川乌饮片中含量的一测多评方法
【技术领域】：
[0001]本发明涉及化学检验领域和药物分析技术领域，特别是川乌饮片中含量的一测多 评方法。
【背景技术】：
[0002] 川乌饮片中含有三种主要成份:新乌头碱、次乌头碱和新乌头碱。目前的检测方法 需要新乌头碱、次乌头碱和新乌头碱这三种对照品，由于新乌头碱、次乌头碱和新乌头碱这 三种对照品均为剧毒对照品，国家严格管控，单价高，且市场常出现缺货情况，给川乌饮片 检测带来困惑。
【发明内容】
：
[0003] 本发明所要解决的技术问题在于针对现有川乌饮片的含量测定方法所存在的问 题而提供一种川乌饮片中含量的一测多评方法，该方法的特点是采用高效液相色谱法，根 据新乌头碱、次乌头碱、乌头碱三者对照品之间的相关性，只通过测定次乌头碱对照品，来 评价检测川乌饮片中新乌头碱、次乌头碱、乌头碱的含量，以降低对照品使用成本。
[0004] 本发明所要解决的技术问题可以通过以下技术方案来实现：
[0005] -种川乌饮片中含量的一测多评方法，包括如下步骤：
[0006] (1)色谱条件建立与系统适应性步骤：
[0007] 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以质量比为25:15生物乙腈一四氢呋喃溶液 为流动相A，以0. lmol/L醋酸铵溶液为流动相B，按表1中的规定进行梯度洗脱;检测波长为 235nm，理论板数按新乌头碱峰计算应不低于2000;
[0008] 表 1
[0011] (2)对照品溶液制备步骤
[0012] 精密称取次乌头碱对照品15mg、置100ml量瓶中，加质量比为1:1的异丙醇-三氯甲 烷混合液至刻度，摇匀，制成每lml含次乌头碱0.15mg的对照品溶液；
[0013] (3)供试品溶液制备步骤
[0014] 将川乌饮片粉碎后过三号筛制成取川乌饮片粉末，精密称定川乌饮片粉末2g，置 具塞锥形瓶中，加氨试液3ml，加入质量比为1:1的异丙醇-三氯甲烷混合液50ml，称定重量， 超声处理30分钟后放冷，再称定重量，用质量比为1:1的异丙醇-三氯甲烷混合液补足减失 的重量，摇匀，滤过;精密量取续滤液25ml，40°C以下减压回收溶剂至干，残渣精密加入质量 比为1:1的异丙醇-三氯甲烷混合液3ml溶解，密塞，摇匀，用0.45μπι滤膜滤过，得供试品溶 液；
[0015] ⑷测定步骤
[0016]分别精密吸取步骤(2)制备的对照品溶液与步骤(3)制备的供试品溶液各10μ1注 入液相色谱仪，测定；以次乌头碱对照品为参照，以其相应的峰为S峰，计算新乌头碱、乌头 碱的相对保留时间，其相对保留时间应在规定值的±5%范围之内；以次乌头碱的峰面积为 对照，分别乘以表2中的校正因子，计算新乌头碱、次乌头碱、乌头碱的含量，具体计算公式 如下
[0021] 川乌饮片相对保留时间及校正因子见如下表2
[0022] 表 2
[0024] 。
[0025] 在本发明的一个优选实施例中，所述步骤（3)中的超声处理的条件为超声功率 300W，频率40kHz，水温25 °C以下。
[0026] 本发明是在同一色谱条件下实现了一测多评的定量分析，即节约了成本、时间、物 力，实现了方法操作简便、快捷，检验仪器简单常见，又提高了安全性，降低了安全隐患，并 且结果准确、可靠、稳定性良好。
[0027] 本发明根据"一测多评"原则对原药典方法进行研究并改进。新方法有效的控制了 物料质量，减少了管理成本和对人员危害，降低检验成本。
【附图说明】
[0028] 图1为次乌头碱对照品溶液色谱图。
[0029] 图2为原色谱条件对照品溶液色谱图。
[0030] 图3-1至图3-3为供试品溶液色谱图。
【具体实施方式】
[0031] 本发明川乌饮片含量测定方法的实施例，对其中的次乌头碱对照品含量进行检 测，通过新乌头碱、次乌头碱、乌头碱三者之间的相关系数，得出含量结果，并将结果与原方 法进行比对：
[0032] 实施例1
[0033]按照《中国药典》2010版一部附录VD高效液相色谱法测定。
[0034]实验方法与过程：
[0035] 1.仪器与试剂
[0036]色谱仪:1100型高效液相色谱仪(厂家:安捷伦）
[0037]分析天平:XS105型（厂家:梅特勒）
[0038] 2.色谱条件与系统适应性
[0039] 色谱条件建立与系统适应性步骤：
[0040] 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈一四氢呋喃（25:15)为流动相A，以 0. lmol/L醋酸铵溶液(每1000ml加冰醋酸0.5ml)为流动相B，按下表3中的规定进行梯度洗 脱;检测波长为235nm，理论板数按新乌头碱峰计算应不低于2000。
[0041] 表 3
[0043] 3.对照品溶液制备
[0044] 精密称取次乌头碱对照品15mg、置100ml量瓶中，加异丙醇-三氯甲烷（1:1)混合液 至刻度，摇匀，制成每lml含次乌头碱0.18mg的对照品溶液。
[0045] 4.供试品溶液制备：
[0046]取本品粉末(过三号筛）约2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加氨试液3ml，精密加入 异丙醇-乙酸乙酯（1:1)混合溶液50ml，称定重量，超声处理（功率300W，频率40kHz ;水温25 °C以下）30分钟，放冷，再称定重量，用异丙醇-乙酸乙酯（1:1)混合溶液补足减失的重量，摇 匀，滤过。精密量取续滤液25ml，40°C以下减压回收溶剂至干，残渣精密加入异丙醇-三氯甲 烷(1:1)混合液3ml溶解，密塞，摇匀，用滤膜(0.45μπι)滤过，得供试品溶液。
[0047] 5.测定法：
[0048]分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μ1，注入液相色谱仪，测定，所得到。 以次乌头碱对照品为参照，以其相应的峰为S峰，计算新乌头碱、乌头碱的相对保留时间，其 相对保留时间应在规定值的±5%范围之内。
[0049]以次乌头碱的峰面积为对照，分别乘以表4中的校正因子，计算新乌头碱、次乌头 碱、乌头碱的含量，结果见表5,具体计算公式如下
[0058]结果表明，根据川乌饮片相对保留时间及校正因子计算出川乌饮片含量结果与原 药典方法相对平均偏差在±5%范围内，满足"一测多评"相关性要求，证明用新方法测定含 量数据准确、可靠。
[0059]当然，上述说明并非对发明的限制，本发明也并不限于上述举例，本技术领域的普 通技术人员，在本发明的实质范围内作出的变化、改型、添加或替换，也应属于本发明的保 护范围。
【主权项】
1. 一种川乌饮片中含量的一测多评方法，其特征在于，包括如下步骤： (1)色谱条件建立与系统适应性步骤 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以质量比为25:15生物乙腈一四氢呋喃溶液为流 动相A，以O.lmol/L醋酸铵溶液为流动相B，按表1中的规定进行梯度洗脱；检测波长为 235nm，理论板数按新乌头碱峰计算应不低于2000; 丰1精密称取次乌头碱对照品15mg、置100ml量瓶中，加质量比为1:1的异丙醇-三氯甲烷混 合液至刻度，摇匀，制成每lml含次乌头碱0.15mg的对照品溶液； (3) 供试品溶液制备步骤 将川乌饮片粉碎后过三号筛制成取川乌饮片粉末，精密称定川乌饮片粉末2g，置具塞 锥形瓶中，加氨试液3ml，加入质量比为1:1的异丙醇-三氯甲烷混合液50ml，称定重量，超声 处理30分钟后放冷，再称定重量，用质量比为1:1的异丙醇-三氯甲烷混合液补足减失的重 量，摇匀，滤过;精密量取续滤液25ml，40°C以下减压回收溶剂至干，残渣精密加入质量比为 1:1的异丙醇-三氯甲烷混合液3ml溶解，密塞，摇匀，用0.45μπι滤膜滤过，得供试品溶液； (4) 测定步骤 分别精密吸取步骤(2)制备的对照品溶液与步骤(3)制备的供试品溶液各10μ1注入液 相色谱仪，测定；以次乌头碱对照品为参照，以其相应的峰为S峰，计算新乌头碱、乌头碱的 相对保留时间，其相对保留时间应在规定值的±5%范围之内；以次乌头碱的峰面积为对 照，分别乘以表2中的校正因子，计算新乌头碱、次乌头碱、乌头碱的含量，具体计算公式如 下 |片巩帕-\ ' - ^ r 川乌饮片相对保留时间及校正因子见如下表2 表2ο2.如权利要求1所述的一种川乌饮片中含量的一测多评方法，其特征在于，所述步骤 (3)中的超声处理的条件为超声功率300W，频率40kHz，水温25°C以下。
【专利摘要】本发明公开的一种川乌饮片中含量的一测多评方法，其包括如下步骤：(1)色谱条件建立与系统适应性步骤；(2)对照品溶液制备步骤；(3)供试品溶液制备步骤；(4)测定步骤。本发明是在同一色谱条件下实现了一测多评的定量分析，即节约了成本、时间、物力，实现了方法操作简便、快捷，检验仪器简单常见，又提高了安全性，降低了安全隐患，并且结果准确、可靠、稳定性良好。
【IPC分类】G01N30/02
【公开号】CN105606725
【申请号】CN201510979758
【发明人】叶湘武, 蔡京, 薛亮, 钱正祥
【申请人】上海景峰制药有限公司
【公开日】2016年5月25日
【申请日】2015年12月22日