一种制备磷脂酰丝氨酸的方法
【技术领域】：
[0001] 本发明涉及海洋生物技术领域，尤其涉及一种制备磷脂酰丝氨酸的方法。
【背景技术】：
[0002] 磷脂酰丝氨酸（PS)是一种唯一能够调控细胞膜关键蛋白功能的磷脂，对许多细 胞代谢过程有重要的调节作用，其主要功能是可提高脑细胞活力，对治疗脑萎缩、预防老年 痴呆、改善老年人的大脑功能有很好的疗效，同时对修复大脑损伤、治疗儿童多动症具有非 常显著的作用；另外，PS可以促进脑疲劳的恢复、平衡情绪、缓解抑郁。
[0003] 磷脂酰丝氨酸存在于所有的动物、高等植物以及微生物的生物膜中，是细胞膜磷 脂的重要组分之一。人类神经细胞膜中含有大量的磷脂酰丝氨酸，其甘油骨架上含有丰富 的DHA (二十二碳六烯酸），对神经细胞的维持、修复及功能具有重要作用。磷脂酰丝氨酸于 2007年通过了美国FDA认证，也是我国卫生部2010年公布的新资源食品之一。
[0004] 通常认为，与DHA以化学键结合的磷脂酰丝氨酸具有更好的改善阿尔茨海默病的 生理功能，其通常是以来源于海洋动物的磷脂为原料。
[0005] 磷脂酰丝氨酸的制备方法主要有提取法和酶转化法，其中，提取法主要是从植物 细胞、动物卵磷脂中提取PS，植物中的PS含量较少，所以提取法以动物的卵磷脂中提取为 主，从动物的卵磷脂中提取PS主要是从动物的大脑及内脏中提取，目前，国外大部分以牛、 羊、兔、马、驴等家禽的动物脑为原料来提取PS。近年来，由于疯牛病等动物疾病的原因，利 用动物卵磷脂提取PS的方法的安全性受到人们的质疑。
[0006] 酶转化法主要是以天然的卵磷脂为基质，加入丝氨酸，在磷脂酶D的作用下，生成 磷脂酰丝氨酸。现有技术中，磷脂酰丝氨酸的酶促合成多采用"有机相-缓冲液"的液液双 相反应体系，通常使用氯仿、苯、丁酸乙酯、乙酸乙酯或乙醚等有机溶剂能够获得较高的反 应转化率。但由于上述有机溶剂沸点很低，易燃易爆，有毒有害，容易造成环境污染，不适于 工业化生产。
【发明内容】
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[0007] 本发明为了弥补现有技术的不足，提供了一种制备磷脂酰丝氨酸的方法，先以磷 脂酶D催化海洋动物磷脂和L-丝氨酸的碱基交换反应，再经离心和分子蒸馏，分离纯化后 制得磷脂酰丝氨酸；利用中长链脂肪酸乙酯与缓冲液形成的液液双相反应体系，用高沸点 且食用安全的中长链脂肪酸乙酯替代乙醚和乙酸乙酯等沸点低、易燃易爆且有毒害的有机 溶剂，保证了反应效率的同时提高了生产安全性，避免造成环境污染，适于工业化生产，有 效解决了现有技术中存在的问题。
[0008] 本发明为解决上述技术问题所采用的技术方案是：
[0009] -种制备磷脂酰丝氨酸的方法，包括下列步骤：
[0010] (1)从海洋动物中提取得磷脂原料；
[0011] (2)将步骤⑴中得到的磷脂原料溶解于中长链脂肪酸乙酯，得到溶液A ;
[0012] (3)将磷脂酶D和L-丝氨酸溶解于PH值为4. 5~6. 0的醋酸缓冲液中，得到溶液 B ；
[0013] (4)将步骤⑵中得到的溶液A加入步骤⑶中得到的溶液B中，得到混合溶液 C，把得到的混合溶液C加热、搅拌反应，得到反应后的溶液D ;
[0014] (5)将步骤（4)中得到的反应后的溶液D采用离心方法去掉水相得到油相；
[0015] (6)将步骤（5)中得到的油相采用分子蒸馏方法脱除中长链脂肪酸乙酯，收集分 子蒸馏重相，即制得磷脂酰丝氨酸。
[0016] 步骤⑴所述的磷脂原料中总磷脂含量为40%~80%;步骤⑵所述的中长链脂 肪酸乙酯为辛酸乙酯、鱼油乙酯、油酸乙酯或DHA乙酯中的一种或两种以上的混合物；步骤 ⑶所述磷脂酶D的活力为80~100U/mg。
[0017] 所述的磷脂原料与中长链脂肪酸乙酯的重量比为1:0. 5~10,所述磷脂酶D的 加入量为磷脂原料重量的1 %~10%，所述L-丝氨酸的加入量为磷脂原料重量的10%~ 300%，所述缓冲液的加入量为磷脂原料重量的200 %~2000%。
[0018] 所述步骤（4)中加热、搅拌反应的反应温度为20~60°C，反应时间为4~24h ;所 述步骤（6)中分子蒸馏的蒸馏温度为60~120°C，蒸馏压力为0· 1~20Pa。
[0019] -种由上述任一所述方法制备而成的磷脂酰丝氨酸。
[0020] -种制备磷脂酰丝氨酸的方法，包括下列步骤：
[0021] (1)从海洋动物中提取得磷脂原料；
[0022] (2)将步骤⑴中得到的磷脂原料溶解于中长链脂肪酸乙酯，得到溶液A ;
[0023] (3)将磷脂酶D、L-丝氨酸和氯化钙溶解于PH值为4. 5~6. 0的醋酸缓冲液中， 得到溶液V ;
[0024] (4)将步骤⑵中得到的溶液A加入步骤⑶中得到的溶液B'中，得到混合溶液 C'，把得到的混合溶液C'加热、搅拌反应，得到反应后的溶液D';
[0025] (5)将步骤（4)中得到的反应后的溶液D'采用离心方法去掉水相得到油相；
[0026] (6)将步骤（5)中得到的油相采用分子蒸馏方法脱除中长链脂肪酸乙酯，收集分 子蒸馏重相，即制得磷脂酰丝氨酸。
[0027] 步骤⑴所述的磷脂原料中总磷脂含量为40%~80%;步骤⑵所述的中长链脂 肪酸乙酯为辛酸乙酯、鱼油乙酯、油酸乙酯或DHA乙酯中的一种或两种以上的混合物；步骤 ⑶所述磷脂酶D的活力为80~100U/mg。
[0028] 所述的磷脂原料与中长链脂肪酸乙酯的重量比为1:0. 5~10,所述磷脂酶D的 加入量为磷脂原料重量的1 %~10%，所述L-丝氨酸的加入量为磷脂原料重量的10%~ 300%，所述缓冲液的加入量为磷脂原料重量的200 %~2000%。
[0029] 所述步骤（4)中加热、搅拌反应的反应温度为20~60°C，反应时间为4~24h ;所 述步骤（6)中分子蒸馏的蒸馏温度为60~120°C，蒸馏压力为0· 1~20Pa。
[0030] -种由上述任一所述方法制备而成的磷脂酰丝氨酸。
[0031] 本发明采用上述方案，先以磷脂酶D催化海洋动物磷脂和L-丝氨酸的碱基交换反 应，再经离心和分子蒸馏，分离纯化后制得磷脂酰丝氨酸；利用中长链脂肪酸乙酯与缓冲液 形成的液液双相反应体系，用高沸点且食用安全的中长链脂肪酸乙酯替代乙醚和乙酸乙酯 等沸点低、易燃易爆且有毒害的有机溶剂，保证了反应效率的同时提高了生产安全性，避免 造成环境污染，适于工业化生产。
【具体实施方式】：
[0032] 下面结合实施例对本发明作进一步说明，但本发明并不局限于此，实施例中的制 备方法均为常规制备方法，不再详述。
[0033] -种制备磷脂酰丝氨酸的方法，包括下列步骤：
[0034] (1)从海洋动物中提取得磷脂原料；
[0035] (2)将步骤⑴中得到的磷脂原料溶解于中长链脂肪酸乙酯，得到溶液A ;
[0036] (3)将磷脂酶D和L-丝氨酸溶解于PH值为4. 5~6. 0的醋酸缓冲液中，得到溶液 B ；
[0037] (4)将步骤⑵中得到的溶液A加入步骤（3)中得到的溶液B中，得到混合溶液 C，把得到的混合溶液C加热、搅拌反应，得到反应后的溶液D ;
[0038] (5)将步骤（4)中得到的反应后的溶液D采用离心方法去掉水相得到油相；
[0039] (6)将步骤（5)中得到的油相采用分子蒸馏方法脱除中长链脂肪酸乙酯，收集分 子蒸馏重相，即制得磷脂酰丝氨酸。
[0040] 步骤⑴所述的磷脂原料中总磷脂含量为40%~80%;步骤⑵所述的中长链脂 肪酸乙酯为辛酸乙酯、鱼油乙酯、油酸乙酯或DHA乙酯中的一种或两种以上的混合物；步骤 ⑶所述磷脂酶D的活力为