[0270] 缓冲液的合计使用量相对于固相载体A通常为20~80质量倍左右，优选为35~45 质量倍。
[0271] 此外，反应时间没有特别限定，通常为0.5~72小时左右，反应溫度通常为1~40°C JjL -6" ο
[0272] 此外，本发明的填充剂的制造方法C中，在上述固定工序后，可W使所得的亲和色 谱用填充剂与由式(4)表示的化合物接触，使未反应的可固定配体的官能团反应。此外，也 可W在该反应后使其与氧化剂接触。
[0273] 由此，未结合配体的官能团转换为由式(2-1)、（2-2)或(2-3)表示的基团。
[0274] 然后，根据上述本发明的填充剂的制造方法C，可W简便且容易地制造动态结合容 量高且具有优异的防污性的亲和色谱用填充剂。
[0275] <亲和精制用载体0>
[0276] 本发明的亲和精制用载体D的特征在于，是具有固相载体W及配体或用于结合配 体的反应性基团的亲和精制用载体，上述配体或用于结合配体的反应性基团与固相载体结 合，构成上述固相载体的高分子具有介由硫基、亚横酷基或横酷基在链的末端具有选自径 基、硫醇基、幾基、氨基、硫基、二硫酸基、亚横酷基、横酷基、簇基、硫酸基和憐酸基中的至少 一个的末端结构。
[0277] 作为连接上述末端结构的硫基、亚横酷基或横酷基，优选为硫基或横酷基。
[027引（末端结构）
[0279] 上述末端结构介由硫基、亚横酷基或横酷基而位于高分子链的末端。作为末端结 构，优选为由下述式(21)表示的末端结构。
[0280]
[0281] 〔式(21)中，
[0282] R5嗦示碳原子数1~20的有机基团，
[0283] Z表示径基、硫醇基、氨基、簇基、硫酸基、憐酸基或烧酷基，
[0284] k表示上的整数。）
[0285] 运里，式(21)中的k表示上的整数，优选为1~5的整数，更优选为1~3的整数， 特别优选为1或2。即，由RS1表示的有机基团的价数优选为2~6价，更优选为2~4价，特别优 选为2或3价。
[0286] 式(21)中，作为由RS1表示的碳原子数1~20的有机基团的碳原子数，从使配体结合 时的动态结合容量、防污性等观点出发，优选为1~8，更优选为1~6，进一步优选为2~4。
[0287] 此外，作为由RS1表示的有机基团，优选为控基。控基可W是直链状也可W是支链 状，优选为脂肪族控基，更优选为2或3价的脂肪族控基。
[0288] 作为2价的脂肪族控基，优选为烧二基。作为运样的烧二基的碳原子数，从使配体 结合时的动态结合容量、防污性等观点出发，优选为1~8,更优选为1~6,进一步优选为2~ 4。作为烧二基的具体例，可举出甲烧-1,1-二基、乙烧-1,1-二基、乙烧-1,2-二基、丙烷-1， 1-^基、丙烷-1,2-^基、丙烷-1,3-^基、丙烷-2,2-^.基等。
[0289] 作为3价的脂肪族控基，优选为烧Ξ基。作为运样的烧Ξ基的碳原子数，从使配体 结合时的动态结合容量、防污性等观点出发，优选为1~8,更优选为1~6,进一步优选为2~ 4。作为烧Ξ基的具体例，可举出甲烧-1，1，1-Ξ基、乙烧-1，1，2-Ξ基、丙烷-1，2，3-Ξ基、丙 烧-1，2,2-Ξ基等。
[0290] 式(21)中，Ζ表示径基、硫醇基、氨基、簇基、硫酸基、憐酸基或烧酷基。该烧酷基可 W是直链状也可W是支链状，其碳原子数优选为2~10,更优选为2~6,特别优选为2~4。作 为烧酷基，可举出乙酷基、丙酷基、下酷基、戊酷基。
[0291] 作为Ζ，从使配体结合时的动态结合容量、防污性等观点出发，优选为径基、硫醇 基、簇基、硫酸基、烧酷基，更优选为径基、簇基、硫酸基。运些之中，特别优选为径基。
[0292] (配体等）
[0293] 此外，本发明的亲和精制用载体D具有配体或用于结合配体的反应性基团。
[0294] 上述配体只要是与祀物质结合的分子即可，例如，可举出如蛋白Α、蛋白G、蛋白L、 化结合蛋白、抗生物素蛋白等蛋白质;膜岛素等肤;单克隆抗体等抗体;酶;激素;DNA;RNA; 肝素、路易斯X、神经节巧脂等糖质;亚氨基二乙酸、合成色素、2-氨基苯基棚酸、4-氨基苯甲 脉、谷脫甘肤、生物素或其衍生物的低分子化合物。另外，上述例示的配体可使用其整体，也 可W使用重组体、通过酶处理等得到的其部分。此外，也可W是人工合成的肤、肤衍生物。 [02%]运样的配体中，精制的祀物质为抗体时，优选包含氨基，更优选为蛋白质、肤，进一 步优选为蛋白质，进一步优选为免疫球蛋白结合蛋白质。作为免疫球蛋白结合性蛋白质，优 选为选自蛋白A、蛋白G、蛋白LJc结合蛋白和它们的功能性变异体中的至少1种W上。其中， 优选为蛋白A、蛋白G、它们的功能性变异体，更优选为蛋白A、其功能性变异体。
[0296] 配体的结合量相对于固相载体Ig优选为10~200mg，更优选为25~lOOmg。
[0297] 作为用于结合配体的反应性基团，例如，可举出环状酸基、簇基、下二酷亚胺氧基、 甲酯基、异氯酸醋基，氨基。运些之中，优选为环状酸基，更优选为构成环的原子数为3~7个 的环状酸基，进一步优选为由下述式(23)、（24)或(25)表示的1价的基团，特别优选为由下 述式(23)表示的1价的基团。
[029引
[0299] 试(23)中，R5嗦示碳原子数1~6的2价的控基。）
[0301] 式(23)中，R53表示碳原子数1~6的2价的控基。作为运样的2价的控基的碳原子数， 优选为1~4,更优选为1或2,特别优选为1。此外，2价的控基可W是直链状也可W是支链状。
[0302] 此外，上述2价的控基优选为2价的脂肪族控基，更优选为烧二基。作为优选的具体 例，可举出甲烧-1,1-二基、乙烧-1,1-二基、乙烧-1,2-二基等。
[0303] 此外，构成固相载体的高分子只要介由硫基、亚横酷基或横酷基在高分子链的末 端具有上述末端结构则没有特别限定，可W是由琼脂糖、葡聚糖、纤维素等多糖类构成的天 然高分子，也可W是合成高分子。
[0304] 作为构成固相载体的高分子，优选为具有来自締键式不饱和单体的结构单元的高 分子。例如，具有来自如下单体的结构单元的高分子等，上述单体选自苯乙締系单体、乙締 基酬系单体、（甲基)丙締腊系单体、（甲基)丙締酸醋系单体和（甲基)丙締酷胺系单体中的1 种或2种W上。
[0305] 此外，固相载体的形态可W是整块、膜、中空纤维、粒子、盒、薄片等中的任一者，优 选为粒子。此外，从提高表面积的观点出发，固相载体优选为多孔粒子等经多孔化的固相载 体。此外，作为多孔粒子，优选为多孔聚合物粒子。
[0306] 构成本发明的亲和精制用载体D的固相载体为粒子时，其平均粒径（体积平均粒 径)通常为35~100μπι，优选为40~85μπι。通过将平均粒径设为35μπι W上，压力特性提高。此 夕h通过设为100皿W下，结合配体时的动态结合容量变大。此外，平均粒径的变动系数优选 为40 % W下，更优选为30 % W下。
[0307] 平均粒径可聚合时的条件进行调整。另外，平均粒径可W利用激光衍射.散 射式粒度分析测定装置等进行测定。
[030引（萊和精制用载体D的制造方法）
[0309] 本发明的亲和精制用载体D的制造方法可W适当组合常法来制造。
[0310] 例如，（工序P1)可W使具有用于结合配体的反应性基团的单体与根据需要的除该 单体W外的单体(W下也称为其它单体)在硫醇化合物和聚合引发剂的存在下(共)聚合，根 据需要进行(工序P2-1)使用交联剂的交联化反应、（工序P2-2)使用氧化剂等而将硫基氧化 为亚横酷基等而制造。此外，（工序P3)可W使配体结合于W运样的方法得到的固相载体。 [0；3"](工序 P1)
[0312] 作为具有用于结合配体的反应性基团的单体、其它单体，均可举出締键式不饱和 单体。具体而言，可例示选自苯乙締系单体、乙締基酬系单体、（甲基)丙締腊系单体、（甲基） 丙締酸醋系单体和（甲基)丙締酷胺系单体中的1种或巧巾W上的单体。
[0313] 作为具有用于结合配体的反应性基团的单体，优选为具有选自由上述式(23)表示 的1价的基团、由上述式(24)表示的1价的基团、由上述式(25)表示的1价的基团、簇基、下二 酷亚胺氧基、甲酯基、异氯酸醋基和氨基中的反应性基团的单体，更优选为具有由式(23)表 示的1价的基团的单体。作为具有由式(23)表示的1价的基团的单体，可举出含环氧基不饱 和单体。作为该含环氧基不饱和单体，优选为（甲基)丙締酸醋系单体、苯乙締系单体等，更 优选为（甲基）丙締酸醋系单体，进一步优选为由下述式（26)表示的（甲基）丙締酸醋系单 体。
[0314]
[0315] 〔式(26)中，
[0316] R5嗦示氨原子或甲基，
[0317] R5嗦示单键、碳原子数1~10的2价的控基或-(R560)k2-(R5嗦示碳原子数2~4的烧 二基，k2表示1~50的整数），
[031引 R53与上述同义，表示碳原子数1~6的2价的控基。）
[0319] 作为由R55表示的2价的控基的碳原子数，优选为1~8,更优选为1~6,进一步优选 为1~4。2价的控基可W是直链状也可W是支链状。
[0320] 此外，上述2价的控基优选为2价的脂肪族控基，更优选为烧二基。作为运样的烧二 基的碳原子数，优选为1~8,更优选为1~6,进一步优选为1~4。
[0321] 作为上述烧二基的具体例，可举出甲烧-1,1-二基、乙烧-1,1-二基、乙烧-1,2-二 基、丙烷-1,1-二基、丙烷-1,2-二基、丙烷-1,3-二基、丙烷-2,2-二基等。
[0322] 作为由R56表示的烧二基的碳原子数，优选为2或3,更优选为2。此外，运样的烧二基 可W是直链状也可W是支链状。作为具体例，可举出乙烧-1,1-二基、乙烧-1,2-二基、丙烷- 1,1- ^基、丙烷-1,2-^基、丙烷-1,3-^基、丙烷-2,2-^基、了烧-1,2-^基、了烧-1,3-^. 基、下烧-1，4-二基等。
[0323] 此外，k2表示1~50的整数，优选为1~30的整数，更优选为1~25的整数，进一步优 选为1~20的整数，进一步优选为1~15的整数，进一步优选为1~10的整数，进一步优选为1 ~5的整数，特别优选为1~3的整数。
[0324] 此外，如上述的R55中，优选为单键。
[0325] 作为具有用于结合配体的反应性基团的单体的具体例，可举出（甲基)丙締酸缩水 甘油醋、4-径基下基（甲基)丙締酸醋缩水甘油酸、α-(甲基)丙締酸醋基-ω-缩水甘油基聚 乙二醇、（4-乙締基苄基)缩水甘油酸、（甲基炳締酸(7-氧杂双环[4.1.0]庚烧-3-基）甲醋、 締丙基缩水甘油酸、3,4-环氧-1-下締、3,4-环氧-3-甲基-1-下締等，可W单独使用巧巾或组 合使用巧巾W上。
[0326] 此外，作为具有用于结合配体的反应性基团的单体的合计使用量，从可固定的配 体量和在固定有配体时的动态结合容量的观点出发，相对于单体总量100质量份，优选为1 ~90质量份，更优选为20~80质量份，进一步优选为30~70质量份，特别优选为40~60质量 份。
[0327] 此外，作为其它单体，非交联性单体、交联性单体均可W使用，也可W并用它们。
[0328] 此外，作为上述非交联性单体，可举出含径基的非交联性不饱和单体、不含径基的 非交联性不饱和单体，作为交联性单体，可举出含径基的交联性不饱和单体、不含径基的交 联性不饱和单体。
[0329] 作为上述含径基的非交联性不饱和单体，优选为（甲基）丙締酸醋系单体、（甲基） 丙締酷胺系单体等。此外，作为上述含径基的非交联性不饱和单体所含的径基的个数，优选 为1~5,更优选为1~3。此外，作为上述（甲基)丙締酸醋系单体，优选为由下述式(27)表示 的（甲基)丙締酸醋系单体。
[0330]
[0331] 〔式(27)中，
[0332] R57表示氨原子或甲基，
[0333] R58表示碳原子数1~6的3价的控基。）
[0334] 由R58表示的3价的控基可W是直链状也可W是支链状。此外，其碳原子数优选为2 ~4。
[0335] 此外，上述3价的控基优选为3价的脂肪族控基，更优选为烧Ξ基。具体而言，可举 出乙烧-1，1，2-Ξ基等。
[0336] 作为含径基的非交联性不饱和单体的具体例，可举出甘油单（甲基)丙締酸醋、Ξ 径甲基乙烧单（甲基）丙締酸醋、Ξ径甲基丙烷单（甲基）丙締酸醋、下Ξ醇单（甲基）丙締酸 醋、聚乙二醇单（甲基)丙締酸醋、季戊四醇单（甲基)丙締酸醋、二季戊四醇单（甲基)丙締酸 醋、肌醇单（甲基)丙締酸醋、（甲基)丙締酸径基乙醋、（甲基)丙締酸径基丙醋、径基乙基（甲 基)丙締酷胺等，可W单独使用1种或组合使用巧巾W上。
[0337] 此外，使用上述含径基的非交联性不饱和单体时，作为其合计使用量，从制造时的 凝聚防止的观点出发，相对于单体总量100重量份，优选为1~30质量份，更优选为2~20质 量份，特别优选为3~15质量份。
[0338] 此外，作为上述不含径基的非交联性不饱和单体，优选为（甲基)丙締酸醋系单体、 (甲基)丙締酷胺系单体等。此外，作为上述（甲基)丙締酸醋系单体，更优选为由下述式(28) 表示的（甲基)丙締酸醋系单体。
[0339]
[0340] 〔式（28)中，
[0341] R59表示氨原子或甲基，
[0342] 护<^表示碳原子数2~4的烧二基，
[0343] RS1表示碳原子数1~6的1价的控基，
[0344] S表示0~50的整数。）
[0345] 作为由RW表示的烧二基的碳原子数，优选为2或3,更优选为2。此外，运样的烧二基 可W是直链状也可W是支链状。作为具体例，可举出乙烧-1,1-二基、乙烧-1,2-二基、丙烷- 1,1-二基、丙烷-1,2-二基、丙烷-1,3-二基、丙烷-2,2-二基、下烧-1,2-二基、下烧-1,3-二 基、下烧-1，4-二基等。
[0346] 作为由护1表示的1价的控基的碳原子数，优选为1~4,更优选为1或2。
[0347] 上述1价的控基是包含1价的脂肪族控基、1价的脂环式控基和1价的芳香族控基的 概念，优选为1价的脂肪族控基。1价的脂肪族控基可W是直链状也可W是支链状。
[0348] 作为1价的脂肪族控基，优选为烷基。作为运样的烷基的碳原子数，优选为1~4,更 优选为1或2。
[0349] 作为上述烷基的具体例，可举出甲基、乙基、正丙基、异丙基、正下基、异下基、仲下 基、叔下基、戊基、己基等。
[0350] S表示0~50的整数，优选为1~25的整数，更优选为1~15的整数。
[0351] 作为不含径基的非交联性不饱和单体的具体例，可举出甲氧基聚乙二醇（甲基)丙 締酸醋、（甲基)丙締酸甲醋、（甲基)丙締酸乙醋、（甲基)丙締酸下醋、（甲基)丙締酸环己醋、 (甲基）丙締酸甲氧基乙醋、（甲基）丙締酷胺、二甲基（甲基）丙締酷胺、（甲基）丙締酷基吗 嘟、双丙酬（甲基)丙締酷胺等，可W单独使用1种或组合使用巧巾W上。
[0352] 此外，作为上述不含径基的非交联性不饱和单体的合计使用量，从动态结合容量 的观点出发，相对于单体总量100质量份，优选为0~70质量份，更优选为0~30质量份，特别 优选为0~20质量份。
[0353] 此外，作为上述含径基的交联性不饱和单体所含的径基的个数，从动态结合容量 和防污性的观点出发，优选为1~5,更优选为1~3。此外，作为上述含径基的交联性不饱和 单体，反应性基团优选为2~5官能的基团，更优选为2或3官能的基团。
[0354] 此外，作为上述含径基的交联性不饱和单体，优选为（甲基)丙締酸醋系单体，更优 选为由下述式(29)表示的（甲基)丙締酸醋系单体。
[0355]
[0；356]〔式（29)中，
[0；357] R6哺R63各自独立地表示氨原子或甲基，
[0358] R64表示碳原子数1~8的3价的控基。）
[0359] 由R64表示的3价的控基可W是直链状也可W是支链状。此外，其碳原子数优选为1 ~5。
[0360] 此外，上述3价的控基优选为3价的脂肪族控基，更优选为烧Ξ基。具体而言，可举 出甲烷基等。
[0361] 作为含径基的交联性不饱和单体的具体例，可举出甘油二（甲基)丙締酸醋、Ξ径 甲基乙烧二（甲基炳締酸醋、立径甲基丙烷二（甲基)丙締酸醋、了立醇二（甲基)丙締酸醋、 季戊四醇二（甲基)丙締酸醋、季戊四醇Ξ(甲基)丙締酸醋、二季戊四醇二（甲基)丙締酸醋、 二季戊四醇Ξ(甲基）丙締酸醋、二季戊四醇四（甲基)丙締酸醋、二季戊四醇五（甲基）丙締 酸醋、肌醇二（甲基）丙締酸醋、肌醇Ξ(甲基）丙締酸醋、肌醇四（甲基）丙締酸醋等，可W单 独使用1种或组合使用巧巾W上。
[0362] 此外，使用含径基的交联性不饱和单体时，作为其合计使用量，从动态结合容量、 防污性的观点出发，相对于单体总量100质量份，优选为1~70质量份，更优选为10~50质量 份，优选为15~40质量份。
[0363] 此外，作为上述不含径基的交联性不饱和单体，反应性基团优选为2~5官能的基 团，更优选为2或3官能的基团。此外，作为上述不含径基的交联性不饱和单体，优选为（甲 基)丙締酸醋系单体，更优选为由下述式(30)或(31)表示的（甲基)丙締酸醋系单体。
[0364]
[03 化]〔式（30)中，
[0366] R65~R67各自独立地表示氨原子或甲基，
[0367] R68表示碳原子数1~6的3价的控基。）
[036引
[0369] 〔式（31)中，
[0370] R6哺R?各自独立地表示氨原子或甲基，
[0371 ]护1表示碳原子数2~4的烧二基，
[0372] t表示1~50的整数。）
[0373] 式(30)中，由R68表示的3价的控基可W是直链状也可W是支链状。此外，其碳原子 数优选为2~4。
[0374] 此外，上述3价的控基优选为3价的脂肪族控基，更优选为烧Ξ基。具体而言，可举 出丙烷基等。
[0375] 此外，作为式(31)中的由护1表示的烧二基的碳原子数，优选为2或3,更优选为2。此 夕h运样的烧二基可W是直链状也可W是支链状。作为具体例，可举出乙烧-1,1-二基、乙 烧-1,2-二基、丙烷-1,1-二基、丙烷-1,2-二基、丙烷-1,3-二基、丙烷-2,2-二基、下烧-1,2- -基、了烧-1,3-^基、了烧-1,4-^基等。
[0376] 此外，t表示1~50的整数，优选为1~30的整数，更优选为1~25的整数，进一步优 选为1~20的整数，进一步优选为1~15的整数，特别优选为1~10的整数。
[0377] 作为不含径基的交联性不饱和单体的具体例，可举出Ξ径甲基丙烷Ξ(甲基)丙締 酸醋、乙二醇二（甲基）丙締酸醋、包含2个W上乙二醇的聚乙二醇二（甲基)丙締酸醋、聚丙 二醇二（甲基)丙締酸醋、包含2个W上乙二醇的聚丙二醇二（甲基)丙締酸醋、1,4-下二醇二 (甲基)丙締酸醋、1,6-己二醇二（甲基)丙締酸醋、季戊四醇四（甲基炳締酸醋等，可W单独 使用1种或组合使用巧巾W上。
[0378] 此外，使用上述不含径基的交联性不饱和单体时，作为其合计使用量，从动态结合 容量、防污性的观点出发，相对于单体总量100质量份，优选为1~90质量份，更优选为5~70 质量份，进一步优选为10~60质量份，特别优选为20~50质量份。
[0379] 工序P1中的(共)聚合反应在硫醇化合物存在下进行，硫醇化合物的添加可W在聚 合前也可W在聚合中。通过硫醇化合物的添加，自由基聚合中的生长碳自由基伴随着从硫 醇化合物进行夺氨反应而容易地反应，生成氨末端的聚合物和硫自由基。通过从该硫自由 基再引发，再次形成聚合物链。如此，硫醇化合物作为链转移剂发挥作用，在生成聚合物的 末端导入来自硫醇化合物的残基。由此，所得的载体的亲水性变高，如宿主细胞蛋白质化CP =化St Cell Protein)等的杂质难W非特异吸附，而且，在结合有配体时的动态结合容量 也变大。
[0380] 作为硫醇化合物，可举出硫代甘油、2-琉基乙醇、3-琉基-2-下酬、3-琉基-1-丙醇、 3-琉基异下酸等，可W单独使用1种或组合使用巧巾W上。此外，也可W使用具有2个W上硫 醇基的多官能硫醇化合物。预期在使用硫醇化合物时，通过聚合时的孔分布的变动、粒子表 面进行亲水化而使配体结合时的动态结合容量提高。
[0381] 上述硫醇化合物的使用量相对于单体总量100质量份优选为0.01~200质量份，更 优选为1~150质量份，特别优选为10~100质量份。
[0382] 另外，如上所述，硫醇化合物的添加可W在聚合前也可W在聚合中，在聚合引发剂 投入的同时或在聚合引发剂投入后添加硫醇化合物时，从聚合引发剂投入起，优选在0~5 小时W内、更优选在0~3小时W内、进一步优选在0~1小时W内添加硫醇化合物。此外，硫 醇化合物的添加也可W在碱性催化剂存在下进行。
[0383] 作为用于使上述单体聚合的聚合引发剂，优选为自由基聚合引发剂。作为自由基 聚合引发剂，例如，可举出偶氮系引发剂、过氧化物系引发剂、氧化还原系引发剂等，具体而 言，可举出偶氮双异下腊、偶氮双异下酸甲醋、偶氮双-2,4-二甲基戊腊、过氧化苯甲酯、二 叔下基过氧化物、过氧化苯甲酯-二甲基苯胺等。
[0384] 聚合引发剂的合计使用量通常相对于单体总量100质量份为0.01~10质量份左 -6" 〇
[0385] 此外，工序P1中的（共）聚合反应优选为悬浮聚合。作为悬浮聚合的具体方法，例 如，可举出将聚合引发剂溶解于包含单体和根据需要的多孔化剂的混合溶液(单体溶液）， 使其在水系介质中悬浮，加热至规定溫度而使其聚合的方法;将聚合引发剂溶解于包含单 体和根据需要的多孔化剂的混合溶液(单体溶液），添加到加热至规定溫度的水系介质中而 使其聚合的方法;使包含单体和根据需要的多孔化剂的混合溶液(单体溶液)在水系介质中 悬浮，加热至规定溫度，添加聚合引发剂使其聚合的方法等。
[0386] 作为上述多孔化剂，例如，可举出己烧、庚烧、辛烧、壬烧、癸烧、十一烧等脂肪族控 类;环己烧、环戊烧等脂环式控类;苯、甲苯、二甲苯、糞、乙基苯等芳香族控类;四氯化碳、1， 2-二氯乙烧、四氯乙烧、氯苯等面代控类;下醇、戊醇、己醇、庚醇、己醇、4-甲基-2-戊醇、2- 乙基-1-己醇等脂肪族醇类;环己醇等脂环式醇类;2-苯基乙醇、节醇等芳香族醇类;二乙基 酬、甲基异下基酬、二异下基酬、苯乙酬、2-辛酬、环己酬等酬类;二下基酸、二异下基酸、苯 甲酸、乙氧基苯等酸类；乙酸异戊醋、乙酸下醋、乙酸-3-甲氧基下醋、丙二酸二乙醋等醋类， 除此W外，还可举出非交联性乙締基单体的均聚物等线状聚合物。多孔化剂可W单独使用 或混合使用巧巾W上。
[0387] 上述多孔化剂的合计使用量通常相对于单体总量100质量份为40~400质量份左 -6" 〇
[038引作为上述水系介质，例如可举出水溶性高分子水溶液等，作为水溶性高分子，例如 可举出径基乙基纤维素、聚乙締醇、簇甲基纤维素、聚乙締基化咯烧酬、淀粉、明胶等。
[0389] 水系介质的合计使用量相对于单体总量100质量份通常为200~7000质量份左右。
[0390] 此外，使用水作为水系介质的分散介质时，例如，可W使用氯化钢、硫酸钢、碳酸 钢、碳酸巧、憐酸巧等分散稳定剂。
[0391] 此外，工序P1的聚合反应中，也可W使用W烷基硫酸醋盐、烷基芳基硫酸醋盐、烧 基憐酸醋盐、脂肪酸盐等阴离子性表面活性剂为首的各种表面活性剂。
[0392] 此外，也可W使用亚硝酸钢等亚硝酸盐、舰化钟等舰化物盐、叔下基邻苯二酪、苯 酿、苦味酸、氨酿、氯化铜、氯化铁等聚合抑制剂。
[0393] 此外，聚合溫度只要根据聚合引发剂而决定即可，例如，通常为2~100°C左右，使 用偶氮双异下腊作为聚合引发剂时，优选为50~100°C，更优选为60~90°C。
[0394] 此外，聚合时间通常为5分钟~48小时，优选为10分钟~24小时。
[0395] (工序 P2-1)
[0396] 工序P2-1是使交联剂与来自具有用于结合配体的反应性基团的单体的用于结合 配体的反应性基团的一部分进行开环加成，将来自交联剂的交联结构导入至固相载体的交 联化反应。由此，在固相载体表面等形成有交联结构。通过将运种特定的交联结构导入至固 相载体，可兼具高亲水性和优异的耐压性能。
[0397] 作为上述交联剂，优选为2~6价的多价的交联剂，更优选为2或3价的交联剂，优选 为由下述式(22)表示的交联剂。
[039引 χ??-κ52-χ?2 (22)
[0399] 〔式(22)中，
[0400] R52表示碳原子数1~10的2价的有机基团，
[0401] χ?ι和χ?2各自独立地表示径基、氨基或硫醇基。）
[0402] R52中的2价的有机基团可W是直链状也可W是支链状。此外，作为运样的2价的有 机基团，可举出2价的控基、在2价的控基的碳-碳原子间具有选自酸键、亚氨基和醋键中的1 种W上的基团。
[0403] 此外，上述2价的有机基团为2价的控基时，其碳原子数优选为1~20,更优选为1~ 10,进一步优选为1~6,特别优选为2~6。此外，2价的控基可W是直链状也可W是支链状。
[0404] 此外，上述2价的控基优选为2价的脂肪族控基，更优选为烧二基。
[0405] 作为烧二基的具体例，可举出甲烧-1,1-二基、乙烧-1,1-二基、乙烧-1,2-二基、丙 烧-1,1-二基、丙烷-1,2-二基、丙烷-1,3-二基、丙烷-2,2-二基、下烧-1,4-二基、戊烧-1,5- -基、己烧_1,6_ ^.基等。
[0406] 此外，作为在上述2价的控基的碳-碳原子间具有选自酸键、亚氨基和醋键中的1种 W上的基团，优选为在2价的控基的碳-碳原子间具有酸键的基团，更优选为由-R3(〇Rb) qOR。-表示的基团（R3、Rb和R。各自独立地表示碳原子数2~4的烧二基，q表示0~30的整数）。
[0407] 作为上述由R3、Rb和R。表示的烧二基的碳原子数，优选为2或3,更优选为2。此外，运 样的烧二基可W是直链状也可W是支链状，作为优选的具体例，可举出乙烧-1,2-二基、丙 烧-1,2-二基、丙烷-1,3-二基。
[040引此外，q表示0~30的整数，优选为0~25的整数，更优选为0~20的整数，进一步优 选为0~15的整数，进一步优选为0~10的整数，进一步优选为0~5的整数，特别优选为0~3 的整数。
[0409] χ?ι和χ?2各自独立地表示径基、氨基或硫醇基，优选为硫醇基。
[0410] 作为交联剂的种类，例如，可举出1,2-乙二硫醇、1,3-丙二硫醇、3,6-二氧杂-1,8- 辛二硫醇、2,3-二琉基-1-丙醇、双(2-琉基乙基)硫酸、Ξ(琉基乙酸)Ξ径甲基丙烷、双(琉 基乙酸）乙二醇、（±)-二硫苏糖醇等。
[0411] 交联反应的反应溫度通常为25~200°C，优选为50~100°C。
[0412] 交联反应的反应时间通常为30分钟~24小时左右，优选为1~12时间左右。
[041；3](工序 P2-2)
[0414] 工序P2-2是使用氧化剂等将来自硫醇化合物的硫基、交联结构中的硫基进行氧化 的工序。通过工序P2-2，运些硫基被氧化为亚横酷基或横酷基，优选被氧化为亚横酷基。
[0415] 上述氧化剂被大致区别为有机氧化剂和无机氧化剂，作为有机氧化剂，例如，可举 出过乙酸、过苯甲酸、间氯过苯甲酸等。另一方面，作为无机氧化剂，例如，可举出过氧化氨、 铭酸、高儘酸盐等。另外，运些氧化剂可W单独使用1种或组合使用巧巾W上。
[0416] 此外，氧化剂的合计使用量相对于硫基1摩尔通常为0.1~10摩尔当量左右，优选 为0.5~3摩尔当量。
[0417] 此外，上述氧化反应优选在溶剂存在下进行。作为运样的溶剂，可举出水;二甲基 甲酯胺、二甲基乙酷胺等酷胺系溶剂；甲醇、乙醇等醇系溶剂等，运些溶剂可W单独使用1种 或组合使用巧巾W上。
[0418] 上述溶剂的合计使用量相对于成为原料的固相载体通常为1~50质量倍左右，优 选为5~15质量倍。
[0419] 此外，上述氧化反应的反应时间没有特别限定，通常为1~72小时左右，反应溫度 只要在溶剂的沸点W下适当选择即可，通常为1~90°C左右。
[0420] 另外，上述各工序中得到的固相载体可W根据需要通过将多孔化剂、未反应单体 通过蒸馈、萃取、清洗等进行除去而得到。
[0421] (工序 P3)
[0422] 配体的固定除了使用上述得到的固相载体W外，只要与常法同样地进行即可，优 选在添加盐的缓冲液中进行。作为盐的种类，可举出巧樣酸Ξ钢、硫酸钢等，作为上述缓冲 液，可举出憐酸钢、憐酸钟、棚酸等。缓冲液的合计使用量相对于成为原料的固相载体通常 为20~80质量倍左右，优选为35~45质量倍。
[0423] 此外，反应时间没有特别限定，通常为0.5~72小时左右，反应溫度通常为1~40°C JjL -6" ο
[0424] 另外，也可W使固定有配体的载体与硫醇化合物接触，使未反应的反应性基团开 环。
[0425] 然后，本发明的亲和精制用载体D具备高亲水性，具有优异的防污性，如宿主细胞 蛋白质化CP =化St Cell Protein)等的杂质难W非特异吸附，而且，在配体被固定时发挥 高的动态结合容量。因此，本发明的亲和精制用载体D作为色谱柱用填充剂的载体是有用 的。
[04%] <色谱柱>
[0427]本发明的色谱柱填充有通过本发明的制造方法C得到的亲和色谱用填充剂，或W 本发明的亲和精制用载体D为载体的色谱柱用填充剂。该色谱柱适合用于亲和色谱。
[042引 < 祀物质的精制方法>
[0429] 本发明的祀物质的精制方法的特征在于，包括:准备含有祀物质的组合物的工序， W及使上述组合物通液于上述色谱柱的工序。作为上述祀物质，可举出蛋白质。
[0430] 此外，精制除了使用本发明的色谱柱W外，只要按照常法进行即可。例如，可举出 包括如下工序的方法:准备包含祀物质的组合物的准备工序、使上述组合物通液于上述色 谱柱的通液工序、W及通过该通液工序使吸附于载体的祀物质洗脱的洗脱工序。另外，也可 W在洗脱后对填充剂进行碱清洗。
[0431] 本发明的精制方法适合于蛋白质的精制，尤其适合于免疫球蛋白的精制。
[043^ 实施例
[0433] W下，举出实施例详细地说明本发明，但本发明不限定于运些实施例。
[0434] W下示出实施例1~5和比较例1~2中的各分析条件。
[0435] (体积平均粒径）
[0436] 平均粒径是W激光衍射散射式粒度分布测定装置（Beckman Coulter公司制 LSI 3320)进行测定。
[0437] (比表面积）
[0438] 比表面积是使用水银孔率计（岛津制作所公司制Autopore IV9520)，将细孔径的 测定范围设为10-5000nm进行测定。
[0439] <实施例1>
[0440] (实施例1-1)
[0441 ] (1)在360g的纯水中添加聚乙締醇化uraray公司制PVA-217)0.72g，进行加热揽拌 使聚乙締醇溶解，冷却后，添加十二烷基硫酸钢(花王公司制EMAL 10G)0.18g、碳酸钢(和光 纯药公司制)〇.36g和亚硝酸钢(和光纯药公司制)0.18g，进行揽拌而制备水溶液(S-1)。
[0442] 另一方面，使由甲基丙締酸缩水甘油醋(Ξ菱丽阳公司制)6.88g、甘油单甲基丙締 酸醋（日油公司制）1.37g、S径甲基丙烷Ξ甲基丙締酸醋(Sartomer公司制)4.12g和聚乙二 醇#400二甲基丙締酸醋(新中村化学公司制，9G)1.37g构成的单体组合物溶解于2-辛酬(东 洋合成公司制）20.63g和苯乙酬(井上香料制造所公司制）5.30g的混合液，制备单体溶液 (M-1)。
[0443] 接下来，将上述水溶液(S-1)全部投入至500mL可分离式烧瓶内，安装溫度计、揽拌 翼和冷却管，固定于溫水浴中，在氮气环境下开始揽拌。将上述单体溶液(M-1)全部投入至 可分离式烧瓶内，利用溫水浴进行加溫，在内溫达到85°C时添加2,2'-偶氮二异下腊(和光 纯药工业公司制)0.53g，将内溫维持在86 °C。
[0444] (2)其后，在上述反应液中添加硫代甘油(旭化学工业公司制)31.39g，将溫度维持 在86°C，进行3小时揽拌，得到硫代甘油处理粒子(PA-1)。
[0445] 接下来，冷却反应液后，过滤运样的反应液，W纯水和乙醇进行清洗。使经清洗的 粒子(PA-1)分散于纯水，进行3次倾析，除去小粒子。运里，将所得的粒子作为硫代甘油处理 粒子(PA-2)。
[0446] 接下来，W粒子的浓度为10质量％的方式使粒子分散于纯水，得到作为本发明的 固相载体A的硫代甘油处理粒子(PA-2)的分散液。运里，将所得的分散液作为分散液化-1)。 [0447](实施例1-2)
[0448]在实施例1-1中得到的分散液化-1)中添加过氧化氨(和光纯药工业公司制)4.30g 后，在25°C颠倒混合24小时，使粒子横化氧化。其后，过滤该反应液，W纯水清洗。接下来，W 粒子的浓度为10质量％的方式使粒子分散于纯水，得到作为本发明的固相载体A的横化氧 化粒子(PA-3)的分散液。运里，将所得的分散液作为横化氧化粒子分散液化-2)。
[04例（实施例1-3)
[0450] 使基因重组大肠杆菌表达的由序列编号2的氨基酸序列表示的修饰蛋白A 0.15g 分散于l.OM巧樣酸Ξ钢/O.IM憐酸钢缓冲液(p册.6)40mL，得到蛋白A分散液，上述基因重组 大肠杆菌是将在祀T-24(a)中插入有包含由序列编号1表示的碱基序列的DNA而得的媒介物 导入至宿主化scherichia coli化2UDE3))而制作的，在该蛋白A分散液中添加 W粒子干 燥质量换算为Ig的在实施例1-2中得到的横化氧化粒子分散液化-2)。将所得的分散液在25 °C进行5小时振荡揽拌，将蛋白A固定于粒子。
[0451] 将生成的蛋白A固定粒子W0.1M憐酸钢缓冲液(PH7.6)清洗后，使其分散于1.0M硫 代甘油/0.1M硫酸钢水溶液(pH8.3 )40mL，在25 °C进行17小时振荡揽拌，从而W过量的硫代 甘油使未反应的环氧基开环。
[0452] 其后，依次W〇. 1M憐酸钢缓冲液(pH7.6)、0.5M氨氧化钢水溶液、0.1M巧樣酸钢缓 冲液(pH3.2)进行清洗，得到亲和色谱用填充剂1。
[0453] 亲和色谱用填充剂1的体积平均粒径为64μπι，比表面积为93m^g。
[0454] <实施例2>
[0455] 使基因重组大肠杆菌表达的由序列编号2的氨基酸序列表示的修饰蛋白A 0.15g 分散于l.OM巧樣酸Ξ钢/O.IM憐酸钢缓冲液(p册.6)40mL，得到蛋白A分散液，上述基因重组 大肠杆菌是将在祀T-24(a)中插入有包含由序列编号1表示的碱基序列的DNA而得的媒介物 导入至宿主化scherichia coli化2UDE3))而制作的，在该蛋白A分散液中添加 W粒子干 燥质量换算为Ig的在实施例1-1中得到的分散液化-1)。将所得的分散液在25°c进行5小时 振荡揽拌，将蛋白A固定于粒子。
[0456] 将生成的蛋白A固定粒子W0.1M憐酸钢缓冲液(PH7.6)清洗后，使其分散于1.0M硫 代甘油/0.1M硫酸钢水溶液(pH8.3 )40mL，在25 °C进行17小时振荡揽拌，从而W过量的硫代 甘油使未反应的环氧基开环。
[0457] 其后，依次W〇. 1M憐酸钢缓冲液(pH7.6)、0.5M氨氧化钢水溶液、0.1M巧樣酸钢缓 冲液(pH3.2)进行清洗，得到亲和色谱用填充剂2。
[045引亲和色谱用填充剂2的体积平均粒径为64μπι，比表面积为92m^g。
[0459] <实施例3>
[0460] 将单体组合物变更为由甲基丙締酸缩水甘油醋(Ξ菱丽阳公司制)6.88g、甘油单 甲基丙締酸醋（日油公司制）1.38g、S径甲基丙烷Ξ甲基丙締酸醋(Sartomer公司制）3.03g 和聚乙二醇#400二甲基丙締酸醋(新中村化学公司制，96)2.4?构成的单体组合物，除此W 夕h进行与实施例1-1~1-3同样的操作，得到亲和色谱用填充剂3。
[0461] 亲和色谱用填充剂3的体积平均粒径为67μπι，比表面积为92m^g。
[0462] <实施例4>
[0463] 将单体组合物变更为由甲基丙締酸缩水甘油醋(Ξ菱丽阳公司制)6.87g、甘油单 甲基丙締酸醋（日油公司制）1.37g、S径甲基丙烷Ξ甲基丙締酸醋(Sartomer公司制)4.12g 和甲氧基聚乙二醇#400甲基丙締酸醋（新中村化学公司制，M-90G)1.37g构成的单体组合 物，除此W外，进行与实施例1-1~1-3同样的操作，得到亲和色谱用填充剂4。
[0464] 亲和色谱用填充剂4的体积平均粒径为70μπι，比表面积为94m^g。
[04化] < 实施例5>
[0466] 将单体组合物变更为由甲基丙締酸缩水甘油醋(Ξ菱丽阳公司制）7.41g、甘油单 甲基丙締酸醋（日油公司制）1.37g和Ξ径甲基丙烷Ξ甲基丙締酸醋（Sartomer公司制） 4.94g构成的单体组合物，分别将2，2 '-偶氮二异下腊的使用量从0.5：3g变更为0.93g、将实 施例1-1的（2)中的硫代甘油的添加量从31.39g变更为56.37g，除此W外，进行与实施例1-1 ~1-3同样的操作，得到亲和色谱用填充剂5。另外，将上述硫代甘油的添加工序设为实施例 5(2)。
[0467] 亲和色谱用填充剂5的体积平均粒径为67μπι，比表面积为95m^g。
[0468] <比较例1>
[0469] 不进行实施例1-1的（2)中的硫代甘油的添加 W及利用过氧化氨进行的横化氧化 (实施例1-2的工序），除此W外，进行与实施例1-1~1-3同样的操作，得到亲和色谱用填充 剂6。
[0470] 亲和色谱用填充剂6的体积平均粒径为86μπι，比表面积为97mVg。
[0471 ] <比较例2>
[0472] 不进行实施例5(2)中的硫代甘油的添加 W及利用过氧化氨的横化氧化(实施例1- 2的工序），除此W外，进行与实施例5同样的操作，得到亲和色谱用填充剂7。
[0473] 亲和色谱用填充剂7的体积平均粒径为74μπι，比表面积为95m^g。
[0474] <试验例1动态结合容量(DBC)现憶试验>
[04巧]使用GE肥ALTHCARE公司制造的AKTAprime plus,测定实施例1~5和比较例1~2 的填充剂1~7对在线流速60cm/hr下的蛋白质(人IgG抗体，Equitech Bio公司制HGG-1000) 的DBC。柱容器使用容量4mL(5mm Φ X 200mm长）的柱容器，蛋白质使用W20mM憐酸钢/150mM 氯化钢水溶液(pH7.5)稀释成25mg/mL的蛋白质，填充4mL的填充剂，由洗脱前端10%穿过时 的蛋白质捕捉量和柱填充体积求出DBC。将结果示于表1。
[0476] <试验例2防污性试验>
[0477] 将2 m L的实施例1~5和比较例1~2的填充剂1~7分别填充于注射器柱（内径 1.5cm)，W20mM憐酸钢/150mM氯化钢水溶液(pH7.5)进行置换后，W浓度为0.0015质量％的 方式流过lOmL的溶解有酪红的20mM憐酸钢/150mM氯化钢水溶液(pH7.5)。
[047引接下来，W20mM憐酸钢/150mM氯化钢水溶液(pH7.5) 10血进行清洗，依次流过50mM 巧樣酸钢水溶液(pH3.2) 1 OmL、20mM憐酸钢/150mM氯化钢水溶液(pH7.5) 1 OmL。接下来，流过 lOmL的0.5M氨氧化钢水溶液，按照W下评价基准W目视评价填充剂的防污性。将结果示于 表1。
[0479] (防污性评价基准）
[0480] ◎:几乎无法确认着色
[0481] 〇:可确认少量着色
[0482] Δ:可确认着色
[0483] X:着色严重，可清楚确认
[0484]
[0485] 由关于实施例2的填充剂巧日比较例1的填充剂6的试验例1和2的结果可知，在蛋白 A固定前预先进行硫代甘油处理，使用硫代甘油处理粒子作为固相载体，从而可得到DBC大、 防污性优异的填充剂。
[0486] 此外，由关于实施例1的填充剂1和比较例1的填充剂6的试验例1和2的结果可知， 在蛋白A固定前预先使硫代甘油处理粒子横化氧化，使用横化氧化粒子作为固相载体，从而 可得到DBC大、防污性优异的填充剂。
[0487] <实施例6>
[0488] (1)使由甲基丙締酸缩水甘油醋（Ξ菱丽阳公司制）8.23g、甘油单甲基丙締酸醋 (日油公司制）1.37g和Ξ径甲基丙烷Ξ甲基丙締酸醋（Sartomer公司制）4.12g构成的单体 组合物溶解于2-辛酬（东洋合成公司制）20.6：3g和苯乙酬(井上香料制造所公司制)5.30g的 混合液中，制备单体溶液(M-2)。
[0489] 接下来，将与实施例1-1同样地制备的水溶液(S-1)全部投入至500mL可分离式烧 瓶内，安装溫度计、揽拌翼和冷却管，固定于溫水浴，在氮气环境下开始揽拌。将上述单体溶 液(M-2)全部投入至可分离式烧瓶内，利用溫水浴进行加溫，在内溫达到85°C时添加2,2'- 偶氮二异下腊(和光纯药工业公司制)〇.53g，将内溫维持在86°C。
[0490] (2)其后，在上述反应液中添加硫代甘油(旭化学工业公司制）6.26g，将溫度维持 在86°C，进行3小时揽拌，从而进行在硫代甘油存在下的聚合反应。
[0491] (3)接下来，冷却反应液后，过滤运样的反应液，W纯水和乙醇进行清洗。使经清洗 的粒子分散于纯水，进行3次倾析，除去小粒子。接下来，W粒子的浓度为10质量％的方式使 粒子分散于纯水。将该分散液设为硫代甘油处理粒子分散液化-3)。
[0492] (4)在上述硫代甘油处理粒子分散液化-3)中添加过氧化氨（和光纯药工业公司 制)4.30g后，在25°C颠倒混合24小时，使粒子横化氧化。其后，过滤该反应液，W纯水清洗。 接下来，W粒子的浓度为10质量％的方式使粒子分散于纯水。将该分散液设为横化氧化粒 子分散液化-4)。
[0493] (5)使基因重组大肠杆菌表达的由序列编号2的氨基酸序列表示的修饰蛋白A 0.15g分散于1.0M巧樣酸Ξ钢/0.1M憐酸钢缓冲液(P册.6)40mL，得到蛋白A分散液，上述基 因重组大肠杆菌是将在祀T-24(a)中插入有包含由序列编号1表示的碱基序列的DNA而得的 媒介物导入至宿主化scherichia coli化2UDE3))而制作的，在该蛋白A分散液中添加上 述横化氧化粒子分散液化-4) (W粒子干燥质量换算为Ig)。将该分散液在25Γ进行5小时振 荡揽拌，将蛋白A固定于粒子。
[0494] 将生成的蛋白A固定粒子W0.1M憐酸钢缓冲液(PH7.6)清洗后，使其分散于1.0M硫 代甘油/0.1M硫酸钢水溶液(pH8.3 )40mL，在25 °C进行17小时振荡揽拌，从而W过量的硫代 甘油使未反应的环氧基开环。
[04巧]其后，依次W〇. 1M憐酸钢缓冲液(pH7.6)、0.5M氨氧化钢水溶液、0.1M巧樣酸钢缓 冲液(pH3.2)进行清洗，得到亲和色谱用填充剂8。
[0496] <实施例7>
[0497] 在实施例6的工序（1)的部分，将单体组合物的组成设为甲基丙締酸缩水甘油醋 8.87g、甘油单甲基丙締酸醋1.4始和甘油二甲基丙締酸醋(新中村化学工业公司制)4.44g， 在工序（2)的部分，将硫代甘油的添加的部分变更为添加2-琉基乙醇（东京化成工业公司 审ij)4.88g，除此W外，进行与实施例6同样的操作，得到亲和色谱用填充剂9。
[0498] <实施例8>
[0499] 在实施例6的工序（1)的部分，将单体组合物的组成设为甲基丙締酸缩水甘油醋 8.79g、甘油单甲基丙締酸醋1.46g和乙二醇二甲基丙締酸醋（新中村化学工业公司制） 4.40g，在工序(2)的部分，将硫代甘油的添加的部分变更为添加3-琉基-2-下酬(东京化成 工业公司制)5.43g，除此W外，进行与实施例6同样的操作，得到亲和色谱用填充剂10。
[0如0] <实施例9>
[0501]在实施例6的工序（1)的部分，将单体组合物的组成设为甲基丙締酸缩水甘油醋 8.86g、甘油单甲基丙締酸醋（日油公司制)0.74g和Ξ径甲基丙烷Ξ甲基丙締酸醋5.17g，在 工序(2)的部分，将硫代甘油的添加的部分变更为添加3-琉基-1-丙醇（东京化成工业公司 审ij)4.81g，不进行工序(4)的粒子的横化氧化，除此W外，进行与实施例6同样的操作，得到 亲和色谱用填充剂11。
[0如2] <实施例10>
[0503] 在实施例6的工序（1)的部分，将单体组合物的组成变更为甲基丙締酸缩水甘油醋 7.41g、甘油单甲基丙締酸醋1.4始和Ξ径甲基丙烷Ξ甲基丙締酸醋5.93g，除此W外，进行 与实施例6的工序(1)和(2)同样的操作。
[0504] 接下来，将反应液冷却至25°C，添加3,6-二氧杂-1,8-辛二硫醇（丸善油化公司制） 45.56g并进行30分钟揽拌后，利用溫水浴再次加溫，从内溫达到85°C的时刻开始一边进行5 小时揽拌一边将溫度维持在85°C，从而进行使用3,6-二氧杂-1,8-辛二硫醇的交联化。
[0505] 其后，进行与实施例6的工序(3)~(5)同样的操作，得到亲和色谱用填充剂12。
[0如6] <实施例11>
[0507]在实施例6的工序（1)的部分，将单体组合物的组成设为甲基丙締酸缩水甘油醋 7.41g、甘油单甲基丙締酸醋1.4?和Ξ径甲基丙烷Ξ甲基丙締酸醋5.93g，在工序（2)的部 分，将硫代甘油的添加的部分变更为3-琉基异下酸6.96g，除此W外，进行与实施例6同样的 操作，得到亲和色谱用填充剂13。
[0如引 < 比较例3>
[0509] 在实施例6的工序（1)后，不进行工序（2)的硫代甘油的添加，将反应液冷却至25 °C，添加3,6-二氧杂-1,8-辛二硫醇45.56g而进行与实施例10同样的交联化，除此W外，进 行与实施例6同样的操作，得到亲和色谱用填充剂14。
[0510] <比较例4>
[0511] 不进行实施例7中的硫代甘油的添加 W及利用过氧化氨的横化氧化(实施例6(4) 的工序），除此W外，进行与实施例7同样的操作，得到亲和色谱用填充剂15。
[0512] <试验例3平均粒径的测定>
[0513] 对于实施例6~11和比较例3~4中得到的亲和色谱用填充剂的平均粒径(体积平 均粒径），利用激光衍射散射式粒度分布测定装置(Beckman Coulter公司制LS13320)进行 测定。将结果示于表2。
[0514] <试验例4蛋白A结合量的定量>
[0515] 使用二哇嘟甲酸(BCA)试剂对作为与实施例6~11和比较例3~4中得到的亲和色 谱用填充剂结合的配体的蛋白A的结合量进行定量。具体而言，将W固体成分换算为Img的 填充剂提取至试管，将其W^ThermoFisher Scientific公司的BCA Protein Assay Kit进行 定量。反应是通过在37°C倒置混合30分钟而进行的。校准曲线使用与结合于载体的蛋白A相 同的物质制成。将结果示于表2。
[0516] <试验例5动态结合容量(DBC)现憶试验>
[0517] 使用GE肥ALTHCARE公司制AKTAprime plus,测定实施例6~U和比较例3~4的各 填充剂对在线流速300cm/hr下的蛋白质（人IgG抗体，Equitech Bio公司制HGG-1000)的 DBC。柱容器使用容量4mL(5mm Φ X 200mm长）的柱容器，蛋白质使用W20mM憐酸钢/150mM氯 化钢水溶液(pH7.5)稀释成5mg/mL的蛋白质，填充4mL的填充剂，由洗脱前端10 %穿过时的 蛋白质捕捉量和柱填充体积求出DBC。将结果示于表2。
[051引 < 试验例6HCP的定量>
[0519] 在柱容器(GE肥ALTHCARE公司制Tricornl0/50column)中，将实施例6~11和比较 例3~4的各填充剂W填充高度约5cm进行填充而制作柱。将所得的柱分别连接于GE 肥ALTHCARE公司制AKTA Prime Plus,在5柱容量(柱容积的5倍）、流速ImL/分钟下使20mM憐 酸钢缓冲液(pH7.5)通液，使其平衡化。
[0520] 接下来，将含有单克隆抗体TYastuzumab的CH0细胞培养上清W约23mg抗体/mL载 体的负荷量W流速ImL/分钟通液于柱。
[0521 ]接下来，分别在5柱容量、流速ImL/分钟下使20mM憐酸钢缓冲液(pH7.5)、20mM憐酸 钢AM氯化钢缓冲液(pH7.5)和20mM憐酸钢缓冲液(pH7.5)依次通液于柱。
[0522] 其后，使50mM巧樣酸钢缓冲液(pH3.2似流速ImL/分钟通液于柱，使在柱内捕捉到 的单克隆抗体洗脱，回收Abs. 280> lOOmAu的洗脱部分。
[0523] 然后，使用分光光度计，对回收的部分中含有的抗体浓度(mg/mL)进行测定。此外， 使用切即US Technologies公司制CH0 HCP ELISA kit、3G，对回收的部分中含有的Host Cell Protein化CP)的浓度(ng/mL)进行测定。进而，通过将HCP的浓度除W抗体浓度，从而 算出单位抗体量的HCP量。将结果示于表2。
[0524]
[0525] 由关于实施例6~11的填充剂和比较例3~4的填充剂的试验例5、6的结果可知，在 聚合中添加硫酸，在链的末端导入介由硫基的亲水性基团，从而可得到DBC大、HCP也减少的 优异的填充剂。
【主权项】
1. 一种固相载体，是具有可固定配体的官能团的固相载体，其特征在于，具有如下基 团：具有亚横酷基、硫酸基、氧基或亚氨基与径基、硫醇基、氨基、簇基、硫酸基、憐酸基或烧 酷基的基团。2. 如权利要求1所述的固相载体，其中，所述可固定配体的官能团为环状酸基、簇基、下 二酷亚胺氧基、甲酯基、异氯酸醋基或氨基。3. 如权利要求2所述的固相载体，其中，所述环状酸基是由下述式或（1-3) 表示的基团，(1 - 1) 式(1-1)中， Ri表示碳原子数1~6的2价的控基， *表示结合位点，(1-2) 式（1-2)中，*与上述罔 (1 - 3) 式（1-3)中，*与上述同义。4. 如权利要求1~3中任一项所述的固相载体，其中，所述具有亚横酷基、硫酸基、氧基 或亚氨基与径基、硫醇基、氨基、簇基、硫酸基、憐酸基或烧酷基的基团是具有亚横酷基、硫 酸基、氧基或亚氨基与径基的基团。5. 如权利要求1~4中任一项所述的固相载体，其中，所述具有亚横酷基、硫酸基、氧基 或亚氨基与径基、硫醇基、氨基、簇基、硫酸基、憐酸基或烧酷基的基团是由下述式（2-1)、 (2-2)或(2-3)表示的基? (2-1) 式(2-1)中， Ri表示碳原子数1~6的2价的控基， R2表示碳原子数1~10的1价的有机基团， X表示亚横酷基、硫酸基、氧基或亚氨基，**表示结合位点， 2 -艺) 式(2-2)中，r2、X和 * (2-3) 式(2-3)中，r2、X和 *6. 如权利要求5所过 （3)表示的1价的有机基团， 、3) 式(3)中， R3表示碳原子数1~10的2价或3价的有机基团， n表示1或2。7. 如权利要求5或6所述的固相载体，其中，X是亚横酷基或硫酸基。8. 如权利要求1~7中任一项所述的固相载体，其是多孔聚合物粒子。9. 一种固相载体的制造方法，该固相载体具有可固定配体的官能团和由下述式(5-1)、 (5-2)或(5-3)表示的基团，所述固相载体的制造方法包括:使具有可固定配体的官能团的 固相载体与由下述式(4)表示的化合物接触的工序， R2-Y-H (4) 式(4)中， R2表示碳原子数1~10的1价的有机基团， Y表示硫酸基、氧基或耶氨其， 5-1) 式巧-1)中，Ri表示碳原子数1~6的2价的控基， **表示结合位点， R2和Y与上述同义，：5~2) 式巧-2)中，R2、Y和* (5 - 3) 式巧-3)中，R2、Y和**与上述同义。10. 如权利要求9所述的制造方法，其中，Y为硫酸基。11. 如权利要求10所述的制造方法，其包括:进一步使所述具有可固定配体的官能团和 由下述式(5-1)、（5-2)或巧-3)表示的基团的固相载体与氧化剂接触，得到具有可固定配体 的官能团和由下述式(6-1)、（6-2)或(6-3)表示的基团的固相载体的工序，6 - 1) 式(6-1)中，r1、r2^ (6-2) 式(6-2)中，R2和料 (巧-3) 式(6-3)中，R哺**与上述同义。12. 如权利要求9~11中任一项所述的制造方法，其中，所述可固定配体的官能团是由 下述式（1-1)、（ 1-2)或（1-3)亲TK的某闭，a…1) 式(1-1)中， *表示结合位点， Ri与上述同义， (1-2) 式（1-2)中，*与上述[ (1 一过) 式（1-3)中，*与上述同义。13. -种亲和色谱用填充剂的制造方法，其包括： 将配体固定于权利要求1~8中任一项所述的固相载体或通过权利要求8~11中任一项 所述的制造方法制造的固相载体的工序。14. 如权利要求12所述的制造方法，其中，所述配体为蛋白质或肤。15. -种亲和色谱用填充剂，其是通过权利要求13或14所述的制造方法而得到的。16. -种亲和精制用载体，是具有固相载体与配体或用于键合配体的反应性基团的亲 和精制用载体，其特征在于， 所述配体或用于键合配体的反应性基团与固相载体键合， 构成所述固相载体的高分子具有介由硫基、亚横酷基或横酷基在链的末端具有选自径 基、硫醇基、幾基、氨基、硫基、二硫酸基、亚横酷基、横酷基、簇基、硫酸基和憐酸基中的至少 一个的末端结构。17. 如权利要求16所述的亲和精制用载体，其中，所述末端结构是由下述式(21)表示的 末端结构， 式(21)中， R5i表示碳原子数1~20的有机基团， (21) Z表示径基、硫醇基、氨基、簇基、硫酸基、憐酸基或烧酷基， k表示IW上的整数。18. 如权利要求17所述的亲和精制用载体，其中，Z为径基、硫醇基、簇基、硫酸基或烧酷 基。19. 如权利要求17或18所述的亲和精制用载体，其中，k为1~5的整数。20. 如权利要求16~19中任一项所述的亲和精制用载体，其中，所述末端结构是在固相 载体聚合前或聚合中添加硫醇化合物而导入的结构。21. 如权利要求16~20中任一项所述的亲和精制用载体，其中，构成所述固相载体的高 分子是具有来自如下单体的结构单元的高分子，所述单体是选自苯乙締系单体、乙締基酬 系单体、（甲基)丙締腊系单体、（甲基)丙締酸醋系单体和（甲基)丙締酷胺系单体中的巧中或 2种W上的单体。22. 如权利要求16~21中任一项所述的亲和精制用载体，其中，所述固相载体进一步具 有来自由下述式(22)表示的交联剂的交联结构， X11_r52_x12 (22) 式(22)中， RS2表示碳原子数1~10的2价的有机基团， Xii和Xi2各自独立地表示径基、氨基或硫醇基。23. 如权利要求22所述的亲和精制用载体，其中，Xii和Xi2为硫醇基。24. 如权利要求23所述的亲和精制用载体，其是将来自由式(22)表示的交联剂的交联 结构中的硫基氧化而成的。25. 如权利要求16~24中任一项所述的亲和精制用载体，其中，所述配体或用于键合配 体的反应性基团是配体。26. 如权利要求25所述的亲和精制用载体，其中，所述配体为免疫球蛋白结合蛋白质。27. -种色谱柱用填充剂，W权利要求16~26中任一项所述的亲和精制用载体为载体。28. -种色谱柱，在柱容器中填充有权利要求15或27所述的填充剂。29. -种祀物质的精制方法，其特征在于，包括： 准备含有祀物质的组合物的工序，W及 使所述组合物通液于权利要求28所述的色谱柱的工序。30. 如权利要求29所述的精制方法，其中，所述祀物质为蛋白质。
【文档编号】G01N30/88GK105992949SQ201480064362
【公开日】2016年10月5日
【申请日】2014年11月27日
【发明人】籾山昌辉, 津田幸子, 冈野友亮, 盐谷知范, 河田优子, 津田良, 川井洋
【申请人】Jsr株式会社, Jsr生命科学株式会社