专利名称：一种蓝果树的快速繁殖方法
技术领域：
本发明涉及树木的育苗造林技术，具体地说是蓝果树的组织培养无性繁殖 方法。
背景技术：
蓝果树(Nyssa sinensis)别名紫树，为蓝果树科蓝果树属高大落叶乔木。 因其核果成熟时果皮呈深蓝色而得名。蓝果树喜光、喜酸性土壤，适应性强。 其树干通直，枝叶稠密，叶片宽大、艳丽，成熟果实呈美丽的深蓝色，是一种 集观赏与实用为一体的优良树种。目前该苗木的繁殖方法主要是种子繁殖。如 《现代农业科技》 2008年第24期 丽水市蓝果树野生资源调査及育苗造林技 术、《林业实用技术》2006年第4期'蓝果树及其栽培技术、《安徽林业》.2006 年第1期，乡土树种一一蓝果树及其栽培技术等对其繁殖方法均有基本相同的 表述。即将果实采摘后用碱水浸泡数日，然后搓去果皮,用清水将种子冲洗干净， 鲜果出籽率38%左右。蓝果树种壳十分坚硬，种子需用湿沙贮藏。蓝果树种子在 15。C以上开始萌动，以2(TC 30。C为好，播种方法采取点播为好，播种量40 kg/667 m2。蓝果树的种子出土很不整齐,播种前需用4(TC 5(TC的温水浸种2 4天，每天换水，以促进发芽整齐。蓝果树种子播后15d即开始发芽出土, 50d左 右基本出齐，种子发芽率约为25% 30%。 1年生苗平均地径达lcm以上，苗高 1.2 1.5m，每667m'2出苗量约2万株。由此可见，现有方法存在繁育期长，种 子发芽率低，繁殖后代变异大，繁殖受自然条件限制等诸多问题。
发明内容
本发明的目的就是要提供一种蓝果树的快速繁育苗木的方法，以克服现有 技术所存在的缺陷。
本发明的目的是这样实现的-
本发明所提供的蓝果树的快速繁殖方法，它包括以下步骤 a、外植体接种
取带腋芽嫩茎段或半木质化茎段，消毒处理5 8min，切成1. 0 1. 5cm的茎段，每段带1个腋芽(或顶芽)，接种在1/2MS+6-BA0.5 1.0mg.L、IBA0.05 0. ling. L—、蔗糖25g 30g. L/'+琼脂6g. L—'，P朋.0的培养基上;培养室温度为25 30。C。
取带腋芽嫩茎段或半木质化茎段， 一般可于4 9月进行。但以6月中旬或 9月中旬为优选时间段。在优选时间段进行采集，外植体成功率最高。 在消毒处理时，可采用84消毒液、HgCL消毒液，但以O. l%HgCl2 效果最好。该浓度的消毒液既可防止外植体褐化、不萌芽，又可提高外植体 的保存率。
经试验发现，蓝果树外植体萌发对CaCL较敏感，1/2MS (CaCl2全量)较 1/2MS (CaCl2半量)外植体萌发率提高30%左右，因此，外植体的优选培养基为 1/2MS (CaCl2全量)+6-BA1. Omg. L、IBA0. lmg. L、蔗糖30g. L—^琼脂6g. L—、
b、 增殖培养-
接种后，腋芽萌芽高1. 0-2. 0cm时，切下0. 3-0. 5cm芽丛块转入分化培养基中 进行增殖培养；培养温度25 30°C，光照时间10 12h，培养周期20 30d;
在25 3(TC条件下进行培养，可保证试管苗良好的生长态势和增殖率。
本发明发现，蓝果树较适宜基本培养基为MS培养基。附加适当浓度的6-BA、 IBA、 KT、 GA3可更有利于提高分化率，以及促进试管苗的生长。
分化培养基的优选配方为:MS+6-BA (1.0 2.0) mg.L、KT1.0mg.L、IBA (0. 1 0. 3) mg. L—'+蔗糖30g. L、琼脂6g. L—、
在该浓度范围内，6-BA 、 KT 、 IBA的相互作用，既可促进蓝果树试管苗 高生长，又可提高其增殖率；
在增殖培养中，光照强度可控制在1500Lx 4000Lx。但优选的光照强度为 2000Lx。该光照强度既有利于试管苗长势好、叶色绿、苗高生长量大，有利于 提高增殖系数。
在增殖培养连续继代15代后，进行需复壮；复壮培养基为MS+6-BA(0.5 1.0) mg丄"+IBA (0.2 0.5) mg丄"+蔗糖30g丄"+琼脂6g丄"。
c、 根诱导
取生长健壮、高l 3cm的试管苗单株，以1/2MS培养基为基础培养基，附 加不同浓度及其配比的NAA、 IBA、 IAA，进行蓝果树试管苗根诱导，培养室温度为20-25。C，光照强度为20001x--3000 lx，光照时间为10-12h/d;
优选的根诱导培养基为1/2MS+NAA (0. 2 0. 5) mg. L、IAAO. 5mg. L—^蔗糖 30g. L、琼脂6g. L^或1/2MS+NAA (0. 2 0. 5) mg. L—'+IBAO. 2mg. L—'+蔗糖30g. L—^ 琼脂6g, L—'。
d、炼苗移栽
待试管苗形成发达根系后，开瓶炼苗3 5d，取出苗后清洗、消毒，移植到 栽培基质中，上罩塑料薄膜3-5d后，撤去塑料薄膜，适时叶面喷水，保持18 25°C，相对湿度80% 90%。
上述培养基中6-BA为细胞分裂素卞氨基嘌呤，IBA为生长素喷哚丁酸，NAA 为生长素萘乙酸，IAA为生长素吲哚乙酸，KT为细胞分裂素6-糠氨基嘌呤。
本发明方法具有以下有益效果
(1) 本发明方法有利于保存种源与变异，并保持了蓝果树的优良性状以及 苗木的一致性。
(2) 本发明方法实现了工厂化育苗。具有快速、大量繁殖优系品种的优势。 试验表明，本发明方法在6 7个月内，即可大批量生产出整齐一致的蓝果
树苗木。本发明方法一年除去外植体启动和生根炼苗85天，每年可增殖周期数 为(365-85) /28=10,按每周期不定芽最低增值芽数为4计算， 一个营养芽年 可繁殖苗木41()=105万株。
(3) 本发明方法的繁殖系数达5倍以上，远远高于播种繁殖方法，且能保 持苗木的整齐一致性。
以下通过具体实施例对本发明作进一步的详述，但并不以此对本发明进行 任何限制。
具体实施例方式
实施例 (一) 外植体接种
于4-9月每月中旬进行一次以带腋芽嫩茎段、半木质化茎段为外植体的接种 试验，采用20%84消毒液处理10 30min、 75%酒精10 30s+0. 1WHgCl2浸消毒处 理5 8分钟或0. l%HgCl2浸消毒处理5 8分钟；培养基为 1/2MS+6-BA1. Omg. L—'+IBA0. lmg. L—'+蔗糖30g. L、琼脂6g. L_'。 PH值6. 0。结果表明-
嫩茎段、半木质化茎段芽萌发率可达81.8% 100%。其中以6月中旬和9 月中旬接种的外植体成功率最高。
20% 84消毒液对蓝果树外植体消毒效果相对较差，外植体保存率为 76.9%; 75%酒精不利于芽萌发；0. P/。HgCl2灭菌效果相对最好，其外植体保存率 可达91.7%。
蓝果树外植体萌发对CaCL较敏感，1/2MS (CaCl2全量)较1/2MS (CaCl2 半量)外植体萌发率提高30%左右。外植体启动培养以1/2MS (CaCl2全量) +6-BA1. Omg. L—+IBA0. lmg. L、蔗糖30g. L-'+琼脂6g. L-'， PH值6. 0的培养基最为 适宜。
外植体接种较为优选的实施例为
采带腋芽嫩茎段或半木质化茎段，剪去叶片，先在自来水下用毛刷洗去表 面尘土，再切成长约2cm的茎段，每个茎段带1-2个腋芽。然后用流水冲洗2-3 h，放在超净工作台上，先用无菌水冲洗3次，再用O. ly。HgCL溶液消毒5-8min， 无菌水冲洗6-8次后，用无菌纸吸干材料表面的水分，切成l.O-1.5cm的茎段， 每段带1个腋芽(或顶芽)，接种在1/2MS ( CaCl2全量) +6-BA1. Omg. L_1+IBA0. lmg. L、蔗糖30g. L、琼脂6g. L—1， PH6. 0的培养基上。培 养室温度为23-25。C，光照强度为2000Lx，光照时间为12h/d(7:00-19:00)。
该实施例的外植体保存率为91. 1%，芽萌发率为100%。 (二) 增殖培养
茎段接种7-14天后腋芽萌发，约20 25天，萌芽高1.0 2.0cm时，切下 转入分化培养基中进行增殖培养。
增殖培养初试培养基釆用MS、 WPM和B5三种基础培养基，附加1.0 mg. 1/6-BA+0.2 mg. L—'旧A。实验表明，蓝果树较适宜于MS培养基。以MS培养 基为基础培养基，附加不同浓度的6-BA、 IBA、 KT、 GA3等进行增殖培养试验。 在光照强度分别为1500Lx、 2000Lx、 3000Lx、 4000Lx，光照时间分别为10h、 12h、 14h、 16h;培养温度分别为20±2°C、 23±2°C、 25±2°C、 28±2°C，每处 理7 10瓶，每瓶接种6块，25 30d继代一次。用同一种培养基连续继代培养 5代，调査每一代的苗高、分化率、苗长势等。试验结果表明生长素与细胞分裂素的用量配比对蓝果树试管苗增殖有显
著影响。KT与6-BA配合使用，可促进蓝果树试管苗生长点增殖，增殖率可比单 独使用6-BA提高21.2%;试管苗在6-BA (1.0 2. 0) mg, L—l+KTl. Omg. L、IBA (0. 1 0. 3) mg. L—1的培养基中平均增殖率为5. 23倍。连续继代10代试管苗仍 保持4.5倍以上的增殖率，且生长正常。
蓝果树试管苗对光照非常敏感，其适宜光强和光照时间范围很窄，在光照 条件为光强2000Lx 3000 Lx，光照时间12h/d时，增殖系数在4 6倍，单块 芽丛约30个单株，生长正常；当光强过弱时，长势弱，矮小，生长点呈丛生状， 叶色淡绿，且有玻璃苗现象，连续继代有芽丛枯萎死亡现象。当光强〉3000Lx, 虽然试管苗长势良好，叶色浓绿，苗高生长量大，但试管苗平均增殖系数仅为2 倍左右。
蓝果树试管苗在高温(25 3CTC)条件下生长正常，增殖率高。当温度过 低时，其叶片巻曲，生长缓慢。
接种0.3 0.5cm芽丛块，生长分化良好；当芽丛块过小时，试管苗枯死率 高，存活者生长缓慢，增殖率低；当芽丛块过大时，接种后芽丛有枯死腐烂现 象。
增殖培养较为优选的实施例为
切取0.3-0.5cm大小的芽丛块，将生长旺盛的芽丛接种于MS+6-BA (1.0 2. 0) mg. l/'+KTl. Omg. L—'+IBA (0. 1 0, 3) mg.匚'+蔗糖30g. L、琼脂6g. 「'培养 基上，在光强2000Lx，光照时间12h条件下，培养25d左右，增殖率达5倍以 上，连续继代10代，试管苗均生长正常，保持较高增殖率。连续继代15代后 试管苗长势变弱，甚至有枯死现象，需复壮，复壮适宜培养基为MS+6-BA(0.5 1.0) mg.L—'+IBA (0.2 0. 5) mg, L—'+蔗糖30 g. L—'+琼脂6g. L—1。 (三)根诱导
取生长健壮、高2cm左右的蓝果树试管苗单株，以1/2MS培养基为基础培 养基，附加不同浓度、不同配比的NAA、 IBA、 IAA，进行蓝果树试管苗生根培养 试验，每处理接种10瓶，每瓶接6株。随时观察生根情况，并统计培养30d后 的根量、根长(统计0.5cm以上所有根的数量、长度，取平均值)。培养室温度 为20 25。C,光照强度为20001x，光照时间为10 12h/d。接种10d时，试管苗开始生根，15 20d时根长约2 3cm，有侧根生出，30d时形成较发达根系。 试验表明，单纯使用IBA、 NAA或IAA效果均不理想，其或生根率低；或生 根率虽理想，但根系不发达。
本发明采用以1/2MS培养基为基础培养基，附加NAA (0.2 0.5) mg. L_1+IAAO. 5mg. L—'和歸(0. 2 0. 5) mg. L—'+IBAO. 2mg. L—1进行根诱导处理, 其生根率达100°/。，且根系发达。平均根数8.6 9.7条，平均根长6.5 7.0cm， 侧根量多，试管苗生长良好，基部愈伤块较小，非常有利于试管苗移栽成活。 根诱导较为优选的实施例为-
待诱导芽在培养基上长到2cm左右时，从基部切下，接种于1/2MS+NAA(0. 2 0. 5) mg. L、IAA0. 5mg. L—'+蔗糖30g. L—1+琼脂6g. LT1或1/2MS+NAA (0. 2 0. 5) mg. L—l+IBA0. 2mg. L—、蔗糖30g. L—^琼脂6g. L—1培养基上。培养室温度为20 25 °C，光照强度为20001x,日照时间为10 12h/d条件下，接种30d后可形成发 达根系。 (四)炼苗移栽
待试管苗形成发达根系后，开瓶炼苗3 5天，取出苗后用自来水把培养基 冲洗干净，用多菌灵1000倍液浸泡0.5h，取出移植到用蛭石、珍珠岩、草炭等 复配的基质中，上罩塑料薄膜，5d后撤去塑料薄膜，适时叶面喷水，保持18 25°C，相对湿度80%-90%, 7 10d喷一次杀菌剂。20d后成活率在95%以上，可 移入营养杯或大田。
权利要求
1、一种蓝果树的快速繁殖方法，其特征在于它包括以下步骤a、外植体接种取带腋芽嫩茎段或半木质化茎段，消毒处理5～8min，切成1.0～1.5cm的茎段，每段带1个腋芽或顶芽，接种在1/2MS+6-BA0.5～1.0mg.L-1+IBA0.05～0.1mg.L-1+蔗糖25～30g.L-1+琼脂6g.L-1，PH6.0的培养基上；培养室温度为23～25℃；b、增殖培养接种后，腋芽萌芽高1.0～2.0cm时，切下芽丛块接种于分化培养基中进行增殖培养；光照时间12h，培养周期20～30d；c、根诱导取生长健壮、高1～3cm的试管苗单株，以1/2MS培养基为基础培养基，附加NAA、IBA、IAA混合液，进行蓝果树试管苗根诱导，培养室温度为20～25℃，光照强度为2000lx～3000lx，光照时间为10～12h/d；d、炼苗移栽待试管苗形成发达根系后，开瓶炼苗3～5d，取出苗后清洗、消毒，移植到栽培基质中，上罩塑料薄膜3～5d后，撤去塑料薄膜，适时叶面喷水，保持18～25℃，相对湿度80％～90％。
2、 根据权利要求1所述的蓝果树的快速繁殖方法，其特征在于所述的外植 体接种的培养基为的1/2MS，其中的CaCl2全量，+6-BA1.0mg.L、IBA0. lmg.L—'+ 蔗糖30g, L—'+琼脂6g. L一1。
3、 根据权利要求1所述的蓝果树的快速繁殖方法，其特征在于所述的增殖 培养的光照强度为2000Lx 3000Lx。
4、 根据权利要求1所述的蓝果树的快速繁殖方法，其特征在于所述的增殖 培养的培养基为MS+6-BAL 0 2. Omg. L、KT1. Omg. L"+IBA0. 1 0. 3mg. L—^蔗糖 30g. L、琼脂6g. L-、
5、 根据权利要求1所述的蓝果树的快速繁殖方法，其特征在于所述的增殖 培养，切下0. 3 0. 5cm芽丛块接种于分化培养基中进行增殖培养。
6、 根据权利要求4所述的蓝果树的快速繁殖方法，其特征在于所述的增殖培养其连续继代15代后，进行复壮；复壮培养基为MS+6-BA0.5 1.0mg丄"+IBA0.2 0.5mg丄-'+蔗糖30g丄"+琼脂6g丄"。
7、 根据权利要求1或2所述的蓝果树的快速繁殖方法，其特征在于所述的 根诱导培养基为l/SMS+NAACO.S-O.SJmgl^+IAAO.Sm^L-1或IBA0.2mg丄"十 蔗糖30g丄"+琼脂6g丄"。
8、 根据权利要求1所述的蓝果树的快速繁殖方法，其特征在于所述的取带 腋芽嫩茎段或半木质化茎段的采集时间为6月中旬或9月中旬。
9、 根据权利要求l所述的蓝果树的快速繁殖方法，其特征在于外植体接种 中的消毒方式为0.线HgCl2浸5 8min。
全文摘要
本发明公开了一种蓝果树的快速繁殖方法，它包括以下步骤a.外植体接种；b.增殖培养；c.根诱导；d.炼苗移栽。本发明方法有利于保存种源与变异，并保持了蓝果树的优良性状以及苗木的一致性。具有快速、大量繁殖优系品种的优势。本发明方法在6-7个月内，即可大批量生产出整齐一致的蓝果树苗木。
文档编号A01H4/00GK101564010SQ200910074248
公开日2009年10月28日 申请日期2009年4月29日 优先权日2009年4月29日
发明者曹福亮, 君 毕, 王春荣 申请人:河北省林业科学研究院