专利名称：一种三疣梭子蟹快速生长品系的构建方法
技术领域：
本发明涉及水产遗传育种领域，具体说是一种三疣梭子蟹快速生长品系的构建方法。
背景技术：
水产动物的遗传育种传统上采用群体选育或杂交的方法进行，目前也有尝试借鉴在蓄禽中采用的家系选育的方法。由于一般水产动物产卵量大、后代数量多，使家系选育非常繁琐，操作困难。群体选育耗时长，收效慢。近年来，国内外学者一直非常关注分子标记辅助育种，但在实际应用中尤其在水产动物的遗传育种上还未见成效。
发明内容
本发明的目的在于提供一种快速、有效并且操作简便的三疣梭子蟹快速生长品系的构建方法。 为实现上述目的，本发明采用的技术方案为 三疣梭子蟹快速生长品系的构建方法利用选育材料的基因组微卫星作为分子标记，根据分子标记得到遗传结构中存在生殖隔离明显的群体作为杂交群体，杂交群体进行杂交组合，即得三疣梭子蟹快速生长品系。 所述选育材料的基因组微卫星作为分子标记为以选育材料的基因组DNA为模板，以上游引物5' -CTGTCTGATGAG TGAGGCTAC-3'和下游引物5' -TGACCACGAGGAAAGGAG-3'以及上游引物5' -GCCACTATCTTGCTGAGGTTGA-3'和下游引物5' -GCCATAGCACGAACACTTTTGA-3'两对引物进行体外双重PCR扩增，获得选育材料的基因组微卫星序列片段，选育材料为三疣梭子蟹野生群体。所述PCR扩增时PCR总反应体积为25uL，其中含dNTP (10mM) 0. 5ul，每个引物0. 2Fmo1，0. 4U Taq酶，10XPCR Buffer2. 5ul (含1. 5mmo1 Mgcl2) 。 PCR扩增条件94°C 2min ;然后94°C 30s，57。C 30s，72。C 40s，循环29次；最后72°C 10min。所述选育材料遗传结构中存在生殖隔离明显的杂交组合群体为雄体为山东莱州湾群体、雌体为广东南澳岛群体。 本发明所具有的优点 1.本发明育种的遗传背景清晰，避免了传统育种的盲目性。利用基因组微卫星作
为分子标记，解析了我国野生三疣梭子蟹群体的遗传结构，明确了各地理种群间的遗传关
系，使育种材料的选择具有更强的目的性，并且采用分子标记辅助选育和杂交并行的方法
构建三疣梭子蟹快速生长品系，加快了育种进程，也提高了育种的有效性。 2.本发明以遗传上显示生殖隔离的两个群体-山东莱州湾群体和广东南澳岛群
体作为杂交的基本材料，在有效利用遗传资源的同时，也有效缓解了由于小群体繁殖造成
的近交衰退现象。 3.本发明杂交组合的父本为山东莱州湾群体的雄性个体，借鉴了家蓄中先进的育种经验，充分考虑了父本性状在育种中的重要作用。
4.本发明方法大大减少了选育环节，加快了育种进程，同时有效避免了小群体繁殖造成的近交衰退现象，尤其适合于生长特性的选育。
图la为本发明选育材料基因组微卫星标记显示三疣梭子蟹山东莱州湾群体的遗传结构。 图lb为本发明选育材料基因组微卫星标记显示三疣梭子蟹广东南澳岛群体的遗传结构。 图2a为本发明构建的三疣梭子蟹杂交组合子代与野生群体的生长性状比较图(其中黑色柱形图示杂交组合($山东莱州湾X早广东南澳岛)子代)。
图2b为本发明构建的三疣梭子蟹杂交组合子代与野生群体的生长性状比较图(其中黑色柱形图示杂交组合($山东莱州湾X早广东南澳岛)子代)。
具体实施方式
实施例1 以选育材料的基因组微卫星作为分子标记，选育材料为三疣梭子蟹野生群体，以选育材料的基因组DNA为模板，以上游引物5' -CTGTCTGATGAGTGAGGCTAC-3'和下游引物5' -TGACCACGAGGAAAGGAG-3'以及上游引物5' -GCCACTATCTTGCTGAGGTTGA-3'和下游引物5' -GCCATAGCACGAACACTTTTGA-3'两对引物进行体外双重PCR扩增，PCR总反应体积为25uL，其中含dNTP(10mM)0. 5ul，每个引物0. 2Fmo1，0. 4U Taq酶，10XPCR Buffer2. 5ul(含1. 5,1 Mgcl2) 。 PCR扩增条件94。C 2min ;然后94°C 30s，57。C 30s，72。C 40s，循环29次;最后72t: 10min。 PCR扩增产物在0. 7 %聚丙烯酰胺凝胶电泳、经银染显色，通过所示的电泳条带即可确定个体的遗传背景，根据分子标记得到遗传结构中存在生殖隔离明显的群体作为杂交群体(参见图la和图lb)，杂交群体进行杂交组合，杂交组合群体为雄体为山东莱州湾群体、雌体为广东南澳岛群体，即得三疣梭子蟹快速生长品系。 由图la和图lb可知三疣梭子蟹山东莱州湾群体和广东南澳岛群体的遗传结构存
在生殖隔离。
实施例2 地点浙江省宁海县双盘涂水产养殖公司 2007年9月，在浙江省宁波市宁海县双盘涂水产养殖公司进三疣梭子蟹山东莱州湾群体雌性个体20只，雄性个体20只，同时进广东南澳岛群体雌性个体20只，雄性个体20只，放到暂养池暂养。然后，将两个群体的雌性个体和雄性个体进行杂交，构建杂交组合40组。抱卵蟹分别暂养至2008年4月，存活的个体开始陆续孵化幼体，经常规人工育苗，2008年6月共出苗种Cl-C2期共计0. 75kg，分放2个塘进行养殖。2008年10月，在浙江省宁波市宁海县双盘涂水产养殖公司捕获杂交组合的子代成体，并进行各种形态学参数测量。同时，与同等养殖条件下的当地群体进行个体壳长、壳宽等的比较(参见图2a和图2b)。
由图2a和图2b可知经过选育的杂交样品壳长和壳宽均比普通养殖的增加4%以上。其中黑色柱形图示杂交组合($山东莱州湾X早广东南澳岛)子代。结果证明，此杂交组合具有生长优势。
序列表.txtSEQUENCE LISTING〈110〉中国科学院海洋研究所〈120〉 一种三疣梭子蟹快速生长品系的构建方法〈130〉〈160>4〈170>PatentIn version 3. 1〈210>1〈211>21〈212>DNA〈213>人工合成〈220〉〈221>gene〈222>(1).. (21)〈223〉〈400>1ctgtctgatg agtgaggcta c 21〈210>2<211〉18〈212>DNA〈213〉人工合成〈220〉〈221>gene〈222〉 (1) . (18)〈223〉〈400>2tgaccacgag ga朋gg;ag 18〈210>3〈211>22〈212>廳〈213〉人工合成〈220〉〈221>gene〈222〉 (1).. (22)〈223〉〈400>3gccactatct tgctgaggtt ga 22〈210〉4〈211>22
〈212>DNA 〈213〉人工合成 〈220〉 〈221>gene 〈222〉 (1) . (22) 〈223〉 〈400>4 gccatagcac gaacactttt ga 22
权利要求
一种三疣梭子蟹快速生长品系的构建方法，其特征在于利用选育材料的基因组微卫星作为分子标记，根据分子标记得到遗传结构中存在生殖隔离明显的群体作为杂交群体，杂交群体进行杂交组合，即得三疣梭子蟹快速生长品系。
2. 按权利要求1所述的三疣梭子蟹快速生长品系的构建方法，其特征在于所述选 育材料的基因组微卫星作为分子标记为以选育材料的基因组DNA为模板，以上游引物5' -CTGTCTGATGAG TGAGGCTAC-3'和下游引物5' -TGACCACGAGGAAAGGAG-3'以及上游引物 5' -GCCACTATCTTGCTGAGGTTGA-3'和下游引物5' -GCCATAGCACGAACACTTTTGA-3'两对引物进 行体外双重PCR扩增，获得选育材料的基因组微卫星序列片段，选育材料为三疣梭子蟹野 生群体。
3. 按权利要求2所述的三疣梭子蟹快速生长品系的构建方法，其特征在于所述PCR 扩增时PCR总反应体积为25uL，其中含dNTP(10mM)0. 5ul，每个引物0. 2Fmo1，0. 4U Taq酶， 10XPCR Buffer 2. 5ul (含1. 5,1 Mgcl2) 。 PCR扩增条件94。C 2min ;然后94°C 30s， 57。C 30s，72。C 40s，循环29次；最后72。C 10min。
4. 按权利要求1所述的三疣梭子蟹快速生长品系的构建方法，其特征在于所述选育 材料遗传结构中存在生殖隔离明显的杂交组合群体为雄体为山东莱州湾群体、雌体为广东 南澳岛群体。
全文摘要
本发明涉及水产遗传育种领域，具体说是一种三疣梭子蟹快速生长品系的构建方法。利用选育材料的基因组微卫星作为分子标记，根据分子标记得到遗传结构中存在生殖隔离明显的群体作为杂交群体，杂交群体进行杂交组合，即得三疣梭子蟹快速生长品系。采用本发明可最大限度的利用物种遗传资源的同时，有利于更科学的培育三疣梭子蟹快速生长品系。
文档编号A01H1/02GK101736074SQ20081016001
公开日2010年6月16日 申请日期2008年11月7日 优先权日2008年11月7日
发明者吴丹华, 崔朝霞, 栾维莎, 王春琳, 谭烽 申请人:中国科学院海洋研究所