用于治疗纤维化疾病的方法
【技术领域】
[0001] 本发明一般性设及用于治疗纤维化疾病的方法，更具体地设及用于治疗纤维化疾 病的抗CSFl-R抗体。
【背景技术】
[0002] 集落刺激因子I(CSF-I)(也被称为巨隧细胞集落刺激因子(M-CSF))是由各种细胞 (包括内皮细胞和成纤维细胞)产生的细胞因子。CSF-I包含两个"单体"多肤，运两个"单体" 多肤形成生物学活性的二聚体CSF-I蛋白。由于RNA选择性剪接、蛋白质前体的蛋白水解加 工和翻译后修饰(包括糖基化和蛋白聚糖的添加），CSF-I至少WS种成熟形式存在（参见 Cerretti DP等人，1988,Mol Immunol,25(8),761 ;Pixley FJ和Stanley ER,2004,Trends in Cell Biology, 14( 11 )628-38; Douglass, TG 等人，2008, Int Immuno 曲 armacol, 8,1354-76)。各种形式的CSF-I蛋白包括两种分泌型分子，一种是糖基化的，另一种包含更长的氨基 末端序列和蛋白聚糖修饰。另一种变体是跨膜(TM)分子，其是糖基化的但不具有蛋白聚糖 部分。运种膜形式可W通过蛋白水解切割而脱落W释放活性、可溶分子。所有形式均被产生 为前体多肤，其具有氨基端的32个氨基酸的信号序列、近簇基端的大约23个氨基酸的推定 跨膜区和短的胞质COOH端尾。随后，前体肤通过氨基端和簇基端蛋白水解切割进行加工W 产生成熟形式的CSF-I，其中残基1-149是相同的并构成受体结合结构域。在体内，CSF-I单 体是糖基化的，并通过二硫键发生二聚化。CSF-I属于一组生物学激动剂，其促进血细胞的 产生。具体地，它用作单核吞隧细胞谱系的骨髓祖细胞的生长、分化和存活因子。此外，CSF-1通过应答细胞上的特异性受体刺激巨隧细胞的存活、增殖和功能。
[0003] CSF-I受体(CSF-IR)也被称为c-fms基因产物或CD115dCSF-1R是16化Da的1型TM糖 蛋白，其属于III型受体酪氨酸激酶家族。还已经显示，除了CSF-I之外，结构上相似但序列 不相关的分子IL-34也是针对CSF-IR的配体化in等人，2008，Science 320:807-811) XSF-IR的表达主要局限于单核细胞-巨隧细胞谱系（循环和驻留组织的群体）的细胞，包括破骨 细胞。此外，它表达于雌性生殖系统的许多细胞，包括卵母细胞、蚁膜细胞和滋养层细胞 (Pollard JW和Stanley ER,1996Advances in Developmental Biochemistry Vol 4, 1996,Pages l53-l93(Pleio1:;ropic Roles for CSF-Iin Development Defined by the Mouse Mutation 0steope1:;rotic);A;rceci RJ,PNAS 1989,86(22),8818-8822(Temporal Expression and Location of CSF-Iand its Receptor in Female Reproductive Tract are consistent with CSF-I-Regulated Placental Development) ;Arceci ,RJ等人， 1992,151(1),l-8;Dev Biol;Regens1:reif LJ和Rossant J,Dev Biol 1989May;133(l): 284-94(Expression of the c-fms-oncogene and of the cytokine,CSF-I,during mouse embryogenesis) ,Pampfer S等人，Biol Reprod 1992,46(1) ,48-57(Expression of the CSF-Ireceptor(c-fms proto-oncogene product)in the human uterus and placenta;Joldii PP等人，Lab Invest 1993,68(3),308-32(KExpression of the CSF-lReceptor(c-fms product)by cells at the human uteroplacental interface)；Kauma SW等人，J Clin Endocrinol Me1:ab 1991,73(4),746-751(CSF-land c-fms e邱ression in human endometrial tissues and placenta during the menstrual cycle and early pre即an巧），Byrne J Cell Biol 1981 91 (3Pt I)848-53,Hofstetter W等人，Bone 1995，17，（2)，145-151;Tanaka S等人，1993，J Clin Invest，91:257-63;Weir EC等人， 1993J Bone Miner Res,8(12)1507-18)。
[0004]配体CSF-I与CSF-I受体的结合通过它的酪氨酸激酶结构域的作用导致受体在一 个或多个酪氨酸残基上发生憐酸化。因为可W获得只结合憐酸化之后的受体的抗体，所W 可^检测到运种憐酸化（例如来自〔日115;[即日1;[叫1日(311]1〇1〇肖7的化〇3911〇-]\1-〔5尸-Receptor(Ty巧46)抗体#3083)。
[000引抗CSF-IR的抗体是本领域已知的。Sherr，C.J.等人，Blood 73(1989) 1786-1793描 述了抑制CSF-I活性的抗CSF-IR的抗体（Sherr ,C.J.等人，Blood 73(1989)1786-1793)。 W009/026303公开了结合人CSF-IR的抗CSF-IR抗体和使用抗鼠 CSF-IR抗体的体内小鼠肿瘤 模型。W011/123381公开了内化CSF-IR并具有ADCC活性的抗CSF-IR抗体。W011/123381公开 了使用抗鼠 CSF-IR抗体的体内小鼠肿瘤模型。W011/140249公开了阻断CSF-I与CSF-IR的结 合的抗CSF-IR抗体，其被认为在治疗癌症中是有用的。W009/112245公开了抑制CSF-I结合 CSF-IR的抗CSF-IR IgGl抗体，其被认为在治疗癌症、炎性肠病和类风湿性关节炎中是有用 的。WOl 1/131407公开了抑制CSF-I结合CSF-IR的抗CSF-IR抗体，其被认为在治疗骨丢失和 癌症中是有用的。W011/107553公开了抑制CSF-I结合CSF-IR的抗CSF-IR抗体，其被认为在 治疗骨丢失和癌症中是有用的。W011/070024公开了结合人CSF-IR片段delD4的抗CSF-IR抗 体。
[0006] 抗CSF-IR抗体当前正在开发用于治疗癌症和类风湿性关节炎。
[0007] 术语"纤维化疾病"是指异常伤口愈合反应，其中在器官或组织中形成过量的纤维 结缔组织。过量的细胞外基质化CM)成分(诸如胶原和纤连蛋白）的沉积和累积导致组织的 硬化和结瘤，运最终可导致器官衰竭。
[0008] 创伤导致随着临时细胞外基质化CM)的发展立即的凝固和凝血反应。初始的血小 板聚集和活化帮助促进特征在于血管舒张和血管通透性增加的炎性反应，从而使得各种免 疫细胞(包括中性粒细胞、巨隧细胞、嗜酸性粒细胞和淋己细胞)募集至伤口部位。中性粒细 胞和巨隧细胞对伤口进行清创，从而降低感染风险，并与活化的淋己细胞一起分泌用于进 一步放大炎性反应的各种生长因子和细胞因子。诸如TG邱、PDGF和化-13的分子活化巨隧细 胞并导致成纤维细胞在伤口部位的募集、增殖和活化。活化的成纤维细胞或肌成纤维细胞 的特征在于表达O-平滑肌肌动蛋白和分泌胶原W及其它ECM成分。活化的成纤维细胞收缩 胶原晶格(colIagen lattice),从而将伤口的边缘拉向中屯、。表皮和内皮细胞增殖并在临 时基质上迁移W再生损伤的组织，运与基质成分的分解偶联，从而完成伤口修复。
[0009] 但是，持续的组织伤害或损伤，或者修复途径的失调导致不适当的伤口反应。随后 发生胶原和ECM的过量沉积和高度交联，从而导致代替正常组织结构的癒痕组织的过度形 成和硬化。
[0010] 许多方法已经显示当在肺纤维化的小鼠模型中使巨隧细胞耗尽时疾病的严重度 被降低（Zhang-Hoover J等人，Immunology,2000,101(4) :501-511 ;G;Lbbons MA等人,Am J Respir Crit Care Med,2011,184(5);Mu;rray,LA等人，2011,Int J Biochem Cell Biol, 43,154-62)。通过施用脂质体氯屈麟酸盐或者使用CDllc-白喉毒素受体转基因小鼠实现耗 尽，其中通过注射白喉毒素分子去除单核细胞/巨隧细胞。类似地，在肝纤维化(Duffield JS等人 J Clin Invest,2005,115(1) :56-65)和肾纤维化化in 化等人，2009，J Immunol, 183,6733-43)的模型中，巨隧细胞耗尽降低病理损伤和胶原沉积。op/op小鼠在CSF-I配体 DNA序列中具有突变，其导致表达截短的、无功能的蛋白质。运些小鼠表现为骨石化 (OSteopetrotic)表型并且是巨隧细胞缺陷性的。当被用于肺纤维化的博来霉素模型时，与 野生型小鼠相比，疾病的严重度被大大降低（Baran等人，2007,Am J Respir化it Care Med,176,78-89)。
[0011] 由于巨隧细胞可W被分类成至少两种功能表型Ml和M2,运给巨隧细胞的作用增加 了复杂性（Mantovani ,A等人，2004,Trends in Immunol ,25(12) ,677-86;Mantovani ,A等 人，2007,Eur J Immunol,37,14-16;Mosser DM和Edwards 肝，2008,化t Rev Immunol,8, 958-)，其中M2巨隧细胞具有促纤维化特征化upher,ML和Gallatin,WM，2006,Adv Immunol, 89,245-88;PrasseA等人，2006,AmJRespC;rit(?lreMed,173,781-92;F^echkovsky,DV 等人，2010,Clin Immunol,137(1),89-1-l;Git)bons MA等人，2011,Am J Resp Grit Care Med,184,569-81)O
[0012] 纤维化疾病的实例包括肺纤维化诸如特发性肺纤维化（IPF)、娃肺病、囊性纤维 化、肾纤维化、肝纤维化、肝硬化、原发性硬化性胆管炎、原发性胆汁性肝硬化、屯、内膜屯、肌 纤维化、纵隔纤维化、骨髓纤维化、腹膜后纤维化、进行性大块纤维化、肾源性系统性纤维 化、克罗恩病、癒痕瘡落、屯、肌梗死、系统性硬化病和关节纤维化。
[0013] 纤维化疾病的病因可W取决于所设及的器官或组织并且在一些疾病(诸如特发性 肺纤维化）中是未知的。肝纤维化和最终的肝硬化源自通过暴露于各种因素包括环境因素 和饮食因素或感染原的持续慢性肝损伤。长期乙型肝炎或丙型肝炎感染可W导致肝纤维 化。持续过度食用酒精或高脂/糖饮食也可W导致肝脏的硬化。类似地，糖尿病可能损伤肾 脏并留下瘤痕，导致功能丧失。在家族性肺纤维化中，尽管负责的遗传因素是未知的，但是 家庭成员具有增加的对纤维化的易感性。
[0014] IPF是慢性、进行性疾病，具有未知病因并且是屯种特发性间质性肺炎之一 (American Thoracic Society/European Respiratory Society Multidisciplinary Consensus Classification of the Idiopathic Interstitial Pneumonias,2002,Am J Respir Crit Care Med,165:277-304)。肺泡上皮细胞的重复性损伤被认为在促进导致IPF 的典型病理组织学特征的纤维化过程中具有关键作用（Selman 1,2001,Ann Intern Med, 134(2): 136-51 ;Gross TJ and Hunnin曲ake GW,2001)。许多风险因素可W导致上皮细胞 损伤，特别是吸入的毒素和药剂。已经将吸烟鉴定为一种运样的可能因素，而已经报道暴露 于木质粉尘、金属粉尘、氧化娃或其它矿物质粉尘增加发生IPF的风险(综述于Borchers AT 等人，2011Clinic Rev Allerg Immunol,40:117-134;M址er TM,2012,Clin Qiest Med, 33:69-83中）。患有IPF的患者的预后不良，其中中位数存活范围为诊断后2-5年(Gr化bin J 等人，2006，化〇招义，61:980-85;King TE 化，2001 ,Am J Respir Care Med, 1664:1171-81; 化脚自ndez P紅ez 邸等人，2010,化est,137:129-37;Lee HL等人，2005,化est,127:20：M-41)。
[0015] 纤维化疾病的治疗通常包括抗炎和免疫抑制剂，但是运些对患者益处较少。运些 治疗的效力的缺乏使得通常将IPF和纤维化疾病重新考虑为对伤口愈合的异常应答而不是 炎性病况。化非尼酬是2008年在日本和2011年在欧洲被批准用于治疗IPF的小分子药物，其 可能通过还未完全理解的多重作用机制起作用，但可能部分地通过下调TGF-0起作用。迄今 为止，还没有祀向疗法被批准用于纤维化适应证。
[0016] 因此，目前存在未满足的对于纤维化疾病的改善治疗的医学需要。例如，对于IPF， 3年存活率为50%而5年存活率仅为20%，并且在大约20%的病例中需要移植。
[0017] 因此，本发明的一个目的是提供治疗纤维化疾病的新方法。
[0018] 发明概述
[0019] 令人惊讶地，我们已经能够证实CSF-IR活性的抑制剂在纤维化疾病的治疗中是有 活性的。具体地，我们已经能够证实抑制CSF-IR活性的抗CSF-IR抗体在肺纤维化的体内动 物模型中是有活性的。
[0020] 因此，本发明提供用于治疗和/或预防纤维化疾病的CSF-IR活性抑制剂。本发明还 提供CSF-IR活性抑制剂用于制备用于治疗和/或预防纤维化疾病的药物的用途。本发明进 一步提供用于治疗和/或预防纤维化疾病的方法，其包括施用治疗有效量的CSF-IR活性抑 制剂。
[0021] 在本申请中，术语"纤维化疾病"包括特征为对伤口愈合的异常应答的疾病，其中 在器官或组织中形成过量纤维结缔组织。示例性的纤维化疾病包括但不限于肺纤维化诸如 特发性肺纤维化、娃肺病和囊性纤维化;肾纤维化包括肾小管萎缩和间质性纤维化、肝纤维 化和肝硬化、原发性硬化性胆管炎、原发性胆汁性肝硬化、屯、内膜屯、肌纤维化、纵隔纤维化、 骨髓纤维化、腹膜后纤维化、进行性大块纤维化、肾源性系统性纤维化、克罗恩病、癒痕瘡 落、屯、肌梗死、硬皮病、系统性硬化病和关节纤维化。
[0022] 本文中使用的术语乂 SF-IR活性"是指本领域针对CSF-IR所理解的活性谱，尤其是 人CSF-IR及其异形体(例如1、2、3或所有异形体)的活性。例如，配体与受体的结合诱导CSF-IR在特定酪氨酸残基处的憐酸化（Bourette RP和Rohrschneider LR,2000,Growth 化Ctors 17:155-166)并且接着产生的信号传导事件级联可W介导细胞迁移、存活、分化和 增殖（Suzu S等人，1997, J Immunol ,159,1860-7;Yeung Y-G和Stanley 邸，2003 ,Mol Cell Proteomics，2,1143-55;化 W等人，2008，J Leukoc Biol84(3),852-63)。在转染的细胞中 包含苯丙氨酸残基取代选定的酪氨酸残基的突变CSF-IR受体分子的表达掲示了特定的酪 氨酸残基与细胞结果(诸如存活、增殖和形态）的相关性(化等人，J Leukoc Biol 2008S邱 84(3): 852-863)。将抗憐酸酪氨酸抗体与分子特异性抗体一起使用的蛋白质组学方法和免 疫印迹技术已经鉴定了参与在受体的配体刺激后介导运些细胞功能的许多细胞内分子 (Yeung Y-G等人，1998，J Biol 畑em.l3,273(46):17128-37;Husson H等人，1997， OncogenelS,14(19):2331-8)。
[0023] 在一个实施方案中，受试者是哺乳动物，例如人。
[0024] 根据本发明的CSF-IR活性抑制剂是干扰(例如降低/抑制或阻断）CSF-IR的活性、 特别是纤维化疾病中CSF-IR的活性的药剂。特别优选的是干扰IPF中CSF-IR的活性的药剂。 根据本发明的抑制剂可W部分或完全抑制CSF-IR活性。用于本发明的抑制剂包括但不限于 能够与化-34、CSF-1或CSF-I受体(CSF-IR)或编码化-34、CSF-1或CSF-IR的核酸分子相互作 用（例如结合或识别）或者能够抑制化-34、CSF-I或CSF