专利名称：日本红枫的组织培养快繁方法
技术领域：
本发明涉及一种组织培养方法，更具体的说涉及一种日本红枫的组织培养快繁方法。
背景技术：
日木红枫"c"; "/OTdrft/m加raiEwpwrraw)是槭树科槭树属落叶小乔木，为鸡爪槭的变种，原产地为日本和韩国。因其树型小巧精致，叶片掌状且叶裂深浅多样以及艳丽的红色而闻名。日本红枫生长速度比普通国产红枫快的多，叶片颜色更鲜艳，耐寒性更强，因此在园林景观彩叶植物中，日本红枫是应用最为广泛的槭树科品种之一。
闩本红枫的现有的繁殖方法主要是种子繁殖和嫁接法。种子繁殖对培育条件要求苛刻，且耗时较长。嫁接法，秋季采用芽接，春季则用枝接。以l-2年生健壮实生苗亲和力较强的育枫为砧木，以落地嫁接为宜。接穗采用种子繁殖方式获得，但由其播种繁殖变异大，生长缓慢，且不易扦插成活，远不能满足嫁接需求，严重制约了日本红枫的推广。
发明内容
基本培养基和组培各阶段培养基由以下配方组成
1) 基本培养基选用WPM为培养基，pH5 6，蔗糖20 40%，琼脂6 10g/L;
2) i秀导培养基WPM+0.05 0.2mg/L TDZ+0.0.05 0.2mg/L BA;4)增殖培养基:WPM+0.1 0.3mg/L TDZ+0.05 0.3mg/L BA;
5 )生根培养基WPM+0.1 0.6mg/L 1BA+0.1 0.6mg/L NAA。基本培养基和组培各阶段培养基的具体配方为
1) 基本培养基以WPM为基本培养基,蔗糖30g/L,琼脂7g/L,pH5.8;
2) 诱导培养基WPM+0.1mg/LTDZ+0.1mg/LBA;
3) 增殖培养基WPM+0.2mg/LTDZ十0.1mg/LBA;
4) 生根培养基WPM+0.3mg/L IBA+0.32mg/L NAA。
外植体的选取与表面灭菌是选取日本红枫实生苗的幼嫩枝，去叶，切取带有腋芽的茎
段，经NaClO表面灭菌处理后，作为组培用的外植体。
诱导培养是无菌条件下将表面灭菌处理的茎段的切口变褐处切除，迅速将腋芽茎段的
芽向上接种在诱导培养基上，在常温光照培养条件下，诱导腋芽萌发，然后分化丛生芽，得到单株芽。
增殖培养是将单株芽接入增殖培养基屮，在常温光照培养条件下，每2月继代培养1次。
生根培养是将所得单株芽中2-3cm以上的有效苗切割下来，除去周围的小芽及组织，接种到生根培养基中，在生根光照培养条件下培养l-2周，得到组培苗。
炼苗移栽是当生根的组培苗生长到3-5cm以上时，将培养罐开盖，进行炼苗l-2周，炼苗后将组培苗上残留的培养基洗净，植入园土腐叶土砂土=2: 2: 1的培养土中。常温光照培养条件是:温度为25i2。C、光照14h/D、光照强度2500-3000Lnx;生根光照培养条件是:温度为22士2。C、光照8h/D、光照强度为2500-3000Lux。本发明的有益技术效果是利用无性繁殖技术对种苗培育方面的传统方式行了改进。在人工制造的优化环境里，促进细胞的快速分裂和繁殖；使用优化基因组合技术，解决了种苗体质优化的难题。并且可以把植物中各种优良种性，如抗寒、抗旱、抗病、抗虫以及快速生长等进行移植和优化组合，创造出新型的优良品种，组培苗生根率达95%以上，移栽成活率达85%以上。采用该技术特别适用于母本材料少，急需大量商品苗，且原先需嫁接红枫品种。通过多代循环技术后，还能使生根时间大大縮短，这与植物的童性或幼性得到激发有直接的关系。正确理解与运用快繁技术，对于加快新品种扩繁，降低种苗成本意义巨大。
具体实施例方式
a、 外植体选择与表面灭菌剪取日本红枫优良实生苗幼嫩枝，切取带有腋芽的茎段，将含腋芽的茎段在清水冲洗lh;然后外植体经75%酒精浸泡40s，冉用体积比为3。/。NaC10溶液浸泡15min，最后用灭菌蒸馏水冲洗4 5次后作为组培的外植体待用；
b、 诱导培养无菌条件下将外植体切n变褐处切除，迅速将腋芽茎段的芽向上接入
WPM+0.1mg/LTDZ+0.1mg/LBA诱导培养基上，诱导腋芽萌发，然后分化丛生芽；培养条件为温度为25士2。C、光照14h/D、光照强度2500-3000Lux;
c、 增殖培养在无菌条件下将丛生芽切成单株接入WPM+0.2mg/LTDZ+0.1mg/LBA增殖培养基中进行增殖培养，继续分化丛生芽，扩大增殖系数；每2月继代培养1次。培养条件为温度为25士2。C、光照14h/D、光照强度2500-3000 Lux;
d、 生根培养将单株芽生长到2-3 cm时，将组培苗接种到WPM+0.3mg/L IBA+0.32mg/L NAA生根培养基中培养l-2周，诱导生根，生根率可达95°/。以上。培养条件为温度为22士2t:、光照8h/D、光照强度为2500-3000Lux;
e、 组培苗炼苗当生根的组培苗生长到3-5cm以上时，将培养罐开盖，进行炼苗l-2周，选取生长良好的进行移栽；
f、 移栽将组培苗上残留的培养基洗净，植入园土腐叶土砂土=2: 2: l的培养土中，成
活率达85%以上。
权利要求
1、日本红枫的组织培养快繁方法，包括基本培养基、外植体的选取与灭菌、诱导培养、增殖培养、生根培养和炼苗移栽六个步骤，其特征在于基本培养基和组培各阶段培养基由以下配方组成1)基本培养基选用WPM为培养基，pH5～6，蔗糖20～40％，琼脂6～10g/L；2)诱导培养基WPM+0.05～0.2mg/L TDZ+0.0.05～0.2mg/L BA；4)增殖培养基WPM+0.1～0.3mg/L TDZ+0.05～0.3mg/L BA；5)生根培养基WPM+0.1～0.6mg/L IBA+0.1～0.6mg/L NAA。
2、 根据权利要求l所述的日本红枫的组织培养快繁方法，其特征在于基本培养基和组 培各阶段培养基的配方为1) 基本培养基以WPM为基本培养基，蔗糖30g/L，琼脂7g/L， pH5.8;2) 诱导培养基WPM+0.1mg/LTDZ+0.1mg/LBA;3) 增歹直培养基WPM+0.2mg/LTDZ+0.1mg/LBA;4) 生根培养基WPM+0.3mg/LIBA+0.32mg/LNAA。
3、 根据权利要求l所述的日本红枫的组织培养快繁方法，其特征在于外植体的选取与表面灭菌是选取日本红枫实生苗的幼嫩枝，去叶，切取带有腋芽的茎段，经NaC10表面灭菌处理后，作为组培用的外植体。
4、 根据权利要求1所述的R本红枫的组织培养快繁方法，其特征在丁诱导培养是无 菌条件下将表面灭菌处理的茎段的切口变褐处切除，迅速将腋芽茎段的芽向上接种在诱导培 养基上，在常温光照培养条件下，诱导腋芽萌发，然后分化丛生芽，得到单株芽。
5、 根据权利要求l所述的日本红枫的组织培养快繁方法，其特征在于增殖培养是将 单株芽接入增殖培养基中，在常温光照培养条件下，每2月继代培养1次。
6、 根据权利要求1所述的R本红枫的组织培养快繁方法，其特征在丁生根培养是将所得单株芽中2-3cm以t的有效苗切割下来，除去周围的小芽及组织，接种到生根培养基中， 在生根光照培养条件下培养l-2周，得到组培苗。
7、 根据权利要求l所述的日本红枫的组织培养快繁方法，其特征在于炼苗移栽是当生根的组培苗生长到3-5cm以上时，将培养罐开盖，进行炼苗l-2周，炼苗后将组培苗上残留的培养基洗净，植入园上腐叶土砂土=2: 2: l的培养土中。
8、 根据权利要求4和权利要求5所述的日日本红枫的组织培养快繁方法，其特征在于 常温光照培养条件是:温度为25i2'C、光照14h/D、光照强度2500-3000Lux 。
9、 根据权利要求6所述的日本红枫的组织培养快繁方法，其特征在于生根光照培养条件是:温度为22±2°C、光照8h/D、光照强度为2500-3000Lux。
全文摘要
本发明涉及一种日本红枫的组织培养快繁方法，该方法是由外植体的选取与灭菌、最佳的诱导培养基和生长培养基、制备无菌苗、芽的增殖、增殖生长、生根培养和炼苗移栽六个主要步骤，获得到大量种苗。本发明的有益技术效果是利用无性繁殖技术对种苗培育方面的传统方式行了改进。在人工制造的优化环境里，解决了种苗体质优化的难题。并且可以把植物中各种优良种性，如抗寒、抗旱、抗病、抗虫以及快速生长等进行移植和优化组合，创造出新型的优良品种，组培苗生根率达95％以上，移栽成活率达85％以上。使生根时间大大缩短，这与植物的童性或幼性得到激发有直接的关系。对于加快新品种扩繁，降低种苗成本意义巨大。
文档编号A01H4/00GK101578963SQ20091010405
公开日2009年11月18日 申请日期2009年6月10日 优先权日2009年6月10日
发明者刘万宏, 戴传云, 朱蠡庆, 楠 陈, 笈 陈 申请人:重庆科技学院