小孢根霉c97102734及应用
【技术领域】
[00011本发明属于生物技术领域，尤其涉及小孢根霉C97102734及应用，此外还涉及利用 小孢根霉C97102734制备石斛液化液的方法。
【背景技术】
[0002] 脾胃虚弱主要表现为四肢乏力、全身软瘫无力、反复腹泻、食欲不振、消古不化、面 色萎黄等症状，肠胃不好影响全身机能，也会影响心情，影响精力现代人工作节奏加快，交 通工具的普及，精神压力大、经常吃垃圾食品饮料，尤其学生和上班族脾胃虚弱者甚多，平 常需要有防治脾胃虚弱的饮料食品进行食疗。
[0003] 铁皮石斛、紫皮石斛、鼓槌石斛为名贵的药食两用中药，其性平，味甘、无毒、稍有 清香气，富含粘液质、多糖、生物碱，石斛酚、石斛胺，总氨基酸，还有特殊的菲类、联苄类抗 癌成分，石斛主要的成分为石斛多糖、石斛碱。其中石斛多糖含量高达22%~60%，石斛多 糖属于活性多糖的一种，具有抗炎、抗病毒、修复自身提高免疫力、抗肿瘤、抗氧化的功效， 具有"延年益寿、健脾开胃、增强体质、清热解毒、滋养阴精、润养肌肤、调节血糖、抗癌"等功 效。
[0004] 石斛多糖是石斛的主要有效成份，目前为止，用石斛生产的保健酒分为浸泡酒和 蒸馏酒，如发明专利CN101451098A、CN104352050A、CN104127700A、CN103666959A、 CN103849542A为浸泡酒代表，黏糊状的石斛多糖不可能被酒浸泡并完全溶于酒中，即使是 采用水浸泡石斛多糖也只能将石斛中含量极少的生物碱和色素溶于酒中，难以将石斛防病 养生的功效发挥出来;如发明专利CN103666960A为蒸馏酒代表，将石斛加入米饭中发酵蒸 酒，但是石斛多糖等有效成分也并不能完全溶于酒中。
[0005] 科学界研究发现硒具有预防癌症作用，是人体微量元素的"防癌之王"，补硒可使 肝癌发病率下降35%，使有肝癌家史者发病率下降50%。体内硒和维生素 E协同，能够保护 细胞膜，防止不饱和脂肪酸的氧化。微量硒具有防癌作用及保护肝脏的作用。有机硒能清除 体内自由基，排除体内毒素、抗氧化、能有效的抑制过氧化脂质的产生，防止血凝块，清除胆 固醇，增强人体免疫功能。硒是构成谷胱甘肽过氧化物酶的活性成分，它能防止胰岛辟田胞 氧化破坏，使其功能正常，促进糖份代谢、降低血糖和尿糖，改善糖尿病患者的症状。视网膜 由于接触计算机辐射等较多，易受损伤，硒可保护视网膜，增强玻璃体的光洁度，提高视力， 有防止白内障的作用。硒是维持心脏正常功能的重要元素，对心脏肌体有保护和修复的作 用。人体血硒水平的降低，会导致体内清除自由基的功能减退，造成有害物质沉积增多，血 压升高、血管壁变厚、血管弹性降低、血流速度变慢，送氧功能下降，从而诱发心脑血管疾病 的发病率升高，然而科学补硒对预防心脑血管疾病、高血压、动脉硬化等都有较好的作用缺 硒是克山病、大骨节病、两种地方性疾病的主要病因，补硒能防止骨髓端病变，促进修复，而 在蛋白质合成中促进二硫键对抗金属元素解毒。对这两种地方性疾病和关节炎患者都有很 好的预防和治疗作用硒与金属的结合力很强，能抵抗镉对肾、生殖腺和中枢神经的毒害。硒 与体内的汞、铅、锡、铊等重金属结合，形成金属硒蛋白复合而解毒、排毒。
[0006] 因此，如何将不易溶于酒的石斛多糖转化成易溶于酒的石斛低聚糖，将其用于制 酒工业中，并在酒中引入有机硒，生产出同时具有石斛和硒双重保健功能的酒具有很大的 意义。
【发明内容】
[0007] 本发明的第一个目的是针对现有技术存在的缺陷，提供一种小孢根霉(Rhizopus microsporus)C97102734,采用此种菌株对石斛进行发酵，能够顺利地将石斛多糖转化成为 石斛低聚糖。该菌株于2015年11月26日保藏于中国典型培养物保藏中心(简称CCTCC，地址： 中国.武汉.武汉大学，邮编430072)，保藏编号CCTCC NO.M2015706。
[0008] 该菌株是从成都水井坊分离得到的，其分离方法为:孢子繁殖法。
[0009] 所述菌株的形态特征为:菌落长满培养皿，深灰褐色，薄棉絮状匍匐菌丝及假根褐 色;rRNA基因 ITS1-5.8ITS2区序列测定结果详见序列表，菌株在电镜下的照片详见图2,图 3〇
[0010]本发明的第二个目的是提供所述小孢根霉C97102734在石斛发酵中的应用，该菌 株能够将石斛多糖转化成为石斛低聚糖。
[0011] 本发明的第三个目的是提供一种石斛液化液的制备方法，所述制备方法为:将石 斛茎或花切碎，加入水打汁，石斛汁液经灭菌后，采用如下①-③方式中的任意一种对石斛 汁液进行液化：
[0012] ①单独接入小孢根霉C97102734发酵；
[0013]②单独接入益生菌酶酶解；
[0014]③先接入益生菌酶酶解，后接入小孢根霉C97102734发酵；
[0015]过滤液化后汁液，取滤液即得。
[0016] 为了方便后续的发酵和酶解，本发明优选在制备石斛汁液时，水的加入量为石斛 重量的5~8倍。
[0017] 此外，打汁后，汁液不经过滤处理，直接进行灭菌，所述灭菌可采用本领域常规的 技术手段，本发明优选采用伽马射线辐照灭菌、低温等离子体(NTP)杀菌中的一种，此种灭 菌手段不仅大幅度缩短了灭菌时间，同时大幅度减少了能源消耗，显著降低了企业成本，而 且克服了常规灭菌技术存在的灭菌时间长，活性成分被破坏变性变形，产品色香味形不理 想等缺陷，保证了活性成分不被破坏不变性不变形。
[0018] 采用小孢根霉C97102734对汁液进行发酵，能够将石斛中难溶于酒精的石斛多糖 液化成能够溶于酒精的石斛低聚糖，且得到的液化液气味清香，品质佳。
[0019] 采用方式①对汁液进行发酵时，益生菌的接种量优选为40亿~80亿个/kg石斛。为 了得到品质最佳的发酵液，本发明优选发酵在25~30 °C，90~100 %溶氧，搅拌速度120~ 180转/min条件下进行;进一步优选在27°C，100%溶氧，搅拌速度150转/min条件下进行。
[0020] 接入的益生菌酶可采用本领域常用的酶，本发明优选为益生中性β-甘露聚糖酶， 采用益生菌酶对汁液进行酶解，同样能够将石斛中难溶于酒精的石斛多糖液化成能够溶于 酒精的石斛低聚糖。
[0021] 采用方式②对汁液进行酶解时，益生中性β-甘露聚糖酶的用量为200000U~ 600000U/kg石斛，为了得到品质最佳的酶解液，优选所述酶解在50°C~60°C，ρΗ6~7.5条件 下进行;进一步优选在53 °C，pH6.8条件下进行。
[0022]单独采用益生菌进行发酵，得到的发酵液品质优异，但其生产成本较高;单独采用 益生菌酶进行酶解，得到的发酵液气味较差，不利于后期对酒进行勾兑。为了节约成本，且 生产出品质优异的液化液，本发明优选采用先酶解后发酵的方式制备液化液，其具体操作 为:按照lkg石斛加入100000U~300000U益生菌酶的比例，向灭菌处理后的汁液中加入益生 中性β-甘露聚糖酶，于50°C~60°C，pH6~7.5条件下酶解311~511 ;然后将酶解液降温至室 温，按照lkg石斛接种10亿~30亿个小孢根霉C97102734的比例，向其内接种小孢根霉 C97102734,并在25~30°C，90~100%溶氧，搅拌速度120~180转/min条件下发酵培养直至 发酵完全。采用此种方式进行生产，不仅节约了企业成本，有利于工业化生产，且最终得到 的产品气味清香。
[0023]本发明所述的石斛可采用本领域常用的各