专利名称：使红细胞沉降的方法
相关申请本申请要求2001年12月5日提交的美国临时专利申请60/251,047号的优先权。
通过沉降分离红细胞的已知装置包括美国专利5,282,982和PCT申请公开WO99/44711中记载的那些。这些结构一般是通过提供用于接收红细胞与清洗液的混合物的浅容器来工作的。容器被倾斜，从而使由于密度差而借助重力从溶液沉降出来的红细胞沿容器的底面向下流到收集漏斗，以排出到重新注入设备。
上述现有系统的方法还包括将血液收集到含有ACD-A作为抗凝剂的容器的步骤，以及加入有利于红细胞聚集的试剂的步骤。优选的试剂是羟乙基淀粉，它可以促进红细胞相互电吸引，从而红细胞聚集并形成层叠的辊筒形状(roll configuration)的凝块，这被称作缗钱体(rouleau)。人们认为羟乙基淀粉是通过在隔得远的红细胞之间形成电桥而促进缗钱体的形成。缗钱体在溶液中表现出较小的水动阻力，因此预计更快速地沉到容器底部。
申请人面临的问题是上述的方法在实践中不可靠。也就是说，该方法中缗钱体经常不能根据需要而形成，或不能在合理长的时间内从血浆-羟乙基淀粉溶液中沉降出来，以提供具有适合对病人重新注入的血细胞比容的溶液。
作为此处使用的“惰性”或“惰性抗凝剂”，是指一种抗凝剂，它防止凝固，但是不影响红细胞有效形成缗钱体，从而适于通过沉降分离的能力。申请人发现的这样的一种惰性抗凝剂为柠檬酸磷酸葡萄糖(CPD)(citrate phosphate dextrose)。肝素是另一种惰性抗凝剂，它不会阻碍缗钱体的形成。但是，在本发明的方法中较少优选使用肝素，原因是为将血液返回至病人体内通常要将血液保存起来。肝素可能会对病人产生不希望的作用，并且将这样的血液返回病人体内可能也是不合适的。因此，优选的抗凝剂是CPD，因为它不干扰红细胞的沉降，还因为病人可以很容易地将其代谢。
申请人认为，现有技术的方法之所以没有用，是因为在该方法中使用的抗凝剂ACD-A对红细胞具有不利影响。特别地，现在人们认为红细胞吸收ACD-A会对细胞产生物理作用，防止它们形成希望的缗钱体以及按照需要在重力作用下沉降出来。申请人发展的一项理论是，ACD-A的吸收改变了红细胞的形状，使它们膨胀，并妨碍它们形成缗钱体的能力。可能还存在抗凝剂产生干扰的其它原因。
可能会发现或开发CPD和肝素以外的惰性抗凝剂。另外，对ACD-A进行物理或化学处理，使其对该目的而言变为惰性也是可能的。
再者，含有羟乙基淀粉以外的试剂的清洗液也可以使用。已知红细胞相互电吸引，并且羟乙基淀粉看起来通过在隔得远的红细胞间提供电桥有助于缗钱体的形成。也可能会发现促进缗钱体形成的其它试剂，包括其它的淀粉试剂如pentastarch(低分子量羟乙基淀粉)。因此，本发明期待含有其它试剂的其它清洗液的使用。本发明的详细说明在一个优选的实施方案中，通过真空系统将血液收集到容器中，该真空系统产生压差小的受控真空度，以减小收集时对红细胞的损害。这可用WO99/44711公开的系统或本领域已知的其它系统来实现。收集的血液在收集时与用作惰性抗凝剂的CPD混合。CPD以适合防止在该过程中发生凝血的CPD/血液比加到血液中。该比例最高可达到1份CPD对15份血液，优选在1∶5至1∶15的范围内，更优选1份CPD对10份收集的血液。
然后，收集的血液与含有试剂的清洗液(优选含有6％羟乙基淀粉的盐水)混合，并被放置到沉降室中进行处理。羟乙基淀粉的优选添加比例是8份羟乙基淀粉对5份血液/抗凝剂混合物，但可以发现，大范围的比例对从血液中除去不需要的物质都是有用的。
然后将溶液静置一段时间，以使大部分(如果不是全部)红细胞形成缗钱体并沉降到容器底部。该段时间可变化，但发现约20分钟就足够了。然后按照通常方法从容器中取出红细胞，并将其重新注入到病人体内。
利用WO99/44711公开的装置实行上述技术的临床试验显示，红细胞在约20分钟内从清洗液中分离，挽救的细胞的血细胞比容为30-64Hct。
在附加的权利要求范围内的变更对于本领域的普通技术人员是显而易见的。
权利要求
1.通过从含有血液和抗凝剂的溶液中沉降红细胞进行分离的改进方法，其中所述的抗凝剂基本上由惰性抗凝剂组成。
2.权利要求1的方法，其中所述的惰性抗凝剂为柠檬酸磷酸葡萄糖(CPD)。
3.权利要求1的方法，其中所述的CPD以1份CPD对最多达15份血液的比例与所述的血液混合。
4.权利要求1的方法，其中所述的惰性抗凝剂为肝素。
5.通过从含有血液和抗凝剂的溶液中沉降红细胞进行分离的改进方法，其中所述的抗凝剂基本上由选自CPD和肝素的抗凝剂组成。
6.清洗血液的方法，包括以下步骤提供含有惰性抗凝剂的所述血液；将所述血液与清洗液混合；以及通过沉降使红细胞从所述的清洗液中分离出来。
7.权利要求6的方法，其中所述的惰性抗凝剂为CPD。
8.权利要求7的方法，其中所述的清洗液含有淀粉溶液。
9.权利要求7的方法，其中所述的清洗液含有羟乙基淀粉。
10.权利要求7的方法，其中所述的清洗液为含有6％羟乙基淀粉的溶液。
11.权利要求6的方法，其中所述的惰性抗凝剂为肝素。
12.含有血液、抗凝剂和清洗液的溶液，其中所述的抗凝剂选自CPD和肝素。
13.权利要求12的溶液，其中所述的清洗液含有淀粉。
14.权利要求13的溶液，其中所述的淀粉为羟乙基淀粉。
15.基本上由血液、惰性抗凝剂和清洗液组成的溶液。
16.权利要求15的溶液，其中所述的惰性抗凝剂为CPD。
17.权利要求15的溶液，其中所述的惰性抗凝剂为肝素。
18.权利要求15的溶液，其中所述的血液为血液的沉积层。
19.权利要求18的溶液，其中所述的沉积层含有所述血液的大部分红细胞。
20.权利要求19的溶液，其中所述的沉积层的血细胞比容为约30-64。
全文摘要
一种用于清洗收集的血液的方法，它在收集血液时使用惰性抗凝剂。所述的惰性抗凝剂不干扰红细胞的聚集，从而促进重力沉降分离。优选的惰性抗凝剂是CPD(柠檬酸磷酸葡萄糖)。
文档编号A01N1/02GK1479592SQ01820071
公开日2004年3月3日 申请日期2001年12月5日 优先权日2000年12月5日
发明者韦斯利·H·维卡特, 韦斯利 H 维卡特, R 埃尔斯沃斯, 詹姆斯·R·埃尔斯沃斯 申请人:丰收技术股份有限公司