专利名称：西洋杜鹃组培快速繁殖及试管开花的方法及所用的培养基的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种西洋杜鹃的组织培养快速繁殖及试管开花方法和所用的营养成分，属于花卉培养技术领域。
背景技术：
西洋杜鹃(俗称西鹃)(Rhododendron hybridum west)早期就被列为世界十大盆花之一，在国际花卉市场中甚为畅销。它花期长达四五十天，比普通杜鹃花更耐观赏。除用于盆栽观赏外，还可用于庭院装饰和组成花篱等多种用途。近年来，随着人们生活水平的提高，需求量越来越大，传统的繁殖技术培养周期长，产量小，而且还受季节和扦插繁殖母株的影响，难以满足市场的需要。
发明内容
本发明的目的在于，提供一种西洋杜鹃组培快速繁殖及试管开花的方法以及所用的培养基。利用本发明使西洋杜鹃的培养周期短，不受季节的影响，提高了西洋杜鹃的产量。
本发明的技术方案。西洋杜鹃组培快速繁殖及试管开花的方法，采用嫩茎尖和茎段形成丛生芽的快速繁殖方法，在快速繁殖的基础上对其试管苗进行花芽诱导，它包括下列步骤a、外植体的准备取1-1.5cm长的含1-3个腋芽节的新发嫩茎的茎尖和茎段，置自来水下冲1-2h，在此期间用玻璃棒轻轻搅动2-3次；在无菌条件下经70％酒精漂洗30-60s，无菌水冲一次，转入0.1％氯化汞(HgCl2)溶液消毒6-8分钟，无菌水冲4-5次；除去茎尖和茎段上变黑的部分，放入装有滤纸的无菌培养皿中备用；
b、无菌培养系的建立与增殖在超净工作台上，将茎尖和茎段斜插于外植体诱导培养基中，外植体诱导培养基为Read、MS有机成分物、蔗糖20～30g/L、ZT(玉米素)1.0～2.5mg/L、NAA(萘乙酸)0.05～0.1mg/L，外植体诱导培养基中含琼脂9～11g/L，pH5.0～5.4；温度25±1℃，光照12h/黑暗12h，光照强度1500～2000lx；将诱导出来的芽放入丛生芽增殖培养基中进行增殖培养，增殖阶段的培养物培养25～30天；丛生芽增殖培养基为Read、MS有机成分物、蔗糖20～30g/L、ZT(玉米素)1.0～2.5mg/L、NAA(萘乙酸)0.05～0.1mg/L，丛生芽增殖培养基中含琼脂9～11g/L，pH5.0～5.4；温度25±1℃，光照12h/黑暗12h，光照强度1500～2000lx；c、试管苗的壮苗和生根培养将增殖后的丛生芽割开，接种到壮苗培养基中，培养25～35天；壮苗培养基为Read、MS有机成分物、6-BA(6-苄基腺嘌呤)0.5～1.0mg/L、NAA(萘乙酸)0.05～0.1mg/L；壮苗培养基中含蔗糖20～30g/L，琼脂9～11g/L，pH5.0～5.4；温度25±1℃，光照16h/黑暗8h，光照强度1500～2000lx；选择生长较好的苗接种在生根培养基中，作25～35天的生根培养，生根培养基为Read、MS有机成分物、NAA(萘乙酸)0.5～2.0mg/L、IBA(吲哚丁酸)0.5～1.0mg/L、ZT(玉米素)0.1～0.2mg/L；生根培养基中含蔗糖20～30g/L，琼脂9～11g/L，pH5.0～5.4；温度25±1℃，光照16h/黑暗8h，光照强度1500～2000lx；d、试管苗开花诱导培养基将生长较好的试管苗接种到试管苗开花诱导培养基中，试管苗开花诱导培养基为1/2Read、MS有机成分物、IBA(吲哚丁酸)1.0～2.0mg/L、0.2％活性炭，3个月后试管苗顶端诱导出花芽，培养10天后开花；试管苗开花诱导培养基中含蔗糖20～30g/L，琼脂9～11g/L，pH5.0～5.4；温度25±1℃，光照16h/黑暗8h，光照强度1500～3000lx。
上述西洋杜鹃组培快速繁殖及试管开花用的培养基，它包含用下述原料配制的各种培养基外植体诱导培养基ReadMS有机成分物蔗糖20～30g/LZT(玉米素)1.0～2.5mg/LNAA(萘乙酸)0.05～0.1mg/L丛生芽增殖培养基ReadMS有机成分物蔗糖20～30g/LZT(玉米素)1.0～2.5mg/LNAA(萘乙酸)0.05～0.1mg/L壮苗培养基ReadMS有机成分物6-BA(6-苄基腺嘌呤)0.5～1.0mg/LNAA(萘乙酸)0.05～0.1mg/L生根培养基ReadMS有机成分物NAA(萘乙酸)0.5～2.0mg/LIBA(吲哚丁酸)0.5～1.0mg/LZT(玉米素)0.1～0.2mg/L试管苗开花诱导培养基
1/2ReadMS有机成分物IBA(吲哚丁酸)1.0～2.0mg/L或NAA(萘乙酸)2.0～5.0mg/L或IBA(吲哚丁酸)1.0～2.0mg/L加NAA(萘乙酸)1.0～2.0mg/L0.2％活性炭。
上述的西洋杜鹃组培快速繁殖及试管开花用的培养基，更好地是用下述原料配制的各种培养基外植体诱导培养基ReadMS有机成分物蔗糖30g/LZT(玉米素)2.0mg/LNAA(萘乙酸)0.05mg/L丛生芽增殖培养基ReadMS有机成分物蔗糖30g/LZT(玉米素)2.0mg/LNAA(萘乙酸)0.05mg/L壮苗培养基ReadMS有机成分物6-BA(6-苄基腺嘌呤)1.0mg/LNAA(萘乙酸)0.05mg/L生根培养基Read
MS有机成分物NAA(萘乙酸)2.0mg/LIBA(吲哚丁酸)1.0mg/LZT(玉米素)0.2mg/L试管苗开花诱导培养基1/2ReadMS有机成分物IBA(吲哚丁酸)2.0mg/L0.2％活性炭。
本发明具有培养周期短、分枝生长好、不受季节影响的特点。通常西鹃需3个月左右产花，本发明的试管苗只需2个月即可开花。
为了得到西洋杜鹃的组培快速繁殖的最佳方法，申请人做了一系列试验一、丛生芽的诱导将剥离出来的茎尖接种到芽诱导培养基上，40天后统计结果见表1。结果显示，在Read+ZT(2.0mg/L)+NAA(0.05mg/L)(单位下同)上外植体生长最好诱导率最高。35天后外植体生长迅速并在基部诱导出不定芽，诱导率为90％。此时外植体茎长3cm左右，基部有少量黄绿色愈伤组织。6-BA虽然也能诱导芽的产生，但诱导率低，部分外植体还出现茎坏死现象。KT(激动素)基本上不能诱导出芽。所以选Read+ZT(2.0)+NAA(0.05)为西洋杜鹃芽诱导的最适培养基。选将最早接入的外植体割下，接种到生根培养基中进行生根。将去除顶端优势的芽和愈伤组织一并转入前面的培养基中，2周后，基部愈伤组织增大同时诱导出更多的芽，进而形成丛生芽，多为6-10根苗。培养5周后，将茎高约3cm，茎粗约0.5cm，生长较好的苗割下来转入花芽诱导的培养基中。
表2 不同培养基与不同激素配比对丛生芽诱导的影响
二、花芽诱导组合将生长较好的苗从愈伤组织上割下来，接种到含0.2％活性炭1/2Read培养基上，附加不同浓度的IBA(吲哚丁酸)、NAA(萘乙酸)、IAA(吲哚乙酸)，诱导其花芽的产生，见表2。用未加活性炭、未减半的Read培养基为对照。
表2 不同培养基与不同激素配比对花芽诱导的影响
“-”表示未诱导出花芽，“+、++、+++、++++”表示花芽的生长状况从上面的实验可知，在花芽诱导实验中，虽然编号“B”、“C”、“D”培养基对花芽的诱导率是一样的，但从花芽的生长状况和开花时间而言，“B”培养基最适宜诱导花芽。“B”培养基上的外植体比其它培养基上的外植体生长状况好，花芽比其他培养基的花芽大，开花时间也比其它培养基上花芽提早1个月。“A”“C”“D”“F”虽然也能诱导花芽的形成，但外植体在这几种培养基中出现黄叶现象，并伴有假根，即许多叶片都长出根，而外植体基本无根，即便有的外植体基部产生了根，也非常的少。“G”培养基虽然对花芽的诱导率不高，但其基部易出根，根多，粗壮。适宜于对外植体根的诱导。将花芽解剖观察，花器官发育均正常。因此，培养基1/2Read+IBA(2.0)+0.2％活性炭为诱导花芽最适培养基。
具体实施例方式
本发明的实施例。采用嫩茎尖和茎段形成丛生芽的快速繁殖方法，在快速繁殖的基础上对其试管苗进行花芽诱导，它包括下列步骤a、外植体的准备取1-1.5厘米长的含1-3个腋芽节的新发嫩茎的茎尖和茎段，置自来水下冲1-2小时，在此期间用玻璃棒轻轻搅动2-3次，使其表面的尘土与细菌冲洗下来；在无菌条件下经70％酒精漂洗30-60秒，无菌水冲一次，转入0.1％HgCl2(氯化汞)溶液消毒6-8分钟，无菌水冲4-5次；除去茎尖和茎段上变黑的部分，放入装有滤纸的无菌培养皿中备用。
b、无菌培养系的建立与增殖在超净工作台上，将茎尖和茎段斜插于外植体诱导培养基中，外植体诱导培养基为Read、MS有机成分物、蔗糖30g/L、ZT(玉米素)2.0mg/L、NAA(萘乙酸)0.05mg/L，外植体诱导培养基中含琼脂11g/L，pH5～6；温度25±1℃，光照12h/黑暗12h，光照强度1500～2000lx；将诱导出来的芽放入丛生芽增殖培养基中进行增殖培养，增殖阶段的培养物培养30天；丛生芽增殖培养基与外植体诱导培养基相同，为Read、MS有机成分物、蔗糖30g/L、ZT(玉米素)2.0mg/L、NAA(萘乙酸)0.05mg/L，外植体诱导培养基中含琼脂11g/L，pH5～6；温度25±1℃，光照12h/黑暗12h，光照强度1500～2000lx。
培养基的配制方法配1L培养基为例首先加入1L培养基所需要的Read的大量元素、微量元素、铁盐，再加入1L培养基中所需MS有机成分物，每一种物质及含量见下表.
表3 Read培养基的组成成分表(mg/L)
表4 MS培养基的组成成分表(mg/L)
c、试管苗的壮苗和生根培养将增殖后的丛生芽割开，接种到壮苗培养基中，培养30天，苗长度为3-4厘米，直径约0.5厘米；壮苗培养基为Read、MS有机成分物、6-BA(6-苄基腺嘌呤)1.0mg/L、NAA(萘乙酸)0.05mg/L；壮苗培养基中含蔗糖30g/L，琼脂11g/L，pH5.4；温度25±1℃，光照16h/黑暗8h，光照强度1500～2000lx。
选择生长较好的苗接种在生根培养基中，作30天的生根培养，生根培养基为Read、MS有机成分物、NAA(萘乙酸)2.0mg/L、IBA(吲哚丁酸)1.0mg/L、ZT(玉米素)0.2mg/L；生根培养基中含蔗糖30g/L，琼脂11g/L，pH5.4；温度25±1℃，光照16h/黑暗8h，光照强度1500～2000lx。
d、试管苗开花诱导培养基将生长较好的试管苗接种到试管苗开花诱导培养基中，试管苗开花诱导培养基为1/2Read、MS有机成分物、IBA(吲哚丁酸)2.0mg/L、0.2％活性炭，3个月后试管苗顶端诱导出花芽，培养10天后开花；试管苗开花诱导培养基中含琼脂11g/L，pH5.4；温度25±1℃，光照16h/黑暗8h，光照强度1500～3000lx。
权利要求
1.西洋杜鹃组培快速繁殖及试管开花的方法，其特征在于，采用嫩茎尖和茎段形成丛生芽的快速繁殖方法，在快速繁殖的基础上对其试管苗进行花芽诱导，它包括下列步骤a、外植体的准备取1-1.5cm长的含1-3个腋芽节的新发嫩茎的茎尖和茎段，置自来水下冲1-2h，在此期间用玻璃棒轻轻搅动2-3次；在无菌条件下经70％酒精漂洗30-60s，无菌水冲一次，转入0.1％氯化汞溶液消毒6-8分钟，无菌水冲4-5次；除去茎尖和茎段上变黑的部分，放入装有滤纸的无菌培养皿中备用；b、无菌培养系的建立与增殖在超净工作台上，将茎尖和茎段斜插于外植体诱导培养基中，外植体诱导培养基为Read、MS有机成分物、蔗糖20～30g/L、玉米素1.0～2.5mg/L、萘乙酸0.05～0.1mg/L，外植体诱导培养基中含琼脂9～11g/L，pH5.0～5.4；温度25±1℃，光照12h/黑暗12h，光照强度1500～2000lx；将诱导出来的芽放入丛生芽增殖培养基中进行增殖培养，增殖阶段的培养物培养25～30天；丛生芽增殖培养基为Read、MS有机成分物、蔗糖20～30g/L、玉米素1.0～2.5mg/L、萘乙酸0.05～0.1mg/L，丛生芽增殖培养基中含琼脂9～11g/L，pH5.0～5.4；温度25±1℃，光照12h/黑暗12h，光照强度1500～2000lx；c、试管苗的壮苗和生根培养将增殖后的丛生芽割开，接种到壮苗培养基中，培养25～35天；壮苗培养基为Read、MS有机成分物、6-苄基腺嘌呤0.5～1.0mg/L、萘乙酸0.05～0.1mg/L；壮苗培养基中含蔗糖20～30g/L，琼脂9～11g/L，pH5.0～5.4；温度25±1℃，光照16h/黑暗8h，光照强度1500～2000lx；选择生长较好的苗接种在生根培养基中，作25～35天的生根培养，生根培养基为Read、MS有机成分物、萘乙酸0.5～2.0mg/L、吲哚丁酸0.5～1.0mg/L、玉米素0.1～0.2mg/L；生根培养基中含蔗糖20～30g/L，琼脂9～11g/L，pH5.0～5.4；温度25±1℃，光照16h/黑暗8h，光照强度1500～2000lx；d、试管苗开花诱导培养基将生长较好的试管苗接种到试管苗开花诱导培养基中，试管苗开花诱导培养基为1/2Read、MS有机成分物、吲哚丁酸1.0～2.0mg/L、0.2％活性炭，3个月后试管苗顶端诱导出花芽，培养10天后开花；试管苗开花诱导培养基中含蔗糖20～30g/L，琼脂9～11g/L，pH5.0～5.4；温度25±1℃，光照16h/黑暗8h，光照强度1500～3000lx。
2.西洋杜鹃组培快速繁殖及试管开花用的培养基，其特征在于，它包含用下述原料配制的各种培养基外植体诱导培养基ReadMS有机成分物蔗糖20～30g/L玉米素1.0～2.5mg/L萘乙酸0.05～0.1mg/L丛生芽增殖培养基ReadMS有机成分物蔗糖20～30g/L玉米素1.0～2.5mg/L萘乙酸0.05～0.1mg/L壮苗培养基ReadMS有机成分物6-苄基腺嘌呤0.5～1.0mg/L萘乙酸0.05～0.1mg/L生根培养基ReadMS有机成分物萘乙酸0.5～2.0mg/L吲哚丁酸0.5～1.0mg/L玉米素0.1～0.2mg/L试管苗开花诱导培养基1/2ReadMS有机成分物吲哚丁酸1.0～2.0mg/L或萘乙酸2.0～5.0mg/L或吲哚丁酸1.0～2.0mg/L加萘乙酸1.0～2.0mg/L0.2％活性炭。
3.根据权利要求2所述的西洋杜鹃组培快速繁殖及试管开花用的培养基，其特征在于，它包含用下述原料配制的各种培养基外植体诱导培养基ReadMS有机成分物蔗糖30g/L玉米素2.0mg/L萘乙酸0.05mg/L丛生芽增殖培养基ReadMS有机成分物蔗糖30g/L玉米素2.0mg/L萘乙酸0.05mg/L壮苗培养基ReadMS有机成分物6-苄基腺嘌呤1.0mg/L萘乙酸0.05mg/L生根培养基ReadMS有机成分物萘乙酸2.0mg/L吲哚丁酸1.0mg/L玉米素0.2mg/L试管苗开花诱导培养基1/2ReadMS有机成分物吲哚丁酸2.0mg/L0.2％活性炭。
全文摘要
本发明公开了一种西洋杜鹃组培快速繁殖及试管开花的方法及所用的培养基，特征是，采用嫩茎尖和茎段形成丛生芽的快速繁殖方法，在快速繁殖的基础上对其试管苗进行花芽诱导，它包括外植体的准备、无菌培养系的建立与增殖、试管苗的壮苗和生根培养和试管苗开花诱导等几个步骤。本发明具有培养周期短、分枝生长好、不受季节影响的特点。通常西鹃需3个月左右产花，本发明的试管苗只需2个月即可开花。
文档编号A01H3/00GK101044840SQ20061005099
公开日2007年10月3日 申请日期2006年3月31日 优先权日2006年3月31日
发明者陈训, 刘燕, 巫华美 申请人:贵州科学院