一种诱变亚麻种子以及筛选耐盐突变体的方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及诱变获得新品种的处理技术领域，尤其涉及一种诱变亚麻种子以及筛 选耐盐突变体的方法。
【背景技术】
[0002] 我国盐碱地广泛分布，占全国耕地面积的20%，多以西北地区及沿海城市为主，大 面积的盐渍化土地严重影响了农业生产和生态环境，通过培养和筛选耐盐经济植物并对盐 渍化土壤进行改良是土壤开垦的途径之一。因此，培育和筛选突变体植株，获得新品种，受 到广泛的关注。
[0003] 亚麻的开发利用价值很高，亚麻茎制取的纤维是纺织工业的重要原料;亚麻种子 含油量30%-45%，亚麻油富含亚麻酸、亚油酸等不饱和脂肪酸，具有很高的保健养生作用； 以亚麻为原料开发的生态地膜，可用于水田、旱地和温室栽培，使地温升高的同时还可培肥 土壤。然而，在盐渍化土地生长就受到影响。因此要获得或筛选到耐盐植株是很有必要的。
[0004] 传统意义上，培育筛选获得突变体的方法有杂交、诱变、转基因等，然后再经过耐 盐筛选鉴定。然而，杂交和转基因操作过程复杂，工作量大，成本也大。相比较，人工诱变育 种具有成本低，操作简便，诱变效率高等优点，其中诱变剂甲基磺酸乙酯较为常用，可操作 性强，简单易行;特异性较强，能诱变定位到DNA上的某些碱基;后代较易稳定遗传，一般到 F3代就可稳定。
[0005] -般耐盐筛选鉴定的方法是：盐渍化大田或NaCl水培法进行耐盐筛选鉴定，本实 验使用的是砂培法，每天浇灌不同NaCl浓度的PNS进行耐盐筛选鉴定，具有操作简单，条件 可控，筛选效率高等优点。
[0006] 面对当下耕土中有较多的盐碱地，严重影响了农业生长、生态环境，培育筛选出耐 盐突变体植株并进行推广，以此改善土壤环境是很必要的。然而，在此过程中如何高效的突 变、筛选耐盐突变体植株是一个重要的研究内容。本发明选择经济作物亚麻为材料，并用甲 基磺酸乙酯进行诱变处理，用含一定NaCl浓度的PNS进行筛选，创立了快速诱变、高效筛选 诱变耐盐亚麻的方法。
【发明内容】
[0007] 鉴于上述的分析，本发明旨在提供一种诱变亚麻的方法和筛选耐盐突变体的方 案。用以解决现有技术中亚麻快速诱变和筛选耐盐效率低的问题。
[0008] 本发明的目的主要是通过以下技术方案实现的：
[0009] -种诱变亚麻种子以及筛选耐盐突变体的方法，所述的方法具体包括诱变亚麻种 子和筛选耐盐突变体;其特征在于：
[0010] 所述的诱变亚麻种子具体包括下述步骤：
[0011] 步骤一、将亚麻种子进行萌发处理，用少量水温26 °C的蒸馏水浸泡过夜，直到种 皮、胚根露白，以提高甲基磺酸乙酯的处理的效果；
[0012] 步骤二、将步骤一得到的亚麻种子用浓度为0.2wt%~0.8wt %的甲基磺酸乙酯溶 液进行浸泡诱变处理，室温下摇床120r/min，处理4h~16h，即获得了诱变处理的亚麻种子； [0013] 步骤三、将步骤二得到的种子放在浓度为Iwt%的硫代硫酸钠溶液中浸泡0.5~ lh，再把种子放入到网兜中在流水下冲洗数次，直至冲洗干净，然后播种于装有草坪土的长 花盆中，定期浇水，约一周后，统计发芽数目，计算发芽率；
[0014]所述的筛选耐盐突变体具体包括下述步骤：
[0015]步骤一、将种子播种于装有砂石的盆钵中，在正常光照以及室温下培养，每日浇灌 浓度为50mmol/L~200mmol/L的NaCl的PNS营养液，持续2周；
[0016] 步骤二、观察生长状况，两周后统计生长状态良好的亚麻植株数目，最终生长状态 良好者即为筛选到的EMS诱变的Ml代耐盐植株。
[0017] 步骤三、一定盐浓度筛选2周后，生长状态良好植株初步确定为已诱变的耐盐植 株;在步骤二的基础上经过M2，M3代继续耐盐筛选和性状分离观察，耐盐性状稳定不分离为 最终获得材料。
[0018] 在一个优选的技术方案中，所述的甲基磺酸乙酯的最佳浓度和时间为〇.4wt%- 0.6wt% ?8h〇
[0019] 在一个优选的技术方案中，所述的甲基磺酸乙酯溶液的浓度分别为0.2wt %、 0 · 4wt%、0 · 6wt%、0 · 8wt%，处理时间分别为4h、8h、12h、16h。
[0020] 在一个优选的技术方案中，所述的NaCl的PNS营养液的浓度优选为150-200mmol/ L0
[0021] 在一个优选的技术方案中，所述的NaCl的PNS营养液的浓度分别为50mmol/L、 1001111]1〇1凡、1501]11]1〇1凡、200_31凡，筛选后比较哪个浓度范围内有最佳的筛选效果，即在较 高浓度下仍有较多的正常生长的植株。
[0022]在一个优选的技术方案中，所述的甲基磺酸乙酯溶液的浓度为0.4wt%，处理时间 为12h;所述的NaCl的PNS营养液的浓度为200mmol/L。
[0023] 在一个优选的技术方案中，所述的甲基磺酸乙酯溶液的浓度为0.6wt%，处理时间 为4h;所述的NaCl的PNS营养液的浓度为200mmol/L。
[0024] 本发明有益效果如下：
[0025] (1)诱变材料是亚麻，利用价值高，广泛的用于纺织、榨油、养生保健，创立培育筛 选耐盐突变体的方法，利于后期获得耐盐新品种；
[0026] (2)用砂培法，定期浇灌不同NaCl浓度的PNS溶液，有利于控制条件，为后续结果的 分析提供了便利；
[0027] (3)在后期的实验中，将甲基磺酸乙酯诱变和定向筛选耐盐突变体植株两种方法 结合，使用方便，筛选效率高。
[0028] 本发明的其他特征和优点将在随后的说明书中阐述，并且，部分的从说明书中变 得显而易见，或者通过实施本发明而了解。本发明的目的和其他优点可通过在所写的说明 书、以及权利要求书中所特别指出的方法来实现和获得。
【具体实施方式】
[0029] 下面具体描述本发明的优选实施例。
[0030] 1、不同浓度的甲基磺酸乙酯处理不同时间后亚麻种子的自然发芽率
[0031] 试验方法：
[0032] 将亚麻种子进行萌发处理，用少量水温26°C的蒸馏