一种毛叶铁线莲的组培繁殖方法
【专利摘要】本发明公开了一种毛叶铁线莲的组培繁殖方法，主要通过对初代培养、增殖培养、生根培养以及炼苗移栽的步骤，达到了增殖速度快、遗传性状稳定、繁殖系数高、试管苗生长旺盛的优良效果，毛叶铁线莲的愈伤组织的萌动率达到了98％，增殖倍数达到了5.7倍，生根率达到了100％，最终的成活率达到了96％。
【专利说明】一种毛叶铁线莲的组培繁殖方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及的是一种适用于毛叶铁线莲的组培繁殖方法。
【背景技术】
[0002]毛叶铁线莲攀援藤本，常为单叶对生，极稀有三出复叶；单花顶生；顶端锐尖，基部渐狭，内面无毛，基出三条直的中脉及侧生网脉能见，外面沿三条直的中脉形成一披针形的带，被黄色曲柔毛，外侧被紧贴的浅绒毛，边缘近于无毛；花期6月，果期7月至8月。产于浙江东北部。常生于海拔100-400米间的山谷、溪边灌丛中。
[0003]目前，利用组培技术繁育毛叶铁线莲的技术尚未有人研究，组织培养体系尚未建立，优良品种的推广普及尚未完成，苗木供求矛盾日益加剧，严重影响了毛叶铁线莲的园林应用和推广。
【发明内容】
[0004]本发明针对现有的不足提供了一种毛叶铁线莲的组培繁殖方法。
[0005]本发明通过以下方法实现上述目的。
[0006]一种毛叶铁线莲的组培繁殖方法，该方法包括下列步骤:
[0007](1)外植体的选择:于4?7月采取生长健壮的毛叶铁线莲幼嫩茎段作外植体；
[0008](2)材料处理方法:先用软毛刷将毛叶铁线莲表面的灰尘轻轻刷去，用流水冲洗10分钟后用紫外灯照射lOmin，转入超净工作台，在超净工作台上先用70%的乙醇浸泡10秒，然后再转入滴加了 2?3滴土温80的0.1%的升汞溶液中浸泡2-3min，再用无菌水冲洗3?4次,最后在无菌条件下分割材料,?段切割成0.4?0.6cm长；
[0009](3)初代培养:在无菌的条件下将步骤⑵得到的外植体接种在初代培养基上，该培养基是在3/4MS常规培养基中添加了 2.5mg/L的2，4_D、0.7mg/L的NAA、0.6mg/L的GA，PH 6.5，培养温度为21°C，光照周期13h/d，光强度为2100_23001ux，待培养14天左右后，新芽长至2.0cm左右时，即开始下一个阶段；
[0010](4)增殖培养:将初代培养的外植体新芽剪下接种在继代培养基上，该培养基是在 1/2MS 常规培养基中添加了 2.5mg/L 的 2，4_D、0.7mg/L 的 ΝΑΑ、0.6mg/L 的 GA, PH 6.5，培养温度为21°C，光照周期13h/d，光强度为2100-23001ux，待新芽长至2.0cm时，即开始下一个阶段；
[0011](5)生根培养:将继代培养的外植体新芽剪下接种在生根培养基上，该培养基是在MS常规培养基中添加了 2.0mg/L的IAA、0.8mg/L的NAA, 1.2mg/L的ΚΤ,ΡΗ 6.5，培养温度为24°C，光照周期13h/d，光强度为20001UX，待新苗长至2.0cm时，即开始下一个阶段；
[0012](6)炼苗移栽:先将培养瓶移至温室，自然条件下炼苗7d，然后解开封口膜，炼苗3d，炼苗期间适当遮光，使光照强度为自然光的40%，炼苗完成后取出小苗洗净根部附着的培养基，移栽到经消毒的重量比砻糠灰:珍珠岩:蛭石=1: 2: 2的混合基质中，温度控制在25°C，前5d湿度控制在80%左右，以后逐渐降低湿度，直至将移栽苗置于自然条件下。
[0013]有益效果:本发明对毛叶铁线莲采用组织培养技术，以嫩茎段为外植体，经外植体灭菌、初代培养、增殖培养、生根培养和炼苗移栽步骤，研究培养过程中试管苗的营养需求、激素对苗木生长分化的调控，解决毛叶铁线莲的微体快速增殖、诱导生根的重要技术问题，建立了完善的毛叶铁线莲组织培养体系，达到了高效诱导外植体分化增殖和高质量保证幼苗成活的目的，并且保存了母体的全部优良性状，遗传性状稳定。这种方法可在短期内形成大量优良试管苗，进行规模化、工厂化生产。
【具体实施方式】
[0014]下面结合实施例对本发明作进一步的说明，下述实施例仅用于说明本发明，对本发明并没有限制。
[0015]毛叶铁线莲的组培繁殖方法，该方法包括下列步骤:
[0016](1)外植体的选择:于4?7月采取生长健壮的毛叶铁线莲幼嫩茎段作外植体；
[0017](2)材料处理方法:先用软毛刷将毛叶铁线莲表面的灰尘轻轻刷去，用流水冲洗10分钟后用紫外灯照射lOmin，转入超净工作台，在超净工作台上先用70%的乙醇浸泡10秒，然后再转入滴加了 2?3滴土温80的0.1 %的升汞溶液中浸泡2-3min，再用无菌水冲洗3?4次,最后在无菌条件下分割材料,?段切割成0.4?0.6cm长；
[0018](3)初代培养:在无菌的条件下将步骤⑵得到的外植体接种在初代培养基上，该培养基是在3/4MS常规培养基中添加了 2.5mg/L的2，4_D、0.7mg/L的NAA、0.6mg/L的GA，PH 6.5，培养温度为21°C，光照周期13h/d，光强度为2100_23001ux，待培养14天左右后，新芽长至2.0cm左右时，即开始下一个阶段；
[0019](4)增殖培养:将初代培养的外植体新芽剪下接种在继代培养基上，该培养基是在 1/2MS 常规培养基中添加了 2.5mg/L 的 2，4_D、0.7mg/L 的 ΝΑΑ、0.6mg/L 的 GA, PH 6.5，培养温度为21°C，光照周期13h/d，光强度为2100-23001ux，待新芽长至2.0cm时，即开始下一个阶段；
[0020](5)生根培养:将继代培养的外植体新芽剪下接种在生根培养基上，该培养基是在MS常规培养基中添加了 2.0mg/L的IAA、0.8mg/L的NAA, 1.2mg/L的ΚΤ,ΡΗ 6.5，培养温度为24°C，光照周期13h/d，光强度为20001UX，待新苗长至2.0cm时，即开始下一个阶段；
[0021](6)炼苗移栽:先将培养瓶移至温室，自然条件下炼苗7d，然后解开封口膜，炼苗3d，炼苗期间适当遮光，使光照强度为自然光的40%，炼苗完成后取出小苗洗净根部附着的培养基，移栽到经消毒的重量比砻糠灰:珍珠岩:蛭石=1: 2: 2的混合基质中，温度控制在25°C，前5d湿度控制在80%左右，以后逐渐降低湿度，直至将移栽苗置于自然条件下。
[0022]经过上述步骤的培养，毛叶铁线莲的愈伤组织的萌动率达到了 98%，增殖倍数达到了 5.7倍，生根率达到了 100%，最终的成活率达到了 96%。
【权利要求】
1.一种毛叶铁线莲的组培繁殖方法，其特征在于该方法包括下列步骤: .(1)外植体的选择:于4?7月采取生长健壮的毛叶铁线莲幼嫩茎段作外植体； .(2)材料处理方法:先用软毛刷将毛叶铁线莲表面的灰尘轻轻刷去，用流水冲洗10分钟后用紫外灯照射lOmin，转入超净工作台，在超净工作台上先用70%的乙醇浸泡10秒，然后再转入滴加了 2?3滴土温80的0.1 %的升萊溶液中浸泡2-3min,再用无菌水冲洗3?4次，最后在无菌条件下分割材料，莖段切割成0.4?0.6cm长； .(3)初代培养:在无菌的条件下将步骤(2)得到的外植体接种在初代培养基上，该培养基是在3/4MS常规培养基中添加了 2.5mg/L的2，4_D、0.7mg/L的NAA、0.6mg/L的GA，PH6.5，培养温度为21°C，光照周期13h/d，光强度为2100-23001UX，待培养14天左右后，新芽长至2.0cm左右时，即开始下一个阶段； .(4)增殖培养:将初代培养的外植体新芽剪下接种在继代培养基上，该培养基是在1/2MS 常规培养基中添加了 2.5mg/L 的 2，4_D、0.7mg/L 的 NAA,0.6mg/L 的 GA，PH 6.5，培养温度为21°C，光照周期13h/d，光强度为2100-23001UX，待新芽长至2.0cm时，即开始下一个阶段； .(5)生根培养:将继代培养的外植体新芽剪下接种在生根培养基上，该培养基是在MS常规培养基中添加了 2.0mg/L的IAA、0.8mg/L的NAA, 1.2mg/L的KT, PH 6.5，培养温度为24°C，光照周期13h/d，光强度为20001UX，待新苗长至2.0cm时，即开始下一个阶段； .(6)炼苗移栽:先将培养瓶移至温室，自然条件下炼苗7d，然后解开封口膜，炼苗3d，炼苗期间适当遮光，使光照强度为自然光的40%，炼苗完成后取出小苗洗净根部附着的培养基，移栽到经消毒的重量比砻糠灰:珍珠岩:蛭石=I: 2: 2的混合基质中，温度控制在25 °C，前5d湿度控制在80 %左右，以后逐渐降低湿度，直至将移栽苗置于自然条件下。
【文档编号】A01H4/00GK104396750SQ201410657726
【公开日】2015年3月11日 申请日期:2014年11月18日 优先权日:2014年11月18日
【发明者】罗翼 申请人:罗翼