专利名称：大蒜茎尖培养结合冷处理生产脱毒种苗的方法
技术领域：
本发明涉及的是一种农业技术领域的方法，具体是一种大蒜茎尖培养生产脱毒苗的方法。
背景技术：
大蒜是营养繁殖作物，在生产上是靠鳞茎进行无性繁殖的，体内病毒积累逐年增加，病毒病发生严重。据报道，带毒大蒜产量损失可达50％。同时，鳞茎变小，花茎褪绿，商品形状受到很大影响，难以达到国际市场的消费要求。感病蒜，瓣蒜小，出苗细弱，生长较慢，叶片窄，即使多施几次肥，一般也难以达到大瓣种蒜的生长速度；因而致使蒜头变小，单位产量下降。大蒜病毒病是影响大蒜生产的主要病害，目前还没有药剂可以治理。因此，应用组织培养和病毒检测技术培育、繁育脱毒种苗用于生产是防治病毒病的有效途径。由于组织培养获取大蒜无病毒苗排除了化学药剂的防治，所以对减少污染，防止公害，保护环境，增进健康也有积极的意义。
经对现有技术的文献检索发现，中国专利申请号CN99114259.4，名称为一种大蒜脱毒种苗快速繁殖的方法，该专利自述为提供了一种大蒜脱毒种苗快速繁殖的方法，专用于大蒜脱毒种苗的快速繁殖。该方法取未熟蒜薹为外植体，通过对不同培养基、培养时间的选择、糖种类及浓度、激素配比的改变、新型植物激素茉莉酸及水杨酸的应用，可同时获得大量脱毒试管苗，繁殖基数达50-70；试管鳞茎诱导率达80％以上，鳞茎鲜重300mg以上。所形成的鳞茎可直接移栽田间生长，省工省力，速度快，脱毒效果好，适合工厂化育苗，可商品化生产。该项技术不足之处在于要培养出大蒜小鳞茎后才应用于生产，增加了培养步骤，费时费工，增加了成本。
发明内容
本发明的目的在于针对现有技术的不足，提供一种大蒜茎尖培养结合冷处理生产脱毒种苗的方法，使其提高了脱毒效率，并且不用诱导小鳞茎，直接形成完整植株，建立一套简单、高效、稳定的生产大蒜脱毒种苗的体系，脱除病毒。本发明简化了大蒜脱毒过程，降低了生产脱毒苗的成本。
本发明是通过以下技术方案实现的，本发明包括以下步骤(1)蒜瓣冷藏处理把收获的种蒜头放入冰箱内，低温贮藏。
(2)取材灭菌将经过冷处理的蒜瓣，加入自来水，置于培养箱中培养，以打破蒜瓣的休眠，诱导其萌发成苗。然后用该萌发的大蒜幼苗作为外植体进行灭菌处理。
(3)茎尖培养在双筒解剖镜下剥取茎尖，将切下的茎尖生长点接种到事先配好的MS+BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L的培养基中，在25℃、光强30μmol·m2·ws-1、光照时间16hr/天的条件下培养，使茎尖成活并生长。
(4)继代增殖培养将诱导出的大蒜健壮幼苗转接到MS+BA1.5mg/L+NAA0.1mg/L增殖培养基上，进行继代培养。
(5)试管苗生根经过几代增殖培养后，将生长健壮的试管苗转接到生根培养基MS+IBA0.5mg/L上生根。
(6)练苗移栽试管苗生根后，要在严格隔离的防虫网室中驯化培养，提高试管苗成活率。
本发明采用以茎尖培养结合冷处理的方法进行脱毒。大蒜组培脱毒技术的主要依据是病毒在植物体内分布并不均匀，某些器官或组织如茎尖等不带或少带病毒。其一，病毒在植物体内是通过微管系统传播的，而分生组织内部不存在微管系统；其二，分生组织内源生长激素含量较高，对病毒有钝化作用；其三，分生组织细胞分裂速度超过病毒的繁殖速度。因此，通过茎尖分生组织组培可以获得脱毒苗，在大蒜生产中通过这种方式都得到了较为理想的脱毒效果。应用这种方法，可以在实验室生产大量大蒜脱毒种苗，不受季节的限制，脱毒种苗可直接应用于生产，省时省力。
本发明获得的大蒜试管苗，用电子显微镜鉴定，电镜观察不到有病毒，脱毒完全。大田生产试验表明利用脱毒种苗进行生产，比直接蒜头作种苗的生产田蒜头产量高出25％-30％，蒜薹产量高出20％以上，并且品质有明显改善。
具体实施例方式
结合本发明的内容提供以下实施例，具体实施如下1.蒜瓣冷藏处理 把收获的种蒜头装在塑料袋中，放入冰箱内，4℃低温贮藏，处理时间为14天。
2.取材灭菌 将经过冷处理的蒜瓣，置于托盘中，加入自来水，置于30℃培养箱中培养3天，以打破蒜瓣的休眠，诱导其萌发成苗。选择生长健壮的蒜苗切去嫩叶及大部分蒜瓣，剥去蒜衣，用自来水冲洗2h后，在超净台上用70％酒精快速处理30s，用饱和漂白精液浸泡15min，然后用无菌水冲洗3遍。
3.茎尖培养 在超净工作台上，将经过外植体消毒的蒜瓣、蒜苗切除外层鳞片，露出的基盘顶芽置于双目解剖镜下，由外向内逐层剥去幼叶及叶原基，直至闪亮半圆球的顶端分生组织充分暴露出来，切取茎尖生长点0.2mm大小接种于MS+BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L培养基上，光照31.25μmol·m-2·s-1，14h/d，温度25℃，培养30d。
4.继代增殖培养 将分化的试管苗转接MS+BA1.5mg/L+NAA0.1mg/L增殖培养基上，增殖培养过程中每隔30d继代一次。
5.试管苗生根 经过几代增殖培养后，将生长健壮的试管苗转接到生根培养基MS+IBA0.5mg/L上生根，培养3周。生根率可达94.44％，平均单株生根数达20条，平均根长为2.0cm。
6.练苗移栽 将生根试管苗瓶口打开，培养室内放置3天后取出，洗净其根部的培养基，移栽到严格隔离的防虫网室中，在2/3珍珠岩加1/3泥炭的炼苗基质上种植，温度保持在25℃，相对湿度90％，适当遮荫，后期逐渐通风，增加光照，常规管理。
大蒜脱毒种苗在上海嘉定大蒜生产基地进行试种，结果表明脱毒种苗生产田的蒜头产量达到320公斤/亩，蒜薹产量达到600公斤/亩，分别比用普通蒜头的生产田增产28％和20％。
权利要求
1.一种大蒜茎尖培养生产脱毒苗的方法，其特征在于，包括以下步骤(1)蒜瓣冷藏处理把收获的种蒜头放入冰箱内，低温贮藏；(2)取材灭菌将经过冷处理的蒜瓣，加入自来水，置于培养箱中培养，以打破蒜瓣的休眠，诱导其萌发成苗，然后用该萌发的大蒜幼苗作为外植体进行灭菌处理；(3)茎尖培养在双筒解剖镜下剥取茎尖，将切下的茎尖生长点接种到事先配好的MS+BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L的培养基中，在25℃、光强30μmol·m2·ws-1、光照时间16hr/天的条件下培养，使茎尖成活并生长；(4)继代增殖培养将诱导出的大蒜健壮幼苗转接到MS+BA1.5mg/L+NAA0.1mg/L增殖培养基上，进行继代培养；(5)试管苗生根经过几代增殖培养后，将生长健壮的试管苗转接到生根培养基MS+IBA0.5mg/L上生根，培养3周；(6)练苗移栽试管苗生根后，在严格隔离的防虫网室中驯化培养，提高试管苗成活率。
2.根据权利要求1所述的大蒜茎尖培养生产脱毒苗的方法，其特征是，所述的步骤(1)，蒜瓣冷藏处理，具体为把收获的种蒜头装在塑料袋中，放入冰箱内，4℃低温贮藏，处理时间为14天。
3.根据权利要求1所述的大蒜茎尖培养生产脱毒苗的方法，其特征是，所述的步骤(2)，取材灭菌，具体为将经过冷处理的蒜瓣，置于托盘中，加入自来水，置于30℃培养箱中培养3天，以打破蒜瓣的休眠，诱导其萌发成苗，选择生长健壮的蒜苗切去嫩叶及大部分蒜瓣，剥去蒜衣，用自来水冲洗2h后，在超净台上用70％酒精快速处理30s，用饱和漂白精液浸泡15min，然后用无菌水冲洗3遍。
4.根据权利要求1所述的大蒜茎尖培养生产脱毒苗的方法，其特征是，所述的步骤(3)，茎尖培养，具体为在超净工作台上，将经过外植体消毒的蒜瓣、蒜苗切除外层鳞片，露出的基盘顶芽置于双目解剖镜下，由外向内逐层剥去幼叶及叶原基，直至闪亮半圆球的顶端分生组织充分暴露出来，切取茎尖生长点0.2mm大小接种于MS+BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L培养基上，光照31.25μmol·m-2·s-1，14h/d，温度25℃，培养30d。
5.根据权利要求1所述的大蒜茎尖培养生产脱毒苗的方法，其特征是，所述的步骤(4)，继代增殖培养，具体为将分化的试管苗转接MS+BA1.5mg/L+NAA0.1mg/L增殖培养基上，增殖培养过程中每隔30d继代一次。
6.根据权利要求1所述的大蒜茎尖培养生产脱毒苗的方法，其特征是，所述的步骤(5)，试管苗生根，具体为经过几代增殖培养后，将生长健壮的试管苗转接到生根培养基MS+IBA0.5mg/L上生根，培养3周，生根率达94.44％，平均单株生根数达20条，平均根长为2.0cm。
7.根据权利要求1所述的大蒜茎尖培养生产脱毒苗的方法，其特征是，所述的步骤(6)，练苗移栽，具体为将生根试管苗瓶口打开，培养室内放置3天后取出，洗净其根部的培养基，移栽到严格隔离的防虫网室中，在2/3珍珠岩加1/3泥炭的炼苗基质上种植，温度保持在25℃，相对湿度90％，适当遮荫，后期逐渐通风，增加光照，常规管理。
全文摘要
一种农业技术领域的大蒜茎尖培养结合冷处理生产脱毒种苗的方法，步骤为(1)蒜瓣冷藏处理；(2)取材灭菌；(3)茎尖培养在双筒解剖镜下剥取茎尖，将切下的茎尖生长点接种到事先配好的MS+BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L的培养基中，在25℃、光强30μmol·m
文档编号A01G1/00GK1775003SQ20051011150
公开日2006年5月24日 申请日期2005年12月15日 优先权日2005年12月15日
发明者蔡润, 潘俊松, 何欢乐 申请人:上海交通大学