一种用高效液相色谱法测定醋酸赖氨酸中有关物质的方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及醋酸赖氨酸中有关物质的测定技术领域，特别涉及一种用高效液相色 谱法测定醋酸赖氨酸中有关物质的方法。
【背景技术】
[0002] 醋酸赖氨酸是人体必需氨基酸之一，具有补充蛋白质的营养效果，在医药上可用 于配制氨基酸注射液和口服制剂，也用于配制氨基酸注射液和口服制剂;利尿剂的辅助药 物，治疗因血中氯化物减少而引起的铅中毒现象;可与酸性药物(如水杨酸等)生成盐来减 轻不良反应。
[0003] 醋酸赖氨酸属于氨基酸类药，其汉语拼音:Cusuan Lai ansuan，英文名：Lysine Acetate，性状:本品为白色结晶或结晶性粉末;几乎无臭。本品在水中易溶，在乙醇中几乎 不溶。化学成分:其为L-2,6-二氨基己酸醋酸盐。按干燥品计算，含C 6H14N202 · C2H402不得少 于 98.5%。
[0004] 有关物质是指药品除主成份外的杂志，可能系合成过程中带入的引起原料、中间 体、副反应产物、试剂、分解物、聚合体、异构体，也可能是制剂生产过程中或在贮藏、运输、 使用过程中的讲解产物等。
[0005] 醋酸赖氨酸中的杂质主要为其他氨基酸类，从而影响醋酸赖氨酸的质量和纯度， 2010版中国药典修订增订内容，其他氨基酸的检测方法用薄层色谱法，并用茚三酮显色，该 方法的缺点不能对所有相关杂质的进行定量分析，大分子氨基酸分离效果不理想，不能进 行全面的杂质分析。
[0006] 由于氨基酸自身结构特殊性，醋酸赖氨酸无紫外吸收及荧光发射特征。因此采用 一般的分析方法很难对其进行完全的检测，需要对其进行衍生，生成具有紫外可见吸收或 者荧光响应的衍生物才能进行分析测定。
[0007] 高效液相色谱法与各种柱前衍生技术相结合的方法有其特有的优越性。邻苯二甲 醛(0ΡΑ)是一种常见的衍生试剂，在3-巯基丙酸存在下，碱性条件与一级氨基酸反应生成硫 代-2-烷基异吲哚，有较强的紫外吸收，衍生时间短、方法简便、可在线完成衍生操作。因此， 对于醋酸赖氨酸中有关物质的分析，可以采用0ΡΑ柱前衍生高效液相色谱方法。
【发明内容】
[0008] 本发明所要解决的技术问题在于针对现有技术所存在的不足而提供一种用高效 液相色谱法测定醋酸赖氨酸中有关物质的方法，对醋酸赖氨酸生产工艺和质量控制具有指 导意义。
[0009] 本发明所要解决的技术问题可以通过以下技术方案来实现：
[0010] -种用高效液相色谱法测定醋酸赖氨酸中有关物质的方法，包括如下步骤：
[0011] (1)色谱系统建立步骤
[0012] 依据下述条件建立色谱系统：色谱柱:C18100*4.6mm，柱温:40 °C，检测器：紫外检 测器，336nm，流速：1 .Oml/min，进样体积：ΙΟμΙ，衍生化试剂：邻苯二甲醛(OPA)，流动相A: pH7.4~7.8磷酸二氢钠缓冲溶液，流动相B:甲醇-水，其中甲醇与水的体积比为90:10;
[0013] (2)供试品溶液制备步骤
[0014]精密称取醋酸赖氨酸50mg至100ml量瓶中，加纯化水适量超声使溶解并定容至刻 度，滤过，作为供试品溶液；
[0015] (3)供试品自身对照溶液制备步骤
[0016] 从步骤(2)制备的供试品溶液中精密量取lmL到100mL容量瓶中，加纯化水稀释至 刻度，摇匀作为供试品自身对照溶液；
[0017] (4)检测分析步骤：
[0018] 精密量取ΙΟμΙ的稀释剂、对照溶液和供试品溶液分别注入液相色谱仪，采用柱前 衍生法，记录色谱图，供试品溶液色谱图中如出现杂质色谱峰，记录各杂质的峰面积，用主 成分自身对照法计算杂质，具体计算公式如下：
[0020] 注:Aspi =样品溶液中杂质峰面积;Astd = 1.0%自身对照溶液主峰峰面积。
[0021 ]在本发明的一个优选实施例中，所述PH7.4~7.8磷酸二氢钠缓冲溶液的制备方法 是:取磷酸二氢钠7.15g加水1000mL溶解后，用NaOH溶液调节pH值至7.4~7.8。
[0022] 在本发明的一个优选实施例中，所述流动相A和流动相B的洗脱梯度如表1所示：
[0023] 表 1
[0024]
[0025] 。
[0026] 由于采用了如上的技术方案，本发明用高效液相色谱法测定醋酸赖氨酸中有关物 质，能使醋酸赖氨酸与杂质得到有效分离，并具有精密度高，重复性好，可操作性强等优点， 对醋酸赖氨酸生产工艺和质量控制具有指导意义。
【具体实施方式】
[0027] -种用高效液相色谱法测定醋酸赖氨酸中有关物质的方法，包括如下步骤：
[0028] (1)色谱系统建立步骤
[0029]依据下述条件建立色谱系统：色谱柱:C18100*4.6mm，柱温:40 °C，检测器：紫外检 测器，336nm，流速：1 .Oml/min，进样体积：ΙΟμΙ，衍生化试剂：邻苯二甲醛(OPA)，流动相A: pH7.4~7.8磷酸二氢钠缓冲溶液，流动相B:甲醇-水，其中甲醇与水的体积比为90:10;
[0030] pH7.4~7.8磷酸二氢钠缓冲溶液的制备方法是:取磷酸二氢钠7.158加水100〇11^ 溶解后，用NaOH溶液调节pH值至7.4~7.8。
[0031] 流动相A和流动相B的洗脱梯度如表1所示：
[0032] 表 1
[0033]
[0034] 。
[0035] (2)供试品溶液制备步骤
[0036]精密称取某一批次醋酸赖氨酸50mg至100ml量瓶中，加纯化水适量超声使溶解并 定容至刻度，滤过，作为供试品溶液；
[0037] (3)供试品自身对照溶液制备步骤
[0038] 从步骤(2)制备的供试品溶液中精密量取lmL到100mL容量瓶中，加纯化水稀释至 刻度，摇匀作为供试品自身对照溶液；
[0039] (4)检测分析步骤：
[0040] 精密量取10μ1的稀释剂、对照溶液和供试品溶液分别注入液相色谱仪，采用柱前 衍生法，记录色谱图，供试品溶液色谱图中如出现杂质色谱峰，记录各杂质的峰面积，用主 成分自身对照法计算杂质，具体计算公式如下：
[0042] 注:Aspi =样品溶液中杂质峰面积;Astd = 1.0%自身对照溶液主峰峰面积。
[0043]某一批次醋酸赖氨酸中杂质检测结果见表2 [0044]表2:醋酸赖氨酸样品杂质检测结果
[0045]
[0046] 从以上检测醋酸赖氨酸中有关物质检测结果可以看出，根据本发明提供的方法， 能使醋酸赖氨酸与杂质得到有效分离，并具有精密度高，重复性好，可操作性强等优点。
【主权项】
1. 一种用高效液相色谱法测定醋酸赖氨酸中有关物质的方法，其特征在于，包括如下 步骤： (1) 色谱系统建立步骤 依据下述条件建立色谱系统:色谱柱:C18100*4.6mm，柱温:40°C，检测器:紫外检测器， 336nm，流速：1 .Oml/min，进样体积：ΙΟμΙ，衍生化试剂:邻苯二甲醛(OPA)，流动相A:pH7.4~ 7.8磷酸二氢钠缓冲溶液，流动相B:甲醇-水，其中甲醇与水的体积比为90:10; (2) 供试品溶液制备步骤 精密称取醋酸赖氨酸50mg至100ml量瓶中，加纯化水适量超声使溶解并定容至刻度，滤 过，作为供试品溶液； (3) 供试品自身对照溶液制备步骤 从步骤(2)制备的供试品溶液中精密量取lmL到1 OOmL容量瓶中，加纯化水稀释至刻度， 摇匀作为供试品自身对照溶液； (4) 检测分析步骤： 精密量取1〇μ1的稀释剂、对照溶液和供试品溶液分别注入液相色谱仪，采用柱前衍生 法，记录色谱图，供试品溶液色谱图中如出现杂质色谱峰，记录各杂质的峰面积，用主成分 自身对照法计算杂质，具体计算公式如下：注:Aspi =样品溶液中杂质峰面积;Astd= 1.0%自身对照溶液主峰峰面积。2. 如权利要求1所述的一种用高效液相色谱法测定醋酸赖氨酸中有关物质的方法，其 特征在于，所述PH7.4~7.8磷酸二氢钠缓冲溶液的制备方法是：取磷酸二氢钠 7.15g加水 1000mL溶解后，用NaOH溶液调节pH值至7.4~7.8。3. 如权利要求1所述的一种用高效液相色谱法测定醋酸赖氨酸中有关物质的方法，其 特征在于，所述流动相A和流动相B的洗脱梯度如表1所示： 表1
【专利摘要】本发明涉及一种用高效液相色谱法测定醋酸赖氨酸有关物质的方法,该方法以十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱,以磷酸二氢钠缓冲溶液与甲醇-水为流动相，可以测定醋酸赖氨酸的有关物质含量,从而有效控制其质量。
【IPC分类】G01N30/02
【公开号】CN105606724
【申请号】CN201510975410
【发明人】叶湘武, 张兆利, 杨帅兵, 付爱玲, 罗斌
【申请人】上海景峰制药有限公司
【公开日】2016年5月25日
【申请日】2015年12月22日