专利名称：粉香槟铁线莲的组织培养方法
技术领域：
本发明涉及一种植物的组织培养方法，尤其是涉及一种粉香槟铁线莲的组织培养 方法。
背景技术：
铁线莲为毛茛科铁线莲属植物，原产中国，广布于北半球，原种200余种，经多年 的人工杂交出现大量园艺品种，花色爽洁淡雅、花大色鲜且繁期久，差不多可从5月陆续开 到11月。开花场面壮观受世人欢迎，是良好的庭院材料。粉香槟铁线莲为园艺品种，木质 藤本，长约1-2米，茎呈棕色或紫红色，单叶，常对生，花单生，粉红色，花期6-9个月。但是 通过选育获得优异的新品种，分株速度慢、扦插繁殖率低、品种易退化，因此无法满足人们 的需求。
发明内容
本发明的目的就是为了克服上述现有技术存在的缺陷而提供一种可提高繁殖速 度和苗的整齐度，并保持原有母本性状的粉香槟铁线莲的组织培养方法。本发明的目的可以通过以下技术方案来实现粉香槟铁线莲的组织培养方法，其特征在于，该方法包括以下步骤(1)无菌材料的获得春季取萌发的幼嫩枝条上的芽，用自来水冲洗l_3h后于超净工班工作台上，依次 利用质量浓度为60-75%的乙醇浸泡10-50s，体积浓度为0. 5_2%。的汞浸泡10-30min，再用 无菌水冲洗4-6次，利用无菌滤纸吸干芽表面的水分后，将芽切成0. 5-2cm长的带腋芽的节 段，接种于腋芽诱导培养基上；(2)芽的分化和增殖带腋芽的节段接种于腋芽诱导培养基上，1-3周后腋芽部位开始膨大，出现绿黄色 突起，3-5周后可见芽分生组织，再培养1-2个月，腋芽长到3-5cm，将腋芽切下进行增殖培 养，分化的芽转入不定芽增殖培养基中，分化的芽的基部虽有较多愈伤组织，但不影响不定 芽的增殖；(3)不定芽壮苗培养在不定芽增殖培养基上，诱导出的丛生芽中每丛有2-4株能够伸长，其余的丛生 芽处于矮化状态，将丛生芽分成小丛后，转至壮苗培养基上生长，其中不定芽伸长迅速， 15-30天后可以长至3-5cm ；(4)生根培养取2-3cm的小植株，转接入生根培养基中诱导生根，5_15天后幼苗基部分化出白 色的根原基，18-25天后开始生根，30-35天后可以长至l-2cm，每株有3_4个根，生根率为 80-90% ；(5)炼苗与移栽
生根培养30-35天，根系长至l-2cm时，选择根系发达、生长健壮的无菌苗，于室内 开瓶炼苗1-3天，然后将苗取出，洗净根部的琼脂，栽于温室的苗床中驯化20-40天，即可移 栽上盆，给予肥水管理，最终的移栽成活率为90-95%。所述的腋芽诱导培养基包括MS+6-BA1. 0-3. 0mg/L+NAA0. 05-0. 2mg/L。所述的腋芽诱导培养基优选MS+6-BA2. 0mg/L+NAA0. 2mg/L。所述的不定芽增殖培养基包括MS+6-BA1. 0-3. 0mg/L+NAA0. 05-0. 2mg/L。所述的不定芽增殖培养基优选MS+6-BA1. 0mg/L+NAA0. 2mg/L。所述的壮苗培养基包括MS+6-BA0. 5-2. 0mg/L+NAA0. 1-0. 2mg/L。所述的壮苗培养基优选MS+6-BA1. 0mg/L+NAA0. lmg/L。所述的生根培养基包括MS+6-IBA1. 0-3. 0mg/L+NAA0. 05-0. 2mg/L。所述的生根培养基优选MS+6-IBA2. 0mg/L+NAA0. 2mg/L。所述的培养基还包括蔗糖20_40g/L、琼脂粉2_4g/L，培养基pH5. 5-6. 0，培养温度 22-28°C，光照 1500-25001x。与现有技术相比，本发明通过组培技术，极大提高了粉香槟铁线莲的繁殖速度和 苗的整齐度，并更好地保持了原有的母本性状，可以实现育苗的工厂化大批量生产。
具体实施例方式下面结合具体实施例对本发明进行详细说明。实施例1(1)无菌材料的获得春季取萌发的幼嫩枝条上的芽，用自来水冲洗Ih后于超净工班工作台上，依次利 用质量浓度为60%的乙醇浸泡10s，体积浓度为0. 5%。的汞浸泡lOmin，无菌水冲洗4次，用 无菌滤纸吸干表面水分后，将芽切成0. 5cm长的带腋芽的节段，接种于包括MS+6-BA1. Omg/ L+NAA0. 05mg/L的腋芽诱导培养基上；(2)芽的分化和增殖带腋芽的节段接种于腋芽诱导培养基上，1周后腋芽部位开始膨大，出现绿黄色突 起，3周后可见芽分生组织，再培养1个月，腋芽长到3cm，将腋芽切下进行增殖培养，分化的 芽转入包括1.0mg/L MS+6-BA+NAA 0. 05mg/L的不定芽增殖培养基中，分化的芽的基部虽有 较多愈伤组织，但不影响不定芽的增殖；(3)不定芽壮苗培养在不定芽增殖培养基上，诱导出的丛生芽中，每丛有2株能够伸长，其余的处于矮 化状态，将丛生芽分成小丛后，转至包括MS+6-BA0. 5mg/L+NAA0. lmg/L的壮苗培养基上生 长，其中不定芽伸长迅速，15天后可以长至3cm ；(4)生根培养取2cm的小植株，转接入包括MS+6-IBA1. 0mg/L+NAA0. 05mg/L的生根培养基中诱 导生根。5天后幼苗基部分化出白色的根原基，18天后开始生根，30天后可以长至1cm，每 株有3个根，生根率为80% ；(5)炼苗与移栽生根培养30天，根系长至Icm时，选择根系发达、生长健壮的无菌苗，室内开瓶炼
5苗1天，再取出洗净根部琼脂，栽于温室的苗床中驯化20天后，即可移栽上盆，给予肥水管 理，移栽成活率为90%。上述各种情况的培养基还包括蔗糖20g/L、琼脂粉2g/L，pH = 5. 5，培养温度22°C， 光照 15001x。实施例2(1)无菌材料的获得春季取萌发的幼嫩枝条上的芽，用自来水冲洗2h后于超净工班工作台上，依次利 用质量浓度为75%的乙醇浸泡10s，体积浓度为1%。的汞浸泡20min，无菌水冲洗5次，用 无菌滤纸吸干表面水分后，将芽切成Icm长的带腋芽的节段，接种于包括MS+6-BA2. Omg/ L+NAAO. 2mg/L的腋芽诱导培养基上；(2)芽的分化和增殖带腋芽的节段接种于腋芽诱导培养基上，2周后腋芽部位开始膨大，出现绿黄色突 起，3周后可见芽分生组织，再培养1个月，腋芽长到4cm，将腋芽切下进行增殖培养，分化的 芽转入包括MS+6-BA1. 0mg/L+NAA0. 2mg/L的不定芽增殖培养基中，分化的芽的基部虽有较 多愈伤组织，但不影响不定芽的增殖；(3)不定芽壮苗培养在不定芽增殖培养基上，诱导出的丛生芽中，每丛有3株能够伸长，其余的处于矮 化状态，将丛生芽分成小丛后，转至包括MS+6-BAlmg/L+NAA0. lmg/L的壮苗培养基上生长， 其中不定芽伸长迅速，20天后可以长至4cm ；(4)生根培养取3cm的小植株，转接入包括MS+6-IBA2. 0mg/L+NAA0. 2mg/L的生根培养基中诱导 生根。10天后幼苗基部分化出白色的根原基，20天后开始生根，30天后可以长至2cm，每株 有4个根，生根率为90% ；(5)炼苗与移栽生根培养30天，根系长至2cm时，选择根系发达、生长健壮的无菌苗，室内开瓶炼 苗2天，再取出洗净根部琼脂，栽于温室的苗床中驯化30天后，即可移栽上盆，给予肥水管 理，移栽成活率为95%。上述各种情况的培养基还包括蔗糖30g/L、琼脂粉3g/L，pH = 5. 8，培养温度25°C， 光照 20001x。实施例3(1)无菌材料的获得春季取萌发的幼嫩枝条上的芽，用自来水冲洗3h后于超净工班工作台上，依次利 用质量浓度为75%的乙醇浸泡50s，体积浓度为2%。的汞浸泡30min，无菌水冲洗6次，利 用无菌滤纸吸干表面水分后，将芽切成2cm长的带腋芽的节段，接种于包括MS+6-BA3. Omg/ L+NAA 0. 2mg/L的腋芽诱导培养基上；(2)芽的分化和增殖带腋芽的节段接种于腋芽诱导培养基上，3周后腋芽部位开始膨大，出现绿黄色突 起，5周后可见芽分生组织，再培养2个月，腋芽长到5cm，将腋芽切下进行增殖培养，分化的 芽转入包括MS+6-BA3. 0mg/L+NAA0. 2mg/L的不定芽增殖培养基中，分化的芽的基部虽有较多愈伤组织，但不影响不定芽的增殖；(3)不定芽壮苗培养在不定芽增殖培养基上，诱导出的丛生芽中，每丛有3株能够伸长，其余的处于矮 化状态，将丛生芽分成小丛后，转至包括MS+6-BA2mg/L+NAA0. 2mg/L的壮苗培养基上生长， 其中不定芽伸长迅速，30天后可以长至5cm ；(4)生根培养取3cm的小植株，转接入包括MS+6-IBA3. 0mg/L+NAA0. 2mg/L的生根培养基中诱导 生根。15天后幼苗基部分化出白色的根原基，25天后开始生根，35天后可以长至2cm，每株 有4个根，生根率为87% ；(5)炼苗与移栽生根培养35天，根系长至2cm时，选择根系发达、生长健壮的无菌苗，室内开瓶炼 苗3天，再取出洗净根部琼脂，栽于温室的苗床中驯化40天后，即可移栽上盆，给予肥水管 理，移栽成活率为92%。上述各种情况的培养基还包括蔗糖40g/L、琼脂粉4g/L，pH = 6. 0，培养温度28°C， 光照 25001x。
权利要求
粉香槟铁线莲的组织培养方法，其特征在于，该方法包括以下步骤(1)无菌材料的获得春季取萌发的幼嫩枝条上的芽，用自来水冲洗1-3h后于超净工班工作台上，依次利用质量浓度为60-75％的乙醇浸泡10-50s，体积浓度为0.5-2‰的汞浸泡10-30min，再用无菌水冲洗4-6次，利用无菌滤纸吸干芽表面的水分后，将芽切成0.5-2cm长的带腋芽的节段，接种于腋芽诱导培养基上；(2)芽的分化和增殖带腋芽的节段接种于腋芽诱导培养基上，1-3周后腋芽部位开始膨大，出现绿黄色突起，3-5周后可见芽分生组织，再培养1-2个月，腋芽长到3-5cm，将腋芽切下进行增殖培养，分化的芽转入不定芽增殖培养基中，分化的芽的基部虽有较多愈伤组织，但不影响不定芽的增殖；(3)不定芽壮苗培养在不定芽增殖培养基上，诱导出的丛生芽中每丛有2-4株能够伸长，其余的丛生芽处于矮化状态，将丛生芽分成小丛后，转至壮苗培养基上生长，其中不定芽伸长迅速，15-30天后可以长至3-5cm；(4)生根培养取2-3cm的小植株，转接入生根培养基中诱导生根，5-15天后幼苗基部分化出白色的根原基，18-25天后开始生根，30-35天后可以长至1-2cm，每株有3-4个根，生根率为80-90％；(5)炼苗与移栽生根培养30-35天，根系长至1-2cm时，选择根系发达、生长健壮的无菌苗，于室内开瓶炼苗1-3天，然后将苗取出，洗净根部的琼脂，栽于温室的苗床中驯化20-40天，即可移栽上盆，给予肥水管理，最终的移栽成活率为90-95％。
2.根据权利要求1所述的粉香槟铁线莲的组织培养方法，其特征在于，所述的腋芽诱 导培养基包括 MS+6-BA1. 0-3. 0mg/L+NAA0. 05-0. 2mg/L。
3.根据权利要求2所述的粉香槟铁线莲的组织培养方法，其特征在于，所述的腋芽诱 导培养基优选 MS+6-BA2. 0mg/L+NAA0. 2mg/L。
4.根据权利要求1所述的粉香槟铁线莲的组织培养方法，其特征在于，所述的不定芽 增殖培养基包括 MS+6-BA1. 0-3. 0mg/L+NAA0. 05-0. 2mg/L。
5.根据权利要求4所述的粉香槟铁线莲的组织培养方法，其特征在于，所述的不定芽 增殖培养基优选 MS+6-BA1. 0mg/L+NAA0. 2mg/L。
6.根据权利要求1所述的粉香槟铁线莲的组织培养方法，其特征在于，所述的壮苗培 养基包括 MS+6-BA0. 5-2. 0mg/L+NAA0. 1-0. 2mg/L。
7.根据权利要求6所述的粉香槟铁线莲的组织培养方法，其特征在于，所述的壮苗培 养基优选 MS+6-BA1. 0mg/L+NAA0. lmg/L。
8.根据权利要求1所述的粉香槟铁线莲的组织培养方法，其特征在于，所述的生根培 养基包括 MS+6-IBA1. 0-3. 0mg/L+NAA0. 05-0. 2mg/L。
9.根据权利要求8所述的粉香槟铁线莲的组织培养方法，其特征在于，所述的生根培 养基优选 MS+6-IBA2. 0mg/L+NAA0. 2mg/L。
10.根据权利要求2或4或6或8所述的粉香槟铁线莲的组织培养方法，其特征在于， 所述的培养基还包括蔗糖20-40g/L、琼脂粉2-4g/L，培养基pH5. 5-6. 0,培养温度22-28°C， 光照 1500-25001x。
全文摘要
本发明涉及粉香槟铁线莲的组织培养方法，包括无菌材料的获得，芽的分化和增殖，不定芽壮苗培养，生根培养，炼苗与移栽等步骤。与现有技术相比，本发明大大提高了粉香槟铁线莲的繁殖速度和苗的整齐度，并更好地保持了原有的母本性状，可实现育苗的工厂化大批量生产。
文档编号A01H4/00GK101869070SQ200910049978
公开日2010年10月27日 申请日期2009年4月24日 优先权日2009年4月24日
发明者沈勤, 陈建华, 黄建荣 申请人:上海上房园林植物研究所