人HSP90α-2抗原表位肽、抗原、抗体、应用及试剂盒的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于多肤化学和免疫学领域，具体设及人热休克蛋白90α -2化SP90a -2) 抗原表位肤、用该抗原表位肤制备的HSP90 α -2特异性抗原和相应的单克隆抗体或多克隆 抗体、所述抗体在制备人HSP90 α -2体外诊断试剂盒上的应用，人HSP90 α -2体外诊断试剂 盒。
【背景技术】
[0002] 近年来，对肿瘤标志物的研究已经引起许多研究者的注意。寻找一种可靠的、非侵 入式的、能反映肿瘤的发生、增值分化的肿瘤标志物是众多研究者的共同屯、愿。通过对血 液、组织液的研究，目前发现一些肿瘤标志物可W对肿瘤的发生、增殖分化进行预测。其中， 人热休克蛋白90 α -2化SP90 α -2)就是运样的一种肿瘤标志物。
[0003] 热休克蛋白90 α-2是热休克蛋白家族中的重要的蛋白之一，其作为分子伴侣来 参与调控、维持细胞内多种蛋白的构象和功能，在调节细胞生长、分化和调亡等方面发挥重 要的作用。近年发现，热休克蛋白90α-2作为伴侣蛋白对肿瘤的恶性转变、生长、增殖及 侵袭有着重要的作用。有许多报道证实，人体肿瘤组织中，热休克蛋白的表达发生了改变。 在不同部位的肿瘤组织中，热休克蛋白表达的改变并不一致。目前发现肿瘤病人血清中的 HSP90 α -2含量与肿瘤的恶性程度，尤其是转移正相关。因此，HSP90 α -2有希望作为肿瘤 诊断和预后的标志物。
[0004] 检测血清中的HSP90 α -2水平的最理想的方法为免疫检测。因此，寻找合适的具 有免疫原性的HSP90 α -2抗原表位肤、制备特异性的HSP90 α -2抗原及抗体即成了重点。
【发明内容】
阳0化]为解决上述现有技术中所存在的问题，本发明提供了一种人HSP90 α -2抗原表位 肤，用该抗原表位肤制备的HSP90 α-2特异性抗原和相应的单克隆抗体或多克隆抗体，其 在制备人HSP90 α -2试剂盒上的应用，W及人HSP90 α -2体外诊断试剂盒。
[0006] 具体而言，本发明提供了：
[0007] 一种人服Ρ90 α -2抗原表位肤，其中所述服Ρ90 α -2抗原表位肤的氨基酸序列 为：
[0008] Tyr-Glu-Lys-Glu-Ser-Glu-Asp-Lys-Pr〇-Glu-Ile-Glu-Asp-Val-Gly-Ser-Asp-G luo
[0009] 本发明还提供了一种服P90 α -2抗原，其是通过使所述的人服P90 α -2抗原表位 肤与载体蛋白偶联制备而成的。
[0010] 本发明还提供了一种人服Ρ90 α -2抗体，其是由所述的服Ρ90 α -2抗原制备而成 的单克隆抗体或多克隆抗体，其中所述HSP90 α -2抗原是通过使所述的人HSP90 α -2抗原 表位肤与载体蛋白偶联制备而成的。
[0011] 本发明还提供了所述的人服Ρ90α -2抗体在制备人服Ρ90α -2体外诊断试剂盒上 的应用。
[0012] 本发明还提供了一种人服P90 α -2体外诊断试剂盒，其包含所述的人服P90 α -2 抗体作为包被抗体或结合抗体。
[0013] 优选地，所述试剂盒还包含另一种人服Ρ90α -2抗体，并且上述的人服Ρ90α -2抗 体和所述的另一种人HSP90 α-2抗体中的一者作为包被抗体，另一者作为结合抗体，其中 所述的另一种人服Ρ90 α -2抗体由包含如W下序列所示的抗原表位的另一种服Ρ90 α -2抗 原制备而成：
[0014] Tyr-Ar邑-Gly-Ile-Asp-Glu-Asp-Asp-Pro-Thr-Ala-Asp-Asp-Thr-Ser-Ala-Ala-V al-Thr-GlUo
[0015] 优选地，所述包被抗体为单克隆抗体。优选地，所述结合抗体为多克隆抗体。
[0016] 优选地，所述试剂盒还包含酶标记的抗抗体。
[0017] 本发明与现有技术相比具有W下优点和积极效果： 阳01引 1.本发明的人服P90 α -2抗原表位肤具有良好的抗原性，用其制备的抗原（免疫 原）免疫动物能够产生高度特异性的单克隆抗体和多克隆抗体。
[0019] 2.用本发明制备的服Ρ90 α -2单克隆抗体和多克隆抗体能够高度特异地与血液 样本中的服Ρ90 α -2结合。
[0020] 3.本发明的人服Ρ90 α -2体外诊断试剂盒可W有效地检测血清中的服Ρ90 α -2的 水平，可用来判断肿瘤的恶性程度，并对转移和预后进行预测。
【具体实施方式】
[0021] W下通过【具体实施方式】的描述对本发明作进一步说明，但运并非是对本发明的限 审IJ，本领域技术人员根据本发明的基本思想，可W做出各种修改或改进，但是只要不脱离本 发明的基本思想，均在本发明的范围之内。
[0022] 一、人服Ρ90 α -2抗原表位肤
[0023] 本文中所述的人服Ρ90α -2蛋白是本领域已知的，其氨基酸序列是本领域已知 的，可W在NCBI等专业数据库中查到。
[0024] 本发明提供了人服Ρ90 α -2抗原表位肤（1)和（2)，其氨基酸序列分别如序列表 沈Q ID No. 1和沈Q ID No. 2所示，为： 阳0巧] (l)Y-E-K-E-S-E-D-K-P-E-I-E-D-V-G-S-D-E ;和
[0026] (2)Y-R-G-I-D-E-D-D-P-T-A-D-D-T-S-A-A-V-T-E。
[0027] 本发明的发明人经过大量的理论研究和实验摸索，最终筛选得到两种具有良好的 抗原性的抗原表位肤。
[0028] HSP90 α -2抗原表位肤（1)包含人服P90 α -2蛋白（NCBI登录号NP_005339. 3) N 端第249位至第265位的肤段，并且在该肤段的N段加上Y，从而构成包含18个氨基酸的 HSP90 α -2抗原表位肤（1)。
[0029] HSP90 α -2抗原表位肤（2)包含人服Ρ90 α -2蛋白（NCBI登录号ΝΡ_005339. 3) C 端第697位至第714位肤段，并且在该肤段的Ν段加上Υ和R，从而构成包含20个氨基酸的 HSP90 α -2抗原表位肤（2)。
[0030] 运两个肤段均具有亲水性、抗原性强并且易于合成的特点。
[0031] 目前，本发明研究发现，本发明的服P90 α -2抗原表位肤具有如下功能：
[0032] 1.具有抗原性；2.与载体蛋白连接后作为免疫原刺激动物产生特异性的抗体； 3.用抗原表位肤制备的抗体可特异性地与人服Ρ90 α -2结合。
[0033] 本发明的HSP90 α -2抗原表位肤的制备方法可用化学合成法：利用美国ΑΒΙ431Α 型多肤自动合成仪，通过固相法合成抗原表位肤。本发明的抗原表位肤（1)和（2)的分子 量分别为2404. 35、2483. 39,可用质谱进行确定，并通过多肤序列测定鉴定所合成的抗原表 位肤序列。肤段的纯度可用薄层色谱和高效液相色谱进行评定，并测定抗原表位肤的浓度。
[0034] 二、HSP90a-2 抗原
[0035] 本发明还提供了服Ρ90α -2抗原，其通过使本发明的人服Ρ90α -2抗原表位肤（1) 和（2)中的一者与载体蛋白偶联制备而成。具体而言，本发明提供了 HSP90a-2抗原（1) 和（2)，所述服Ρ90α-2抗原（1)通过使本发明的人服Ρ90α-2抗原表位肤（1)与载体蛋白 偶联制备而成；所述服Ρ90 α -2抗原（2)通过使本发明的人服Ρ90 α -2抗原表位肤（2)与 载体蛋白偶联制备而成。本发明的服Ρ90 α -2抗原具有免疫原性和特异性，是一种免疫原， 可用来免疫动物从而制备特异性的HSP90 α -2抗体。在本发明中，可用的载体蛋白的例子 包括KLH(钥孔血蓝蛋白）、牛血清白蛋白度SA)、卵清蛋白OVA等。由于KLH(钥孔血蓝蛋 白）免疫原性强，结合位点多，免疫效果较好，并且与免疫动物亲缘关系较远，用其作为载 体蛋白不易引起交叉反应，因此是优选的。
[0036] Ξ、HSP90 α -2单克