专利名称：盾叶薯蓣种子无菌萌发与快速繁殖的方法
技术领域：
本发明涉及生物技术领域，具体地涉及盾叶薯蓣种子无菌萌发与快速繁殖的方法。
现有技术中，盾叶薯蓣(Dioscorea zingiberensis)常用根茎繁殖，但需种量大，成本高。种子繁殖在短时间内虽能解决种源问题，但因其雌雄异株(少数同株)的特性，天然杂交频繁，加上其多样化的山区种植自然坏境，导致了遗传基础的高异质性，遗传多样性极为丰富，杂交1代的实生苗就发生分离，这样优良种性难以稳定。
针对现有技术存在的上述不足之处，本发明采选高含量皂素的盾叶薯蓣种子，提供了一种盾叶薯蓣(Dioscorea zingiberensis)种子无菌萌发与快速繁殖的方法，该方法缩短了盾叶薯蓣优良种系的选育时间，提高了良种选育的数量和质量。
为了实现本发明的上述目的，本发明提供了如下的方案盾叶薯蓣种子无菌萌发与快速繁殖的方法，包括种子无菌萌发和良种筛选与快速繁殖步骤，采取盾叶薯蓣种子，去种翅后用肥皂水浸泡，冲洗干净，用75％酒精浸润，0.1％升汞灭菌8-10min，无菌水冲洗，接种于无激素的1/4MS＋PH5.8培养基，在光照强度1000LX，光照时间12h/d，温度25±1℃的条件下进行种子无菌萌发，转入培养基MS＋6－BA0.2mg/l＋IAA0.1mg/l＋NAA0.1mg/l＋PH5.8上进行快速繁殖，把带根的丛芽分割成单芽转接于无激素的MS培养基中壮苗，移栽。
与现有技术相比，本发明的有益效果在于1、本发明采选盾叶薯蓣种子，一粒种子为一个繁殖系，在无菌条件萌发后按种子系号繁殖，待每个种子达到一定数量时，各取出几株移栽，进行室外良种筛选，室外的筛选结果指导室内的种子系去留，因此可得到生长周期短、高产、抗病、皂素含量高的优良种子系进行扩大繁殖。
2、本发明繁殖、生根同步化，室内室外良种选育同步化，大大缩短了盾叶薯蓣优良种系的选育时间，提高良种选育的数量和质量，节约了土地和人力。
3、本发明把有性繁殖和无性繁殖在试管中有机地结合起来，充分显示了现代生物技术在盾叶薯蓣产业化生产中的高效益应用。
下面用本发明的实施例来进一步说明本发明的实质性内容，但本发明的内容并不局限于此实施例11、材料与方法种子采自野生盾叶薯蓣，其皂素含量3％，挑选粒大、饱满的种子，去种翅后用肥皂水浸泡20min，再用自来水冲洗干净，在超菌台上用75％酒精浸润30s，0.1％升汞灭菌8～10min，无菌水冲洗数次后，接种于不同的培养基上，在不同光照条件和不同的温度下进行萌发试验，结果如下
1.1培养基和激素对盾叶薯蓣种子无菌萌发的影响在光照强度1000LX，12h/d光照及温度25±1℃的培养条件下的试验结果表明(培养基PH5.8)(表1)，无激素的培养基中种子萌发快，萌发率高，添加激素后萌发受到抑制。培养基浓度与种子萌发成负相关，1/4MS培养基较适宜种子萌发。观察发现，在无激素培养基中萌发的种子苗，其上胚轴形成0.01-0.05cm左右的小块茎，叶子随培养基浓度增加而增大、颜色加深。有激素的培养基种子萌发缓慢，随激素浓度增加，上胚轴形成的小块茎增大，叶柄、茎杆加粗，叶子数量也增多，块茎上出现了芽眼。
表1不同的培养基和激素对盾叶薯蓣种子无菌萌发的影响
1.2种子成熟度对其无菌萌发的影响用无激素的1/4MS＋PH5.8培养基，在光照强度1000LX，光照时间12h/d，温度25±1℃的条件下进行种子成熟度的培养试验。结果(表2)表明，盾叶薯蓣种子无休眠期，萌发率与种子成熟度成正相关，与存放时间成负相关。
表2种子成熟度对其无菌萌发的影响(播种60d的统计数)
1.3温度对盾叶薯蓣种子无菌萌发的影响在无激素的1/4MS＋PH5.8的培养基，光照强度1000LX，光照时间12h/d的条件下的萌发试验表明(表3)，随温度上升，盾叶薯蓣种子萌发率提高，而温度低于15℃时种子不活动，高于30℃时种子萌发也受到抑制。这与张友德教授在土壤中的种子萌发试验结果一致。
表3温度对盾叶薯蓣种子无菌萌发的影响(播种60d的统计数)
1.4光照对盾叶薯蓣种子萌发的影响用无激素1/4MS＋PH5.8的培养基，在培养温度25±1℃的培养条件下进行不同光照时间和光照强度的比较试验。结果(表4)表明，光照对盾叶薯蓣种子萌发无影响，在培养60天，其种子发芽率都能达到95％。
表4光照对盾叶薯蓣种子萌发的影响
1.5盾叶薯蓣种子系无菌快繁技术建立了种子萌发后代的营养繁殖体系。在培养基MS＋6－BA0.2mg/l＋IAA0.1mg/l＋NAA0.1mg/l＋PH5.8上，30d可增殖丛芽5倍，有90％的丛芽带2～3条根，把带根的丛芽分割成单芽转接于无激素的MS培养基中壮苗，20d后就可移栽，移栽成活率85％。这样繁殖、生根同步化，室内室外良种选育同步化，大大缩短了盾叶薯蓣优良种系的选育时间，提高良种选育的数量和质量，节约了土地和人力。
权利要求
1.盾叶薯蓣种子无菌萌发与快速繁殖的方法，包括种子无菌萌发和良种筛选与快速繁殖步骤，其特征是采盾叶薯蓣种子，去种翅后用肥皂水浸泡，冲洗干净，用75％酒精浸润，0.1％升汞灭菌8-10min，无菌水冲洗，接种于无激素的1/4MS＋PH5.8培养基，在光照强度1000LX，光照时间12h/d，温度25±1℃的条件下进行种子无菌萌发，转入培养基MS＋6－BA0.2mg/l＋IAA0.1mg/l＋NAA0.1mg/l＋PH5.8上进行快速繁殖，把带根的丛芽分割成单芽转接于无激素的MS培养基中壮苗，移栽。
全文摘要
提供了一种盾叶薯蓣(Dioscorea zingiberensis)种子无菌萌发与快速繁殖的方法,属于生物技术领域,该方法缩短了盾叶薯蓣优良种系的选育时间,提高了良种选育的数量和质量。
文档编号A01C1/00GK1335053SQ0112880
公开日2002年2月13日 申请日期2001年8月29日 优先权日2001年8月29日
发明者罗桂芬, 胡虹, 段金玉, 吕春朝, 严宁 申请人:中国科学院昆明植物研究所