一种胱抑素c检测试剂盒的制作方法
【专利摘要】本实用新型提供了一种胱抑素C检测试剂盒，包括盒体(7)和检测试纸；检测试纸包括从左到右依次连接并设置在底基(1)的样品垫(2)、结合物垫(3)、包被膜(4)和吸水垫(5)；所述的盒体(7)由透明材质制成，便于观察检测结果，避免了在盒体上开设的敞开的结果观察口，提高了盒体的强度，便于防止检测试纸的污染。进一步的透明材质可依据光源的波长不同改变其颜色，便于避光保存。
【专利说明】
一种胱抑素C检测试剂盒
技术领域
[0001 ]本实用新型涉及胶体金免疫检测领域，具体而言，涉及一种胱抑素C检测试剂盒。
【背景技术】
[0002]胱抑素C(CysC)是一种低分子量蛋白质，可由机体所有的有核细胞产生，且产率恒定。人体循环中的胱抑素C仅经肾小球滤过而被清除，是一种反映肾小球滤过率变化的理想的内源性标志物，而肾小球的滤过率(g1meruIar filtrat1n rate，GFR)是监测肾功能的一个重要指标，尤其对于肾移植的病人，快速准确的掌握肾小球滤过率的变化是十分重要的。此外由于胱抑素C分子量大于肌酐，且带正电荷，所以它更容易反映肾小球滤过膜通透性的早期变化，可以在肾小球滤过率轻微降低时升高，较肌酐更敏感，作为肾功能试验优于血清肌酐指标，具有重要的临床应用价值。
[0003]研究表明胱抑素C是低分子量蛋白质中与GFR最相关的内源性标志物，甚至优于血清肌酐。血清β2-微球蛋白浓度由于在炎症。肿瘤及免疫疾病时也可升高，故不是理想的GFR内源性标志物。而胱抑素C即使在炎症状态下，其产生率也不会改变，血清浓度受年龄、性另O、疾病的病情变化的影响较小。说明胱抑素C的诊断准确性明显优于血清肌酐。胶体金免疫层析法是一种快速、简便、灵敏、直观，并可进行现场检测的方法，而且有实验结果表明，胶体金检测的敏感性正逐步接近和达到ELI SA的水平。
[0004]目前已知的测定胱抑素C的方法有放射免疫测定法、荧光免疫测定法、时间分辨荧光免疫测定法、酶联免疫测定法。这些方法具有操作繁琐、耗时长、需要配备专业的仪器和操作人员等缺点，不利于病人的自行检测。
[0005]目前胱抑素C胶体金检测试剂盒通常于盒体设有结果观察孔，以便读出试剂盒的检测结果，然而该种检测试剂盒的易于损坏，不利于运输保存，同时检测试纸失效快，保存期短，检测结果的阳性符合率较低。
[0006]因此，本领域迫切需要提供一种在临床中能够实现快速、准确地检测胱抑素C的检测试剂盒，以避免上述缺陷造成的检测试纸的浪费，提高检测试纸的检测结果的阳性符合率。
【实用新型内容】
[0007]有鉴于此，本实用新型提供了一种胱抑素C检测试剂盒，所述的所述的检测装置包括盒体，以及位于盒体内的检测试纸;所述的盒体是由透明材质制成的盒体;所述的盒体设有加样孔;所述的检测试纸包括底基、以及从左到右依次连接并设置在所述底基上的样品垫、结合物垫、包被膜和吸水垫;所述的检测试纸的结合物垫上含有胶体金抗胱抑素C单克隆抗体交联物;所述的检测试纸的包被膜上从左到右依次设有一道检测线T和一道质控线C;所述的检测线T包被有固相化的抗胱抑素C单克隆抗体，所述的质控线C包被有固相化羊抗鼠多克隆抗体。
[0008]作为优选，所述的透明材质为光致变色材料。
[0009]作为优选，所述的透明材质为无机光致变色材料。
[0010]作为优选，所述的样品垫右端具有搭接在所述的结合物垫上的样品搭接部，所述的结合物垫右端具有搭接在所述包被膜上的结合物搭接部，所述的吸水垫左端具有搭接在包被膜上的吸水搭接部。
[0011]作为优选，所述的样品搭接部在其延伸方向上与所述的结合物搭接部留有间距。
[0012]作为优选，所述的检测试纸的样品垫是由玻璃纤维、聚酯膜、纤维素滤纸或无纺布制成的样品垫。
[0013]作为优选，所述的检测试纸的结合物垫是由聚酯纤维素膜或玻璃纤维膜制成的结合物垫。
[0014]作为优选，所述的检测试纸的包被膜由硝酸纤维素膜制成的包被膜。
[0015]作为优选，用于固定所述检测试纸的固定底座、上盖、干燥剂、滴管、说明书、颜色标签、样品收集管、和样品稀释液。
[0016]作为优选，所述的加样孔设有与其相配套的加样孔防污盖，并用于打开和盖合加样孔。
[0017]与现有技术相比，采用本实用新型提供的胱抑素C胶体金免疫层析检测试剂盒，通过设置能够利用胶体金免疫层析法对胱抑素C进行快速的检测，同时采用透明材质制作盒体，避免了常见的此类试剂盒于盒体设有的结果观察孔，改善了盒体的结构，提高了试剂盒盒体的机械强度，易于保存及运输。
[0018]进一步的，采用光致敏变色的透明材质制作胶体金免疫层析检测试剂盒的盒体，能更好的保护置于盒体内的检测试纸，防止检测试纸中的胶体金在自然光(光的波长范围为200nm-760nm)的照射下发生沉降、聚集造成检测试纸的失效。
[0019]同时，目前传统的检测试剂盒为节约成本，盒体上开设的加样孔和结果观察孔通常并不封闭，通过采用透明材质制作试剂盒的盒体，无需再开设结果观察口，同时加样孔配以适当的加样孔防污盖，降低了置于盒体内检测试纸被污染的概率，提高了检测结果阳性符合率。
[0020]由此可以看出，与现有检测装置相比，以上改进能够有效提高试剂盒盒体的强度，降低置于其内的检测试纸的污染概率，避免了因胶体金在自然光照射下不稳定而导致的检测试纸失效，提高了检测结果的阳性符合率。
【附图说明】
[0021 ]图1是本实用新型提供的检测装置结构示意图；
[0022]图2是本实用新型提供的检测装置的盒盖俯视图；
[0023]图3是本实用新型提供的检测试纸结构示意图；
[0024]图4是本实用新型提供的检测试纸判定结果为阳性时俯视图；
[0025]图5是本实用新型提供的检测试纸判定结果为阴性时俯视图；
[0026]图6是本实用新型提供的检测试纸判定结果为无效时俯视图；
[0027]其中:底板I，样品垫2，结合物垫3，包被膜4，吸水垫5，检测线T，质控线C，盒体7，加样孔8，加样孔防污盖9。
【具体实施方式】
[0028]下面结合具体实施例的方式对本实用新型的权利要求做进一步的详细说明，但并不构成对本实用新型的任何限制，任何人在本实用新型权利要求范围内所做的有限次的修改，仍在本实用新型的权利要求范围之内。
[0029]本实用新型提供了一种胱抑素C检测试剂盒，当然本实用新型检测试剂盒不局限于胱抑素C的检测，还可以应用到于其他的检测领域中。
[0030]参照图1、图2，均为本实用新型胱抑素C胶体金免疫层析检测试剂盒的示意图，图4为本实用新型中试纸条的结构示意图。
[0031]本实用新型胱抑素C胶体金免疫层析检测试剂盒包括盒体7，以及位于盒体7内的检测试纸，其中检测试纸包括底基1、以及从左到右依次连接并设置在所述底基I上的样品垫2、结合物垫3、包被膜4和吸水垫5;所述的检测试纸的结合物垫3上含有胶体金抗胱抑素C单克隆抗体交联物;所述的检测试纸的包被膜4上从左到右依次设有一道检测线T和一道质控线C;所述的检测线T包被有固相化的抗胱抑素C单克隆抗体，所述的质控线C包被有固相化羊抗鼠多克隆抗体;所述的盒体7由透明材质制成，并设有加样孔8。
[0032]前述，透明材质制作的检测试剂盒无需开设结果观察口，改善了检测试剂盒的盒体结构，增强了盒体的密封性和强度，改善了盒体针对检测试纸的保护性能，防止检测试纸在使用前于结果观察口处污染的情况，便于检测试剂盒的保存及运输。
[0033]前述，于加样孔8添加样品后，样品移动到结合物垫3时，其中的待检测抗体，如人抗体，可与结合物垫3上包被的金属胶体标记的特异性抗体相结合，而后含有从结物合垫3上结合或混合的物质的样品继续移动到包被膜4上，并与包被膜4上包被的特异性抗体相结合并且被截留，从而使得样品中的被检物质得以被检测。应该理解的是特异性抗体经包被液包被于包被膜4上，即检测线T;质控线C通常为包被液的羊抗鼠多克隆抗体或羊抗兔多克隆抗体。检测线T与质控线C之间应留有适当间距，而设置为相互平行的区域，更便于区分两者。
[0034]本实用新型的实施例中，透明材质的盒体7由光致变色材料制成，该种材料在适当波长光的辐照下改变其颜色，而移去光源时则恢复其原来颜色，即该种光致变色的现象是可逆的变化。
[0035]目前的研究证实，胶体金与抗体的交联物于20°C下避光的环境中可放置3个月左右，而自然光(光的波长范围为200nm-760nm)照射下，20°C下仅可保存14天左右。由此可知，胶体金在自然光(光的波长范围为200nm-760nm)的照射下不稳定，易发生沉降、聚集，因此，利用胶体金免疫层析法原理制备的检测试纸，于避光条件下保存，检测试纸中的胶体金稳定性较好，延长了检测试纸的保存期限，避免了检测试纸短期之内即发生失效，因此采用光致敏变色的透明材质制作胶体金免疫层析检测试剂盒的盒体，减少了检测试纸失效而造成的浪费。
[0036]在本实用新型的实施例中，透明材质为无机光致变色材料。无机光致变色材料具有热稳定性和耐疲劳性好、强度高、耐化学腐蚀的优势。
[0037]在其他实施例中，也可以采用光线过滤功能优良的有机光致变色材料。
[0038]在本实用新型的实施例中，样品垫2右端具有搭接在结合物垫3上的样品搭接部，所述的结合物垫3右端具有搭接在包被膜4上的结合物搭接部，吸水垫5左端具有搭接在所述的包被膜4上的吸水搭接部。
[0039]上述，“搭接”是指，相邻的两个组件的首尾部分重叠，并且在重叠处形成可以允许液体样品移动的连接结构。例如，可以在相邻的两个组件的首尾部分通过按压操作形成较为紧密的重叠结构，使得样品能够从上游组件的尾部通过该重叠结构移动至下游组件上。上游组件可以重叠在下游组件的上方，也可以重叠在下方。在检测时，可以将液体状态的样品(如血液，血浆及其他体液稀释液等)加样到样品垫2上，该液态状态的样品可以通过吸水作用，沿着样品垫2向与之搭接的结合物垫3移动，接触到结合物垫3后再沿着结合物垫3向与之搭接的包被膜4移动，接触到包被膜4之后再沿着包被膜4向与之搭接的吸水垫5移动。
[0040]可以理解的是，检测线T和质控线C平行设置，便于于区分两者。
[0041]本实用新型实施例中，样品搭接部在其延伸方向上与所述的结合物搭接部留有间距。
[0042]前述，样品通过样品垫2逐步移动至吸水垫5的作用为层析作用。样品搭接部在其延伸方向上与结合物搭接部留有间距，可以使得结合物垫3上胶体金标记后特异性抗体能够与样品中的待测抗原留有充分的结合时间，如待测样品中存在所要检测的特异性抗原，则可以在含有胶体金标记后特异性抗体的结合物垫处形成抗原一抗体一胶体金复合物;所述的结合物搭接部在其延伸方向上与所述的吸水搭接部留有间距，预留充分的结合时间以便上述抗原一抗体一胶体金复合物于包被膜4上形成抗体一抗原一抗体一胶体金复合物，即发生双抗夹心的特异性结合。
[0043]在本实用新型实施例中，样品垫2可以是由聚酯膜、纤维素滤纸或无纺布制成的样品垫，优选玻璃纤维样品垫;玻璃纤维相对于其他材料脱水性好、不黏连样品。
[0044]在本实用新型实施例中，结合物垫3由玻璃纤维膜制成，优选的由聚酯纤维素膜制成，聚酯纤维素膜与胶体金的亲和力优于其他材料制成的结合物垫，防止胶体金发生聚集或形成沉淀。
[0045]在本实用新型实施例中，包被膜4优选硝酸纤维素膜制成的包被膜，硝酸纤维素膜的蛋白固定能力优于其他材料制成的包被膜，能够更好的固化包被在其上的蛋白质。
[0046]在本实用新型实施例中，检测试纸的底基I优选地由PVC板制成的底基，PVC板易于获得，较为便宜，并且具有很好的稳定性，并易于固定上述材料。
[0047]在本实用新型实施例中，
[0048]I)样品垫2的制备方法为:将样品垫2裁成20mm X 300mm的大小，浸泡在样品垫缓冲液中，I小时之后取出，于室温干燥16-18小时。
[0049]样品垫2的缓冲液配方如下:2%BSA、l%PVP、0.5%Tween溶解于0.01的PBS(PH7.4)缓冲液中。
[0050]2)结合物垫3的制备方法:
[0051]①胶体金溶液的配制:将浓度为lmg/ml氯金酸溶液950ml加热煮沸5?10分钟，加入浓度为100mg/ml的柠檬酸三钠溶液50ml，混匀，继续加热5?10分钟，直至溶液变透明玫瑰红色为止。加纯化水补足体积至1000ml。
[0052]②抗待测物单克隆抗体金标液的配制:取上述胶体金溶液300ml，加入0.1M K2CO3置于室温搅拌，调节溶液的pH值至8.0 ；取抗待测物单克隆抗体6mg，加入浓度为0.015M体积为20ml PBS缓冲溶液中混匀后加入搅拌中的胶体金溶液中；将上述混合溶液室温下搅拌2小时;搅拌结束后加入3%聚乙二醇20000溶液160ml，混匀;室温下以13000转/分钟，离心30分钟分离上述溶液;离心结束后弃去上清液，取沉淀，将该沉淀溶解于10ml的金标抗体保存液中。
[0053]③将上述抗待测物的单克隆抗体金标液用金标抗体保存液稀释后，分别铺于各个检测试纸的结合物垫3上，置于温度为37 °C的干燥间内干燥4?6小时;干燥后的金标结合物垫3同干燥剂一同放入密封袋，置玻璃干燥器中保存备用。
[0054]3)包被膜4的制备方法:
[0055]①包被
[0056]包被液的制备:取硼酸12g，氢氧化钠2g溶于纯化水并定容至1000ml。
[0057]检测线T:在包被膜4上划线，在膜的一端用记号笔做好质控线C和检测线T的标记，质控线C和检测线T的距离为0.5cm，检测线T与包被膜4下缘的距离为lcm，用上述包被液将抗待测物单克隆抗体稀释到1.2mg/mL进行包被，划线浓度为]^170]1，速度1001111]1/8。
[0058]质控线C:上述包被液将羊抗鼠多克隆抗体稀释到1.2mg/mL进行包被，划线浓度为IyL/cm，速度 I OOmm/ s。
[0059]②干燥
[0060]置于37°C干燥间内4?6小时；干燥完毕后将包被膜4与干燥剂一同放入密封袋置于玻璃干燥器中保存备用。
[0061 ]另外，胶体金免疫层析检测试纸盘中试纸条的组装方法如下:
[0062]①利用裁切机裁切样品垫2、结合物垫3和吸水垫5，裁切后的样品垫2宽度为10_，长度为58mm;裁切后的结合物3垫宽度为7mm，长度为58mm;裁切后的吸水垫5宽度为10mm，长度为58mm。
[0063]②将宽度为1mm的吸水垫贴5装于PVC底基I上，并且使其下端与包被膜4叠压2mm，然后撕去结合物垫3下端保护膜，将宽度7mm的结合物垫3与包被膜4叠压2mm，进一步在结合物垫3下方粘贴宽度1mm的样品垫2;粘贴时需要将吸水纸、结合物垫3、样品垫2均匀、轻微滚动式推进，以加强粘合力，并防止产生气泡。
[0064]③取出粘贴好的检测试纸置于切板机上，切成宽度为2mm，然后在铝箔袋中放入一包Ig的干燥剂和裁切好的检测试纸，在封口机上将铝箔袋热合封口。
[0065]在本实用新型的实施例中，还含有未图示的滴管、干燥剂、说明书、颜色标签、样品收集管、和样品稀释液。
[0066]在本实用新型实施例中，加样孔8设有与其相配套的加样孔防污盖11，并用于打开和盖合加样孔8，避免检测试纸由加样孔8处污染。
[0067]本申请中提供的检测试剂盒使用胶体金免疫层析法，利用透明材质制作的盒体，提高了盒体的强度，简化了盒体结构，避免了检测试纸由结果观察口处污染的情况，减少了检测试纸失效造成浪费，提高了胱抑素C胶体金免疫层析检测试剂盒的阳性符合率。
【主权项】
1.一种胱抑素C检测试剂盒，所述的检测试剂盒包括盒体(7)，以及位于盒体(7)内的检测试纸，其特征在于: 所述的盒体(7)是由透明材质制成的盒体;盒体(7)设有加样孔(8);所述的检测试纸包括底基(I)、以及从左到右依次连接并设置在所述底基(I)上的样品垫(2)、结合物垫(3)、包被膜(4)和吸水垫(5);所述的检测试纸的结合物垫(3)上含有胶体金抗胱抑素C单克隆抗体交联物;所述的检测试纸的包被膜(4)上从左到右依次设有一道检测线(T)和一道质控线(C);所述的检测线(T)包被有固相化的抗胱抑素C单克隆抗体，所述的质控线C包被有固相化羊抗鼠多克隆抗体。2.如权利要求1所述的胱抑素C检测试剂盒，其特征在于:所述的透明材质为光致变色材料。3.如权利要求1所述的胱抑素C检测试剂盒，其特征在于:所述的透明材质为无机光致变色材料。4.如权利要求1所述的胱抑素C检测试剂盒，其特征在于:所述的样品垫(2)右端具有搭接在所述的结合物垫(3)上的样品搭接部，所述的结合物垫(3)右端具有搭接在所述包被膜(4)上的结合物搭接部，所述的吸水垫(5)左端具有搭接在包被膜(4)上的吸水搭接部。5.如权利要求4所述的胱抑素C检测试剂盒，其特征在于:所述的样品搭接部在其延伸方向上与所述的结合物搭接部留有间距。6.如权利要求1所述的胱抑素C检测试剂盒，其特征在于:所述的检测试纸的样品垫(2)是由玻璃纤维、聚酯膜、纤维素滤纸或无纺布制成的样品垫(2)。7.如权利要求1所述的胱抑素C检测试剂盒，其特征在于:所述的检测试纸的结合物垫(3)是由聚酯纤维素膜或玻璃纤维膜制成的结合物垫(3)。8.如权利要求1所述的胱抑素C检测试剂盒，其特征在于:所述的检测试纸的包被膜(4)由硝酸纤维素膜制成的包被膜(4)。9.如权利要求1所述的胱抑素C检测试剂盒，其特征是进一步包括一种或多种选自下组的组成部分:用于固定所述检测试纸的固定底座、上盖、干燥剂、滴管、说明书、颜色标签、样品收集管、和样品稀释液。10.如权利要求1所述的胱抑素C检测试剂盒，其特征在于:所述的加样孔(8)设有与其相配套的加样孔防污盖(9)，并用于打开和盖合加样孔(8)。
【文档编号】G01N33/577GK205608003SQ201620274411
【公开日】2016年9月28日
【申请日】2016年3月31日
【发明人】张兆鸿
【申请人】珠海华澳生物科技有限公司