五味子乙素在制备治疗糖尿病药物中的应用
【技术领域】
[0001] 本发明属于医药技术领域，具体涉及一种预防和治疗糖尿病的药物，特别涉及一 种五味子乙素在制备治疗糖尿病药物中的应用。
【背景技术】
[0002] 根据国际糖尿病联盟（International Diabetes Federatio，IDF)统计，2014 年 全球的糖尿病患者有3. 87亿，全球发病率为8. 3%，估计到2035年，全球糖尿病人数会达到 5. 92亿。中华医学会糖尿病学分会于2007至2008年在我国部分地区开展的糖尿病流行病 学调查显示：我国20岁以上人群糖尿病患病率为9. 7%，糖尿病前期的比例为15. 5%。糖 尿病是一种慢性疾病，伴随着病程的延长，各种代谢紊乱能导致各种组织，特别是眼、肾、心 脏、血管、神经的慢性损害和功能障碍，由此引发的心脑血管病变、肾功能衰竭、失明、下肢 坏疽等成为糖尿病致残致死的主要原因。2014年全球有490万人死于糖尿病。糖尿病不仅 给患病个体带来了肉体和精神上的损害并导致寿命的缩短，还给个人、国家带来了沉重的 经济负担。预防糖尿病前期向糖尿病转化以及对已诊断患者进行良好的治疗时糖尿病防治 指南中最重要的策略。
[0003] 2型糖尿病占所有糖尿病90 %以上，其发病机制有两个基本环节：胰岛素抵抗和 胰岛0细胞胰岛素分泌相对不足。胰岛素抵抗是指肝、肌肉、脂肪等胰岛素作用的靶器官 对正常浓度的胰岛素产生反应不足的病理生理状态。在这种状态下，胰岛0细胞需要分泌 更多的胰岛素（高胰岛素血征）来抵抗高血糖。胰岛0细胞不能够产生足够的胰岛素来 抵抗越发严重的胰岛素抵抗，最终导致胰岛0细胞衰竭。
[0004] 2型糖尿病是一种慢性进行性的疾病，绝大部分患者需要终身用药。
[0005] 五味子为木兰科植物五味子Schisandra chinensis (Turcz. )Baill?或华中五味 子Schisandra sphenanthera Rehd. et Wils.的干燥成熟果实。五味子的功效是敛肺，滋 肾，生津，收汗，涩精。中医称糖尿病为消渴症，基本病机为阴津亏耗，燥热偏盛。很多治疗糖 尿病中药方剂中都含有五味子，一些研究表明五味子的提取物有降低糖尿病血糖的作用， 不过五味子中的单体成分抗糖尿病作用未见任何报道。
【发明内容】
[0006] 本发明提供了五味子乙素在制备治疗糖尿病药物中的应用，并提供了一种以五味 子乙素为有效成分的药物组合物，利用该药物组合物可有效控制血糖水平。
[0007] 五味子乙素在制备治疗糖尿病药物中的应用。
[0008] 申请人研究发现五味子乙素可显著改善胰岛素抵抗，增加胰岛素抵抗肝细胞的葡 萄糖吸收，降低糖尿病患者的血糖水平，改善葡萄糖耐受水平，其效果显著。五味子乙素能 很好地应用于治疗糖尿病，尤其是2型糖尿病和与糖尿病相关的疾病，达到改善糖尿病的 目的。
[0009] -种治疗糖尿病的药物组合物，包含作为有效成分的五味子乙素。
[0010] 作为优选，五味子乙素有效作用浓度为5~20 yM。
[0011] 作为优选，药物组合物中五味子乙素的百分比含量为22~25%。
[0012] 作为优选，药物组合物包括可药用辅料。药物辅料可以赋予药物一定剂型，有效保 证药物有效成分的释放和吸收。
[0013] 作为优选，所述药物组合物为口服给药的剂型。口服给药方式简便，不直接损伤皮 肤或黏膜，减少感染风险。由于糖尿病患者需要长期用药，故口服给药是一种经济安全的方 式。
[0014] 更为优选，所述口服给药的剂型为溶液剂、片剂、胶囊剂或颗粒剂。
[0015] 本发明具备的有益效果：以五味子乙素为有效成分的药物可显著降低糖尿病患者 的血糖水平，其有效作用浓度远远低于市场一线用药二甲双胍。
【附图说明】
[0016] 图1为5 iiM的五味子乙素对胰岛素抵抗的BNL CL. 2细胞葡萄糖消耗量的影响， 其中N为正常对照组，M为模型组，纵坐标表示葡萄糖相对消耗量的百分比；
[0017] 图2为10 iiM的五味子乙素对胰岛素抵抗的BNL CL. 2细胞葡萄糖消耗量的影响， 其中N为正常对照组，M为模型组，纵坐标表示葡萄糖相对消耗量的百分比；
[0018] 图3为20 y M的五味子乙素对胰岛素抵抗的BNL CL. 2细胞葡萄糖消耗量的影响， 其中N为正常对照组，M为模型组，纵坐标表示葡萄糖相对消耗量的百分比；
[0019] 图4为五味子乙素对KKAy小鼠空腹血糖的影响；
[0020] 图5为五味子乙素对KKAy小鼠口服糖耐量的影响，其中A为0GTT检测结果图，B 为计算血糖时间曲线下面积结果图；
[0021] 其中，显著性检验方法为t检验，*表示p〈0. 05vs模型组、**表示p〈0.0 lvs模型 组、***表示p〈0.0 Olvs模型组。
【具体实施方式】
[0022] 下面结合具体实施例和附图对本发明作进一步说明。
[0023] 实施例1
[0024] 五味子乙素对胰岛素抵抗肝细胞降糖活性研究
[0025] 小鼠胚胎肝细胞BNL CL. 2用含10%胎牛血清的低糖型DMEM培养基于37°C、5% C02细胞培养箱中孵育，隔天更换新鲜培养液。待细胞生长至80-90%时，弃去培养液，加 入3mLPBS润洗一次，加入lmL 0. 05 %胰蛋白酶-EDTA溶液消化约2min，加入三倍量培养液 终止消化，将细胞液900r/min离心5min，弃去上清液，加入一定量培养液，将细胞吹散，取 10 y L计数，将BNL CL. 2细胞接种于96孔板中，每孔2万细胞，并设无细胞空白对照孔。培 养24小时后，弃去原培养基，用磷酸盐缓冲液（PBS)洗一遍，换上无血清无酚红的低糖DMEM 培养液，分组加受试药。
[0026] 设空白对照组（加入正常细胞培养液100yL)，模型组（加入含liiM的胰岛素的 细胞培养液100 y L)，五味子乙素组（加入含1 ii M的胰岛素及5 ii M的五味子乙素的细胞培 养液100 y L)，以及二甲双胍阳性对照组（加入含1 yM的胰岛素及ImM的二甲双胍的细胞 培养液100 y L)。作用24小时后，用葡萄糖氧化酶法测定每孔培养液的葡萄糖含量，即每 孔取5 y L培养液于另一 96孔板中，加入200 y L葡萄糖氧化酶测试液，37°C孵育30min，于 492nm波长下测定每孔吸光度。在葡萄糖0-10mM浓度范围内按标准曲线法计算每孔葡萄糖 含量。每孔葡萄糖消耗量=无细胞空白孔培养液葡萄糖含量-每孔培养液葡萄糖含量，每 组设3个或3个以上复孔，相同实验重复3次。
[0027] 葡萄糖含量测定后，原培养孔弃去原培养液，每孔加入含有0. 5mg/mL MTT溶液的 培养液，于37°C、5% C02的条件下孵育4h。弃去上清液，每孔加入100 y LDMS0,37°C，振荡 lOmin，于550nm波长下测定每孔的吸光度值，用于反映细胞的增殖状况，以矫正细胞数目 差异引起的葡萄糖吸收差异。最后计算各组葡萄糖消耗量相对于模型组消耗量的百分比。
[0028] 结果见图1，五味子乙素为5 yM作用于胰岛素抵抗的BNL CL. 2细胞24小时后均 可增加葡萄糖消耗量，经t检验，与模型组比较具有统计学差异。本实验中，阳性药二甲双 胍的有效作用浓度为ImM。五味子乙素的有效作用浓度为5 yM。
[0029] 实施例2
[0030] 五味子乙素对胰岛素抵抗肝细胞降糖活性研究
[0031] 小鼠胚胎肝细胞BNL CL. 2用含10%胎牛血清的低糖型DMEM培养基于37°C、5% C02细胞培养箱中孵育，隔天更换新鲜培养液。待细胞生长至80-90%时，弃去培养液，加 入3mLPBS润洗一次，加入lmL 0. 05 %胰蛋白酶-EDTA溶液消化约2min，加入三倍量培养液 终止消化，将细胞液900r/min离心5min，弃去上清液，加入一定量培养液，将细胞吹散，取 10 y L计数，将BNL CL. 2细胞接种于96孔板中，每孔2万细胞，并设无细胞空白对照孔。培 养24小时后，弃去原培养基，用磷酸盐缓