理。
[0064]2、不加MnS水溶液的细胞作为Oh细胞数对照，分别用O μ g/ml、10 μ g/ml、30 μ g/ml、50 μ g/ml、70 μ g/ml 的 Mn 处理细胞 12h。
[0065]( 二)、细胞计数、数据处理
[0066]1、Oh、12h的MnS水溶液处理后，将10 % FBS (胎牛血清)的DMEM培养基吸出，然后用PBS(磷酸盐缓冲溶液)清洗一遍细胞，用Iml 4%的多聚甲醛固定细胞。
[0067]2、用2ml PBST(PBS溶液加上Tween-20后配成的缓冲溶液)洗去多聚甲醛，洗四次共30min。
[0068]3、用 0.5% TritonX 100 (PBS 配制)通透 5min。
[0069]4、用 5% FBS(PBST 配制)封闭 30min。
[0070]5、室温避光孵育DAPI (荧光染料的一种)，lh。
[0071]6、用 2ml PBST 洗去 DAPI，洗四次共 30min。
[0072]7、用倒置焚光显微镜拍片。
[0073]8、用ImageJ软件进行计数，处理数据后，在Excel中作图。
[0074]图10为a -MnS纳米颗粒的细胞毒性测试的数据图，从图中可以看到细胞存活率均在80%以上，说明可以用于活体成像。
[0075]实验实施例3:活体成像实验
[0076]进行活体成像，检测造影剂在老鼠体内造影及代谢过程。实验所用的老鼠体重约为20g，从斯派克实验中心购买，所用核磁共振成像仪器的型号为MesoMR60，参数设置如下:F0VRead = 100mm, FOVPhase = 100mm, TR = 300ms，TE = 13.5ms，Slice Width = 3.0mm，Slice Gap = 0.5mm，NS = 8，K空间大小192*256。待老鼠麻醉后，放入40mm探头线圈内，使用核磁共振成像软件及MSE序列采集老鼠的冠状面图像，通过MR1-Tl加权成像观察其造影代谢过程，分别在注射药品前Omin、注射药品后(12.5UmOl/kg，100yL的样品溶液)的lOmin、lh、4h成像，结果以bmp格式保存。
[0077]图1la和图1lb分别为造影剂老鼠体内肾脏和肝脏造影及代谢过程的动态图片，其中图a可清晰的看到小鼠肾脏在注射造影剂之前、注射造影剂10min、lh、4h之后的变化，造影剂在通过尾静脉注入老鼠体内，肾脏组织在造影1min后明显变亮，在60min后肾脏Tl造影效果达到最佳，造影4h后肾脏组织基本代谢完毕。图b可清晰的看到小鼠肝脏在注射造影剂之前、注射造影剂10min、lh、4h之后的变化，造影剂在通过尾静脉注入老鼠体内，肾脏组织在造影1min后明显变亮，在60min后肝脏Tl造影效果达到最佳，造影4h后肾脏组织基本代谢完毕。
[0078]从图11中可以看出老鼠通过尾静脉注射造影剂后，对于肝脏及肾脏有造影效果，同样都是在造影1min后发挥效果，在造影60min后Tl效果达到最强，代谢4h后基本代谢完毕。
[0079]图12为显影增强效果的定量图，由该图可以看到:肾脏和肝脏都是在Ih左右Tl效果达到最佳，肾脏增强效果可提高约30%，肝脏增强效果可提高约32%。
[0080]对比实施例1
[0081]按照实施例1中步骤I相同的方式合成MnS，不同之处在于采用3mL辛醇、3mL辛胺、OmL丙酮、ImL油酸作为溶剂，即溶剂不含丙酮。图13为根据本对比实施例得到的MnS沉淀的TEM照片，从照片中可以看到制备的MnS纳米颗粒粒度不均匀，且团聚严重。
[0082]对比实施例2
[0083]按照实施例1中步骤I相同的方式合成MnS，不同之处在于采用3mL辛醇、OmL辛胺、3mL丙酮、ImL油酸作为溶剂，即溶剂不含辛胺。图14为根据本对比实施例得到的MnS沉淀的TEM照片，从照片中可以看到制备的MnS颗粒粒度过大，已不再是纳米颗粒的团聚体，后期无法分散。
[0084]对比实施例3
[0085]按照实施例1中步骤I相同的方式合成MnS，不同之处在于采用3mL辛醇、3mL辛胺、3mL丙酮、OmL油酸作为溶剂，即溶剂不含油酸。图15为根据本对比实施例得到的MnS沉淀的TEM照片，从照片中可以看到制备的MnS纳米颗粒粒度不均匀，且团聚严重，这将会严重影响作为造影剂的显影效果。
[0086]根据实施例1和对比实施例1至3的TEM照片比较可以看出，根据本发明的制备方法制备的MnS纳米颗粒粒径分布均匀，且后期易于分散；同时，实验实施例1至3的数据也可以看出根据本发明的制备方法制备的均匀分散的MnS纳米颗粒水溶液可以作为磁共振成像造影剂使用，且成像效果优良。
【主权项】
1.一种均匀分散的MnS纳米颗粒的制备方法，所述制备方法包括以下步骤: 步骤1:将摩尔比为1:3的MnCl2和硫代乙酰胺加入容器中，然后顺次加入辛醇、辛胺、丙酮和油酸作为反应溶剂，搅拌混合均匀，之后移入反应釜的聚四氟乙烯内衬中，充氮气2至30分钟，排除内衬里的空气，拧紧釜盖后将反应釜放入到100-200°C的电热鼓风干燥箱中，并保持30分钟至6小时，反应完成后取出反应釜自然冷却到室温状态，将反应釜中的反应物离心，去除上清液，得到了的MnS沉淀， 步骤2:将步骤I中得到的MnS沉淀分散在环己烷中，存放于带有聚四氟乙烯盖子的安碚瓶中，摇匀静置使MnS沉淀均匀分散在环己烷中，形成棕黄色均一、透明状溶液； 步骤3:将二水合柠檬酸钠溶解在二次水中，配制成柠檬酸钠的水溶液；取步骤2中得到的MnS的环己烷溶液，加入到柠檬酸钠的水溶液中，在80至90°C下剧烈搅拌5至20分钟，将MnS由有机相转移到水相中，同时并蒸发掉环己烷，得到黄色透明的MnS纳米颗粒分散的水溶液。2.根据权利要求1中所述的均匀分散的MnS纳米颗粒的制备方法，其中在所述步骤I中，基于I摩尔的MnCl2，作为反应溶剂的辛醇、辛胺、丙酮和油酸的总体积为20L-100L，所述辛醇、辛胺、丙酮和油酸的重量比为3:2-4:1-3:0.5-1 ;在所述步骤2中，基于I摩尔的MnS沉淀，环己烷的体积为1L-20L ;在所述步骤3中，基于10重量份的二次水，加入0.1至0.15重量份的二水合柠檬酸钠，所述步骤2中得到的MnS的环己烷溶液为0.5-1重量份。3.根据权利要求1中所述的均匀分散的MnS纳米颗粒的制备方法，其中在步骤I中电热鼓风干燥箱温度为120-180°C，反应釜保持I小时至5小时；其中基于I摩尔的MnCl2，作为反应溶剂的辛醇、辛胺、丙酮和油酸的总体积为30L至70L ;作为溶剂的辛醇、辛胺、丙酮和油酸的重量比为3:3:1-3:0.5-1 ο4.根据权利要求1中所述的均匀分散的MnS纳米颗粒的制备方法，其中在步骤I中在电热鼓风干燥箱中反应釜保持I小时至3小时；其中基于I摩尔的MnCl2，作为反应溶剂的辛醇、辛胺、丙酮和油酸的总体积为35L-60L;作为溶剂的辛醇、辛胺、丙酮和油酸的重量比为 3:3:3:105.根据权利要求1中所述的均匀分散的MnS纳米颗粒的制备方法，其中在步骤I中基于I摩尔的MnCl2，作为反应溶剂的辛醇、辛胺、丙酮和油酸的总体积为50L。6.根据权利要求1中所述的均匀分散的MnS纳米颗粒的制备方法，其中基于I摩尔的MnS沉淀，所述环己烷的体积为7L-12L，最优选为10L。7.一种根据权利要求1至6中任意一项所述的方法制备的均匀分散的MnS纳米颗粒。8.根据权利要求7所述的由根据权利要求1至6中任意一项所述的方法制备的均匀分散的MnS纳米颗粒作为磁共振造影剂的用途。
【专利摘要】本发明提供了一种水中均匀分散的MnS纳米颗粒的制备方法，该方法包括1、在一定溶剂中将MnCl2和硫代乙酰胺在反应釜中反应生成MnS沉淀；2、将得到的MnS沉淀分散在环己烷中；3、向MnS的环己烷分散液加入柠檬酸钠水溶液，从而将MnS纳米颗粒转移至水相中，形成均一稳定的胶体溶液。根据本发明制备的MnS纳米颗粒分散均匀，可以作为磁共振成像造影剂使用。
【IPC分类】C01G45/00, B82Y30/00, A61K49/18
【公开号】CN105174314
【申请号】
【发明人】田洋, 孟静, 赵一哲
【申请人】首都师范大学
【公开日】2015年12月23日
【申请日】2015年9月2日