专利名称：体内诱导刺参产卵的方法
技术领域：
本发明涉及一种体内诱导刺参产卵方法，尤其是一种操作简单，耗时短， 同步产卵且卵子排放量大、质量好，可极大提高催产效率、受精率及孵化率的 体内诱导刺参产卵的方法。
背景技术：
海参做为我国和东南亚等太平洋和西印度洋沿岸国家人们餐桌上的佳肴美 昧早已闻名于世，特别是世界华人一直有吃海参"食补"的习惯，如今海参因 具有丰富的营养价值已越来越受人们的青睐。需求的增加导致采捕强度增大， 造成我国自然生长的剌参资源量和产量急剧下降，而刺参养殖产业随之迅猛发 展起来。剌参增养殖业的发展导致苗种需求量增加，然而现有剌参产卵效率却 一直遏制苗种产量，直接影响了刺参养殖的经济效益。目前，海参产卵主要是通过自然产卵和人工剌激诱导产卵两个途径。自然 产卵要求亲参性腺发育充分成熟，其产卵时间和产卵量不能人为控制，常因傍 晚或夜间产卵、排精、产卵量过大、精液过多等原因而造成水质败坏，继而导 致受精卵大量解体的现象。人工刺激诱导产卵最大的优点是能够人为控制刺参 的产卵时间和产卵量，避免自然产卵所存在的水质败坏等问题，但是现有的人 工刺激诱导产卵方法还是存在着不同程度的问题，仍不能最大程度满足刺参苗 种生产的需要。常用的人工刺激诱导产卵分为体外及体内诱导两种，体外诱导是通过温差 法和阴干流水等刺激的方法，但诱导效果不稳定，海参产卵量少(每只雌参产卵量一般在100万粒以下)，约占总怀卵量的20%左右，往往需要隔天多次催 产才能满足生产的需要，劳动强度高、育苗时间长，否则只能增加种参数量， 加大了育苗成本。体内诱导有单纯使用KC1注射催产的方法，此方法不但同自 然产卵一样，存在着对亲参的性腺成熟度要求高、产卵量极少的问题，而且因 注射量要求0.5mol/L、 l~2ml，很容易引起亲参排出包括性腺在内的内脏，因此 不能应用于剌参苗种的生产上。还有一种体内诱导的方法，既是文献(Developmental biology, 326 (2009): 169-175)关于五肽NGIWY酰胺及其衍生物NGLWY酰胺的报道(Asn-Gly-Leu-Trp-Tyr-NH2)。文献虽然指出体内注射NGLWY酰 胺能够诱导刺参精卵排放并公开了每个个体的注射量为0.1% (v/w)、最佳浓 度为lnmol/L，但经实验表明单独注射NGLWY产卵量少，如平均体重为210 克的成熟亲参，平均产卵量只有43万粒，浮游幼体期间成活率只有20~50%，稚 参变态率只有15~30%。 发明内容-本发明是为了解决现有技术所存在的上述技术问题，提供一种操作简单， 耗时短，同步产卵且卵子排放量大、质量好，可极大提高催产效率、受精率及 孵化率的体内诱导刺参产卵的方法。本发明的技术解决方案是 一种体内诱导刺参产卵的方法，其特征在于按 如下步骤进行a. 配制催产剂将NGLWY酰胺溶于超纯水中配置成ljimol/L的母液，然后将母液溶于 0.5mol/L的KC1海水溶液中，制成lnmol/L的催产剂；b. 选取亲参选取体重至少200克的性腺成熟亲参；c. 注射催产剂将体积与亲参体重比为0.1%ml/g且小于0.3ml的催产剂从刺参背部注入体 腔进行体内诱导；d. 收集精卵。本发明是将NGLWY酰胺和KC1的混合溶液作为人工催产剂对刺参进行体 内注射催产。NGLWY酰胺和KC1的合理配伍、相互作用，直接作用于刺参性 腺，诱导刺参卵母细胞成熟和脱滤泡， 一次催产基本保证全部个体都排放精卵， 催产率达到90%以上。其用量可保证亲身不排脏且排卵率大大提高，平均产卵 量可提高到400万粒，达到了总怀卵量的70%以上，极大的提高了亲参利用率， 即避免了单独注射KC1所存在的引用量大引起亲参排脏的问题，也解决了单独 使用NGLWY酰胺所存在的产卵量小的问题，具有操作简单、耗时短、成本低 等优点。卵子同步排放且质量好，直接提高了受精率和孵化率(均在98%以上)， 浮游幼体期间成活率达到50~90%,稚参变态率达到40~80%，大大提高苗种产 量。本发明所使用的催产剂无毒副作用且所需剂量少，催产后的亲参仍可正常 养殖、生长，进一步降低了苗种培育成本，增加了企业的经济效益。
具体实施方式
-实施例1:a. 配制催产剂将购于上海生工生物公司，纯度大于98%的NGLWY酰胺溶于超纯水中配 置成lpmol/L的母液，-20°(:冰箱保存，注射前将母液溶于0.5mol/L的KC1海 水溶液中，制成lnmol/L的催产剂。b. 选取亲参5月份采集来自大连仙浴湾养殖场的亲参28头，亲参体重在200g 260g之 间，平均体重为224g，采集的亲参运至暂养池中暂养24h。c. 注射催产剂用lml的医用一次性注射器将催产剂注射入剌参性腺周围，注射剂量(ml) 为亲参体重(g)的0.1% (0.20 (X26m)，亲参经注射催产剂后分别置于装有温 度为17.5°C的过滤海水塑料箱体中，雄性刺参在30min内开始沿塑料箱壁爬行 至海水表面，头部开始左右摆动，40min后开始排放精子。从60min开始，雌 参迅速沿箱壁爬行到水面并排放卵子，有的雌参在箱底即进行排卵，精卵排放 持续大约40min。d. 按照现有技术收集精卵。 用血球计数板检测卵子密度并计算排卵量。催产效果28头亲参全部排精产卵(排精16头，产卵12头)，12头雌性 亲参排卵量在270万粒到520万粒之间，平均排卵量为350万粒左右。检测排卵量后，按照现有技术人工受精和孵化、选育、浮游幼体培育及幼 体的变态、附着、培育并在显微镜下检测受精率和孵化率。观察结果表明卵子 的受精率和受精卵的孵化率均在98%以上，受精卵在12h后发育成旋转囊胚、 24h后发育成小耳幼体。浮游幼体的成活率为73%、稚参变态率为67.2%。实施例2:除b步骤选取亲参与实施例1不同外，其他步骤同实施例1。5月份采集来自大连普兰店石河的亲参110头，亲参体重在240g 350g之间，平均体重为274g，采集的亲参在暂养池中暂养72h，暂养期间不投喂馎料。催产剂的注射量为0.24 0.3ml。排精产卵时间与实例1基本一致，共有54头亲参排精，52头亲参产卵，雌参产卵量在292万粒到600万粒之间，平均产卵量为495.4万粒。人工受精和孵化、选育、浮游幼体培育及幼体的变态、附着及培育均同实施例1，浮游幼体成活率为74.6%,幼体变态率为68%。
权利要求
1.一种体内诱导刺参产卵的方法，其特征在于按如下步骤进行a.配制催产剂将NGLWY酰胺溶于超纯水中配置成1μmol/L的母液，然后将母液溶于0.5mol/L的KCl海水溶液中，制成1nmol/L的催产剂；b.选取亲参选取体重至少200克的性腺成熟亲参；c.注射催产剂将体积与亲参体重比为0.1％ml/g且小于0.3ml的催产剂从刺参背部注入体腔进行体内诱导；d.收集精卵。
全文摘要
本发明公开一种操作简单，耗时短，同步产卵且卵子排放量大、质量好，可极大提高催产效率、受精率及孵化率的体内诱导刺参产卵的方法，是按如下步骤进行将NGLWY酰胺溶于超纯水中配置成1μmol/L的母液，然后将母液溶于0.5mol/L的KCl海水溶液中，制成1nmol/L的催产剂；选取体重至少200克的性腺成熟亲参；将体积与亲参体重比为0.1％ml/g且小于0.3ml的催产剂从刺参背部注入体腔进行体内诱导；收集精卵。
文档编号A01K61/00GK101595847SQ20091001232
公开日2009年12月9日 申请日期2009年7月1日 优先权日2009年7月1日
发明者坚 宋, 常亚青, 庞振国, 冲 赵 申请人:大连水产学院