检测大麻醇的电化学纳米免疫传感器的制造方法
【技术领域】
[0001]本实用新型涉及生物免疫检测技术领域，具体涉及一种检测大麻醇的电化学纳米免疫传感器。
【背景技术】
[0002]大麻醇(Cannabinoid)是大麻(marijuana)中影响精神状态的主要成分，它对大脑的作用主要是通过激活一个叫CBl的分子受体来实现的。目前大麻醇主要用于其它药物疗效不佳的某些疾病，如神经系统疾病中的多发性硬化症(MS)、运动性神经疾病、慢性顽固性疼痛和药源性呕吐。另外，该药对青光眼、哮喘和心血管疾病也可能有一定作用，虽然尚未进入临床应用，但已引起研究者的广泛兴趣。对大麻醇的检测方法目前只能达到定性目的，如采用相应的试纸条/板/盒，灵敏度为50ng/mL。为了便于对大麻醇进行研究和应用，亟需研究发展检测灵敏度更高的检测方法。
【实用新型内容】
[0003]本实用新型的目的是针对目前无法对大麻醇进行定量检测、检测灵敏度很低的缺陷，而提供一种检测大麻醇的电化学纳米免疫传感器。本实用新型的电化学纳米免疫传感器不受样品的浊度、颜色的影响，无需对样品进行纯化、富集等预处理，操作简单，检测灵敏度高、特异性强，能够用于对大麻醇进行快速定量检测。
[0004]本实用新型提供下述技术方案解决上述技术问题。
[0005]本实用新型提供的技术方案之一是:一种检测大麻醇的电化学纳米免疫传感器，所述传感器的电极表面是包住电极的壳聚糖凝胶层，所述凝胶层之上为纳米金/辣根过氧化物酶层，所述纳米金/辣根过氧化物酶层之上为抗大麻醇抗体层。
[0006]所述抗大麻醇的抗体为本领域常规，其来源和类型均没有特殊要求，既可以是单克隆抗体，也可以是多克隆抗体，优选单克隆抗体，更优选Balb/c小鼠单克隆抗体，且纯化后抗体的浓度不低于0.5mg/mLo
[0007]所述电极可以是本领域常规所述的各类电极，优选玻碳电极。
[0008]所述检测大麻醇的电化学纳米免疫传感器由包括如下步骤的制备方法制备得到:
[0009](I)对电极进行预处理，然后在电极上包被壳聚糖溶液；
[0010](2)以壳聚糖为桥联剂将纳米金和辣根过氧化物酶包被在电极上；
[0011](3)继续在电极上包被抗大麻醇抗体；
[0012](4)封闭液封闭后即得。
[0013]步骤(I)为对电极进行预处理，然后在电极上包被壳聚糖溶液。
[0014]其中，所述电极可以是本领域常规所述的各类电极，优选玻碳电极。
[0015]所述壳聚糖溶液优选以如下方法制得:将壳聚糖溶于醋酸溶液得到壳聚糖溶液，备用。更优选地，将2g壳聚糖溶于10mL体积百分比为2%的醋酸溶液中，搅拌3h得到2%的壳聚糖溶液，备用。
[0016]步骤(2)为以壳聚糖为桥联剂将纳米金和辣根过氧化物酶包被在电极上。
[0017]如本领域常规，所述包被为将电极置于溶液中进行包被。优选地，所述包被为将电极置于由纳米金溶液和辣根过氧化物酶溶液组成的混合溶液中进行包被。
[0018]所述纳米金溶液优选以如下方法制得:取0.01g/100mL氯金酸溶液10mLdPAlg/10mL的柠檬酸钠溶液4mL混匀，置于微波炉中低火保持8_10min，待自然冷却后用超纯水补充至104mL，即得纳米金溶胶，置于4°C避光保存备用。
[0019]所述辣根过氧化物酶溶液优选以如下方法制得:将辣根过氧化物酶(HRP)溶于磷酸缓冲液(PBS)中，即得辣根过氧化物酶溶液。更优选地，将0.02g辣根过氧化物酶(HRP)溶于1mL 0.0lM pH值为7.4的磷酸缓冲液(PBS)中，即得2.0g/L辣根过氧化物酶溶液。
[0020]所述封闭液为免疫检测领域常规的封闭液，优选牛血清白蛋白(BSA)。
[0021]在所述包被的操作过程中，如本领域常规，一般都需要经过恒温孵育和清洗的步骤。
[0022]在所述封闭的操作过程中，如本领域常规，一般也需要经过恒温孵育和清洗的步骤。
[0023]本实用新型的电化学纳米免疫传感器利用循环伏安法、交流阻抗法，原子力显微镜等表征电极组装的各个阶段。利用电流时间曲线法等方法可以实现对复杂样品中大麻醇的定量检测，实验结果表明该传感器灵敏度、特异性、稳定性、重现性以及使用寿命等技术参数均良好。
[0024]在符合本领域常识的基础上，上述各优选条件，可任意组合，即得本实用新型各较佳实例。
[0025]本实用新型所用试剂和原料均市售可得。
[0026]本实用新型的积极进步效果在于:
[0027]本实用新型的电化学纳米免疫传感器不受样品的浊度、颜色的影响，无需对样品进行纯化、富集等预处理，操作简单，检测灵敏度高、特异性强，能够用于对大麻醇进行快速定量检测，且灵敏度、特异性、稳定性、重现性以及使用寿命等技术参数均良好，具有非常好的应用前景。
【附图说明】
[0028]图1为实施例1所制备的电化学纳米免疫传感器的结构图。
【具体实施方式】
[0029]以下实施例用于说明本实用新型，但并不用来限制本实用新型的范围。下述各实施例中，所使用的各类设备、试剂和材料若无特别说明，均为常规市售可得。
[0030]实施例1电化学纳米免疫传感器的制备
[0031]1、玻碳电极的预处理:
[0032]将玻碳电极依次分别用I.ΟμπκΟ.3μπι、0.05μπι粒径的Ct-Al2O3浆在麂皮上抛光三次，且每次抛光后在超声水浴中清洗30s，最后依次用HNO3和H2O按体积比1:1配制的混合液、无水乙醇和超纯水清洗。在lmol/LH2S04溶液中用扫描范围为1.0?一1.0￥，扫描速度为100mV/S的循环伏安法活化电极，重复扫描直至出现稳定的循环伏安曲线。上述稳定的循环伏安曲线满足下述要求:在实验室条件下预处理后的电极的循环伏安曲线的峰电位差应在SOmV以下，并尽可能地接近64mV，电极方能使用，最后置于氮气环境中干燥待用。
[0033]2、纳米金(Nano-Au)溶胶的制备:
[0034]根据Frens法取0.0lg/lOOmL氯金酸溶液lOOmL，加入lg/100mL的梓檬酸钠溶液4mL混匀，置于微波炉中低火保持8-10min，待其自然冷却后用超纯水补充至104mL即得纳米金溶胶，置于4°C避光保存备用。利用分光光度计对所制备的纳米金溶胶在可见光范围