专利名称：一种蓝靛果忍冬幼茎愈伤组织植株再生诱导培养基的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种蓝靛果忍冬愈伤组织植株再生诱导培养基。
背景技术：
蓝靛果忍冬(Lonicera caerulea)，别名蓝靛果，俗称山茄子、羊奶子、黑瞎子果 等，为多年生落叶小灌木，是东北亚地区特有小桨果之一，其分布区域主要在俄罗斯、朝鲜 北部、日本和中国东北的大小兴安岭、长白山、张广才岭等林区。蓝靛果忍冬是继黑穗醋栗、树莓、越橘之后的又一种新兴的小浆果，主要生长在林 中湿地或林缘、沼泽草甸，要求弱酸的土壤，上部枝条耐-40°C以上低温，适应性较强。蓝靛果忍冬果实具有较高的营养保健价值，富含糖类、有机酸、矿物质、维生素等 成分。所含17种氨基酸的总量高于普通水果，其中必需氨基酸占总量40%左右；矿质元素 中锌、硒、铁、钙含量较高；果实可鲜食，也可加工成饮料、果酱、果糕和果酒等；另外，茎叶 和果实又可提取天然紫红色素。近年来随着蓝靛果忍冬市场需求不断增长，其鲜果价格也不断增高，近4年来由 每公斤4元涨到每公斤10 15元，速冻果市场价格增至9500元/吨，浓缩汁国际市场价 格为6. 0 8. 0万元/吨，饮品销售价为5 10元/瓶，市场供不应求。随着对野生蓝靛果饮料、果酒、色素等产品开发，掠夺式采收导致野生资源锐减， 加之资源分布有限，难以满足日益增长的市场需求，因此开展人工抚育与栽培十分必要。而 制约人工栽培的主要问题是种苗繁殖困难，生产上主要采用扦插与分根、种子实生苗繁殖 种，前者繁殖系数低，成活率不高，且破坏野生资源；后者种苗变异性较大，影响果实的品 质与产量，且因种子粒小，成苗困难，育苗技术难度大。通过组织培养快速繁殖可以解决上 述问题，国内植物组培快繁一般采用MS培养基，但因培养植物种类、取材时期、培养部位不 同，其效果也不同。目前国内有关蓝靛果忍冬组培方面的报道较少，主要采取腋芽或茎尖 培养，但效果不理想，尚没有直接分化芽丛的报道，需通过愈伤诱导植株，植株分化率不足 30%，且未见在生产上应用。
发明内容
本发明的目的是为了解决现有蓝靛果忍冬的组织培养主要采取腋芽或茎尖培养， 存在植株分化率低及培养基成本高的问题，本发明提供了一种蓝靛果忍冬幼茎愈伤组织植 株再生诱导培养基。本发明蓝靛果忍冬幼茎愈伤组织植株再生诱导培养基，是由大量元素、微量元素 和激素组成，其中所述大量元素由浓度为900 920mg/L的NH4N03、90 100mg/L的ΚΗ2Ρ04、 1000 1050mg/L 的 KNO3>240 250mg/L 的 CaCl2 · 2H20、200 210mg/L 的 MgSO4 · 7H20 和15 18mg/L的EDTA-Fe组成，所述微量元素由浓度为0. 83mg/L的KI、22. 3mg/L的 MnSO4 ·4Η20、6· 2mg/L 的 Η3Β03、8· 6mg/L 的 ZnSO4 ·7Η20、0· 025mg/L 的 Na2MoO4 ·2Η20、0· 25mg/ L的CuSO4 ·5Η20和0. 025mg/L的CoCl2 ·6Η20，所述激素由浓度为1. 0 2. Omg/L的6-苄基氨基嘌呤(6-BA)或者激动素(KT)和0. 05 0. 2mg/L的吲哚丁酸(IBA)或者萘乙酸(NAA) 组成。本发明在六月初(六月一号至六号)蓝靛果忍冬生长盛季采集其幼茎，用70% (体积)酒精浸泡10s，无菌水冲洗3遍，再用0. (质量)升汞液消毒8min，再无菌水冲 洗3 5遍；接种至培养基时将蓝靛果忍冬幼茎两端剪去，接种于本发明的LD1培养基表面； 培养条件为培养温度M ，光照时间14 16h/d，光照强度1800 20001x，20 30 天继代一次。本发明的蓝靛果忍冬幼茎愈伤组织植株再生诱导培养基(记为LD1培养基)中 无机盐(大量元素和微量元素)含量是2483. 23 2586. 23mg/L,较佳的无机盐含量是 2534. 73mg/L,与现有MS培养基中无机盐含量0604. 005mg/L)的质量浓度比为1 1. 85 1.78，较佳的比值为1 1.82，即现有MS培养基所含无机盐浓度是本发明的LD1培养基所 含无机盐浓度的1. 85 1. 78倍。本发明的LD1培养基中无机盐的浓度低于现有MS培养 基所含无机盐浓度，在MS培养基的基础上将大量元素的用量进行了调整，降低了 N03_、Mg2+、 铁元素浓度；微量元素中硫酸铜用量为MS培养基的10倍，同时含有微量的Mo，其参与氨基 酸合成与代谢，有促进器官形成的作用。本发明合理降低培养基无机盐的含量，有利于分化培养，而高浓度无机盐抑制愈 伤组织植株的再生，尤其是磷镁含量越高、比值越大其抑制作用越明显；微量元素铜含量的 增加可促进愈伤组织健康生长及胚状体的产生。利用本发明的LD1培养基进行蓝靛果忍冬 幼茎培养，蓝靛果忍冬幼茎很容易被诱导形成愈伤组织，愈伤组织诱导率均可达到90%以 上；再将诱导出的淡绿色愈伤组织转接至本发明的LD1培养基上进行继代与分化培养，愈 伤组织诱导成植株的几率高，再生植株诱导率(即植株分化率)可达50% 82%，比现有 MS培养基的植株分化率(30%)提高了 66.6% 173.3%，比对照MS培养基节约投入成本 45. 1%。本发明解决了蓝靛果忍冬在繁殖方面解决了一系列组培难题，通过幼茎培养诱导 出愈伤组织及再生植株，而且种性一致性强，经组培苗移栽植株生长与结果性状测定，种性 纯度98%以上，且能够达到快速繁殖优良种苗的目的，并已在生产中得到推广应用，推广面 积达到100余亩，表现出高度一致性和丰产性。本发明的LD1培养基配制方法与常规培养基配制方法相同，但配方要求严格，各种 组分中元素与激素一定要在其浓度范围内进行配制。
具体实施例方式本发明技术方案不局限于以下所列举具体实施方式
，还包括各具体实施方式
间的 任意组合。
具体实施方式
一本实施方式为蓝靛果忍冬幼茎愈伤组织植株再生诱导培养基， 培养基是由大量元素、微量元素和激素组成，其中所述大量元素由浓度为900 920mg/L的 NH4NO3>90 100mg/L 的 KH2PO4UOOO 1050mg/L 的 KNO3>240 250mg/L 的 CaCl2 · 2H20、 200 210mg/L的MgSO4 · 7H20和15 18mg/L的EDTA-Fe组成，所述微量元素由浓度为 0. 83mg/L 的 KI、22. 3mg/L 的 MnSO4 ·4Η20、6· 2mg/L 的 Η3Β03、8· 6mg/L 的 ZnSO4 ·7Η20、0· 025mg/ L 的 Na2MoO4 · 2H20、0. 25mg/L 的 CuSO4 · 5H20 和 0. 025mg/L 的 CoCl2 · 6H20，所述激素由浓度为1. 0 2. Omg/L的6-苄基氨基嘌呤(6-BA)或者激动素(KT)和0. 05 0. 2mg/L的吲哚 丁酸(IBA)或者萘乙酸(NAA)组成。本实施方式的蓝靛果忍冬幼茎愈伤组织植株再生诱导培养基(记为LD1培养基)， 合理降低培养基无机盐的含量，有利于分化培养，而高浓度无机盐抑制愈伤组织植株的再 生，尤其是磷镁含量越高、比值越大其抑制作用越明显；微量元素铜含量的增加可促进愈伤 组织健康生长及胚状体的产生。利用本实施方式的LD1培养基进行蓝靛果忍冬幼茎培养， 愈伤组织诱导率均可达到90%以上，再生植株诱导率(即植株分化率)可达50%以上，比 对照MS培养基节约投入成本45. 1%。其中，愈伤组织诱导率指植株茎段组培后能够诱导出 愈伤组织的的比率；再生植株诱导率(即植株分化率)是指诱导出的愈伤组织能够分化出 植株的比率。本实施方式的LD1培养基通过幼茎培养诱导出愈伤组织及再生植株，种性一致性 强，经组培苗移栽植株生长与结果性状测定，种性纯度98%以上，且能够达到快速繁殖优良 种苗的目的，并已在生产中得到推广应用，推广面积达到100余亩，表现出高度一致性和丰 产性。本实施方式的LD1培养基配制方法与常规培养基配制方法相同，但配方要求严格， 各种组分中元素与激素一定要在其浓度范围内进行配制。
具体实施方式
二 本实施方式与具体实施方式
一不同的是所述大量元素由浓度为 91 Omg/L 的 NH4N03、95mg/L 的 KH2PO4、1025mg/L 的 KN03、M5mg/L 的 CaCl2 · 2H20、205mg/L 的 MgSO4 · 7H20和16. 5mg/L的EDTA-Fe组成。其它参数与具体实施方式
一相同。本实施方式的蓝靛果忍冬幼茎愈伤组织植株再生诱导培养基(记为LD1培养基) 中无机盐(大量元素和微量元素)含量是2534. 73mg/L,与现有MS培养基中无机盐含量 (4604. 005mg/L)的质量浓度比为1 1.82。本实施方式的蓝靛果忍冬幼茎愈伤组织植株再生诱导培养基合理降低培养基无 机盐的含量，有利于分化培养，而高浓度无机盐抑制愈伤组织植株的再生，尤其是磷镁含量 越高、比值越大其抑制作用越明显；微量元素铜含量的增加可促进愈伤组织健康生长及胚 状体的产生。利用本实施方式的LD1培养基进行蓝靛果忍冬幼茎培养，愈伤组织诱导率均 可达到90%以上，再生植株诱导率(即植株分化率)可达58%以上，比对照MS培养基节约 投入成本45. 1%0具体实施方式
三本实施方式与具体实施方式
一或二不同的是所述激素由浓度为
1.0 2. Omg/L的6-苄基氨基嘌呤(6-BA)和0. 1 0. 2mg/L的吲哚丁酸(IBA)组成。其 它参数与具体实施方式
一或二相同。本实施方式的蓝靛果忍冬幼茎愈伤组织植株再生诱导培养基进行蓝靛果忍冬幼 茎培养，愈伤组织诱导率均可达到90%以上，再生植株诱导率(即植株分化率)可达65% 以上，比对照MS培养基节约投入成本45. 1%。
具体实施方式
四本实施方式与具体实施方式
一或二不同的是所述激素由浓度为
2.Omg/L的6-苄基氨基嘌呤(6-BA)和0. 2mg/L的吲哚丁酸(IBA)组成。其它参数与具体 实施方式一或二相同。本实施方式的蓝靛果忍冬幼茎愈伤组织植株再生诱导培养基进行蓝靛果忍冬幼 茎培养，愈伤组织诱导率均可达到90%以上，再生植株诱导率(即植株分化率)可达82%，比对照MS培养基节约投入成本45. 1 %。
具体实施方式
五本实施方式与具体实施方式
一或二不同的是所述激素由浓度为
1.0 2. Omg/L的激动素(KT)和0. 05 0. lmg/L的萘乙酸(NAA)组成。其它参数与具体 实施方式一或二相同。本实施方式的蓝靛果忍冬幼茎愈伤组织植株再生诱导培养基进行蓝靛果忍冬幼 茎培养，愈伤组织诱导率均可达到90%以上，再生植株诱导率(即植株分化率)可达56% 以上，比对照MS培养基节约投入成本45. 1%。
具体实施方式
六本实施方式与具体实施方式
一或二不同的是所述激素由浓度为
2.Omg/L的激动素(KT)和0. 05mg/L的萘乙酸(NAA)组成。其它参数与具体实施方式
一或 二相同。本实施方式的蓝靛果忍冬幼茎愈伤组织植株再生诱导培养基进行蓝靛果忍冬幼 茎培养，愈伤组织诱导率均可达到90%以上，再生植株诱导率(即植株分化率)可达78%， 比对照MS培养基节约投入成本45. 1 %。
具体实施方式
七本实施方式与具体实施方式
一至六之一不同的是蓝靛果忍冬幼 茎愈伤组织植株再生诱导培养基培养蓝靛果忍冬幼茎的培养条件是培养温度24 26°C， 光照时间14 16h/d，光照强度1800 20001x，20 30天继代一次。其它参数与具体实 施方式一至六之一相同。
具体实施方式
八本实施方式与具体实施方式
一至七之一不同的是蓝靛果忍冬幼 茎接种至蓝靛果忍冬幼茎愈伤组织植株再生诱导培养基之前，需要对蓝靛果忍冬幼茎进行 如下处理在六月一日至六月六日采集蓝靛果忍冬幼茎，用70% (体积)酒精浸泡10s，无 菌水冲洗3遍，再用0. 1 % (质量)升汞液消毒8min，然后再用无菌水冲洗3 5遍，然后 在接种至培养基时将经上述处理后的蓝靛果忍冬幼茎两端剪去，再接种于蓝靛果忍冬幼茎 愈伤组织植株再生诱导培养基表面。其它参数与具体实施方式
一至七之一相同。本实施方式中无菌水为市售产品。
具体实施方式
九本实施方式为蓝靛果忍冬幼茎愈伤组织植株再生诱导培养 基，培养基是由大量元素、微量元素和激素组成，其中所述大量元素由浓度为910mg/L的 NH4NO3>95mg/L 的 KH2PO4、1025mg/L 的 KN03、245mg/L 的 CaCl2 · 2H20、205mg/L 的 MgSO4 · 7H20 和16. 5mg/L的EDTA-Fe组成，所述微量元素由浓度为0. 83mg/L的KI、22. 3mg/L的 MnSO4 ·4Η20、6· 2mg/L 的 Η3Β03、8· 6mg/L 的 ZnSO4 ·7Η20、0· 025mg/L 的 Na2MoO4 ·2Η20、0· 25mg/ L的CuSO4 · 5H20和0. 025mg/L的CoCl2 · 6H20，所述激素由浓度为1. Omg/L的6-苄基氨基 嘌呤(6-BA)和0. 05mg/L的吲哚丁酸(IBA)组成。本实施方式的蓝靛果忍冬幼茎愈伤组织植株再生诱导培养基进行蓝靛果忍冬幼 茎培养，愈伤组织诱导率均可达到90%以上，再生植株诱导率(即植株分化率)可达58%， 比对照MS培养基节约投入成本45. 1 %。
具体实施方式
十本实施方式与具体实施方式
九不同的是所述激素由浓度为 1. Omg/L的6-苄基氨基嘌呤(6-BA)和0. lmg/L的吲哚丁酸(IBA)组成。本实施方式的蓝靛果忍冬幼茎愈伤组织植株再生诱导培养基进行蓝靛果忍冬幼 茎培养，愈伤组织诱导率均可达到90%以上，再生植株诱导率(即植株分化率)可达66%， 比对照MS培养基节约投入成本45. 1 %。
具体实施方式
十一本实施方式与具体实施方式
九不同的是所述激素由浓度为 1. Omg/L的6-苄基氨基嘌呤(6-BA)和0. 2mg/L的吲哚丁酸(IBA)组成。本实施方式的蓝靛果忍冬幼茎愈伤组织植株再生诱导培养基进行蓝靛果忍冬幼 茎培养，愈伤组织诱导率均可达到90%以上，再生植株诱导率(即植株分化率)可达68%， 比对照MS培养基节约投入成本45. 1 %。
具体实施方式
十二 本实施方式与具体实施方式
九不同的是所述激素由浓度为 1. Omg/L的6-苄基氨基嘌呤(6-BA)和0. 05mg/L的萘乙酸(NAA)组成。本实施方式的蓝靛果忍冬幼茎愈伤组织植株再生诱导培养基进行蓝靛果忍冬幼 茎培养，愈伤组织诱导率均可达到90%以上，再生植株诱导率(即植株分化率)可达52%， 比对照MS培养基节约投入成本45. 1 %。
具体实施方式
十三本实施方式与具体实施方式
九不同的是所述激素由浓度为 1. Omg/L的6-苄基氨基嘌呤(6-BA)和0. lmg/L的萘乙酸(NAA)组成。本实施方式的蓝靛果忍冬幼茎愈伤组织植株再生诱导培养基进行蓝靛果忍冬幼 茎培养，愈伤组织诱导率均可达到90%以上，再生植株诱导率(即植株分化率)可达64%， 比对照MS培养基节约投入成本45. 1 %。
具体实施方式
十四本实施方式与具体实施方式
九不同的是所述激素由浓度为
1.Omg/L的6-苄基氨基嘌呤(6-BA)和0. 2mg/L的萘乙酸(NAA)组成。本实施方式的蓝靛果忍冬幼茎愈伤组织植株再生诱导培养基进行蓝靛果忍冬幼 茎培养，愈伤组织诱导率均可达到90%以上，再生植株诱导率(即植株分化率)可达56%， 比对照MS培养基节约投入成本45. 1 %。
具体实施方式
十五本实施方式与具体实施方式
九不同的是所述激素由浓度为
2.Omg/L的6-苄基氨基嘌呤(6-BA)和0. 05mg/L的萘乙酸(NAA)组成。本实施方式的蓝靛果忍冬幼茎愈伤组织植株再生诱导培养基进行蓝靛果忍冬幼 茎培养，愈伤组织诱导率均可达到90%以上，再生植株诱导率(即植株分化率)可达64%， 比对照MS培养基节约投入成本45. 1 %。
具体实施方式
十六本实施方式与具体实施方式
九不同的是所述激素由浓度为 2. Omg/L的6-苄基氨基嘌呤(6-BA)和0. lmg/L的萘乙酸(NAA)组成。本实施方式的蓝靛果忍冬幼茎愈伤组织植株再生诱导培养基进行蓝靛果忍冬幼 茎培养，愈伤组织诱导率均可达到90%以上，再生植株诱导率(即植株分化率)可达72%， 比对照MS培养基节约投入成本45. 1 %。
具体实施方式
十七本实施方式与具体实施方式
九不同的是所述激素由浓度为 2. Omg/L的6-苄基氨基嘌呤(6-BA)和0. 2mg/L的萘乙酸(NAA)组成。本实施方式的蓝靛果忍冬幼茎愈伤组织植株再生诱导培养基进行蓝靛果忍冬幼 茎培养，愈伤组织诱导率均可达到90%以上，再生植株诱导率(即植株分化率)可达70%， 比对照MS培养基节约投入成本45. 1 %。
具体实施方式
十八本实施方式与具体实施方式
九不同的是所述激素由浓度为 2. Omg/L的6-苄基氨基嘌呤(6-BA)和0. 05mg/L的吲哚丁酸(IBA)组成。本实施方式的蓝靛果忍冬幼茎愈伤组织植株再生诱导培养基进行蓝靛果忍冬幼 茎培养，愈伤组织诱导率均可达到90%以上，再生植株诱导率(即植株分化率)可达68%，
具体实施方式
十九本实施方式与具体实施方式
九不同的是所述激素由浓度为 2. Omg/L的6-苄基氨基嘌呤(6-BA)和0. lmg/L的吲哚丁酸(IBA)组成。本实施方式的蓝靛果忍冬幼茎愈伤组织植株再生诱导培养基进行蓝靛果忍冬幼 茎培养，愈伤组织诱导率均可达到90%以上，再生植株诱导率(即植株分化率)可达80%， 比对照MS培养基节约投入成本45. 1 %。
具体实施方式
二十本实施方式与具体实施方式
九不同的是所述激素由浓度为 2. Omg/L的6-苄基氨基嘌呤(6-BA)和0. 2mg/L的吲哚丁酸(IBA)组成。本实施方式的蓝靛果忍冬幼茎愈伤组织植株再生诱导培养基进行蓝靛果忍冬幼 茎培养，愈伤组织诱导率均可达到90%以上，再生植株诱导率(即植株分化率)可达82%， 比对照MS培养基节约投入成本45. 1 %。
具体实施方式
二十一本实施方式与具体实施方式
九不同的是所述激素由浓度为 1. Omg/L的激动素(KT)和0. 05mg/L的吲哚丁酸(IBA)组成。本实施方式的蓝靛果忍冬幼茎愈伤组织植株再生诱导培养基进行蓝靛果忍冬幼 茎培养，愈伤组织诱导率均可达到90%以上，再生植株诱导率(即植株分化率)可达56%， 比对照MS培养基节约投入成本45. 1 %。
具体实施方式
二十二 本实施方式与具体实施方式
九不同的是所述激素由浓度为 1. Omg/L的激动素(KT)和0. lmg/L的吲哚丁酸(IBA)组成。本实施方式的蓝靛果忍冬幼茎愈伤组织植株再生诱导培养基进行蓝靛果忍冬幼 茎培养，愈伤组织诱导率均可达到90%以上，再生植株诱导率(即植株分化率)可达60%， 比对照MS培养基节约投入成本45. 1 %。
具体实施方式
二十三本实施方式与具体实施方式
九不同的是所述激素由浓度为 1. Omg/L的激动素(KT)和0. 2mg/L的吲哚丁酸(IBA)组成。本实施方式的蓝靛果忍冬幼茎愈伤组织植株再生诱导培养基进行蓝靛果忍冬幼 茎培养，愈伤组织诱导率均可达到90%以上，再生植株诱导率(即植株分化率)可达66%， 比对照MS培养基节约投入成本45. 1 %。
具体实施方式
二十四本实施方式与具体实施方式
九不同的是所述激素由浓度为 1. Omg/L的激动素(KT)和0. 05mg/L的萘乙酸(NAA)组成。本实施方式的蓝靛果忍冬幼茎愈伤组织植株再生诱导培养基进行蓝靛果忍冬幼 茎培养，愈伤组织诱导率均可达到90%以上，再生植株诱导率(即植株分化率)可达58%， 比对照MS培养基节约投入成本45. 1 %。
具体实施方式
二十五本实施方式与具体实施方式
九不同的是所述激素由浓度为 1. Omg/L的激动素(KT)和0. lmg/L的萘乙酸(NAA)组成。本实施方式的蓝靛果忍冬幼茎愈伤组织植株再生诱导培养基进行蓝靛果忍冬幼 茎培养，愈伤组织诱导率均可达到90%以上，再生植株诱导率(即植株分化率)可达56%， 比对照MS培养基节约投入成本45. 1 %。
具体实施方式
二十六本实施方式与具体实施方式
九不同的是所述激素由浓度为 1. Omg/L的激动素(KT)和0. 2mg/L的萘乙酸(NAA)组成。本实施方式的蓝靛果忍冬幼茎愈伤组织植株再生诱导培养基进行蓝靛果忍冬幼茎培养，愈伤组织诱导率均可达到90%以上，再生植株诱导率(即植株分化率)可达50%， 比对照MS培养基节约投入成本45. 1 %。
具体实施方式
二十七本实施方式与具体实施方式
九不同的是所述激素由浓度为 2. Omg/L的激动素(KT)和0. 05mg/L的吲哚丁酸(IBA)组成。本实施方式的蓝靛果忍冬幼茎愈伤组织植株再生诱导培养基进行蓝靛果忍冬幼 茎培养，愈伤组织诱导率均可达到90%以上，再生植株诱导率(即植株分化率)可达60%， 比对照MS培养基节约投入成本45. 1 %。
具体实施方式
二十八本实施方式与具体实施方式
九不同的是所述激素由浓度为 2. Omg/L的激动素(KT)和0. lmg/L的吲哚丁酸(IBA)组成。本实施方式的蓝靛果忍冬幼茎愈伤组织植株再生诱导培养基进行蓝靛果忍冬幼 茎培养，愈伤组织诱导率均可达到90%以上，再生植株诱导率(即植株分化率)可达70%， 比对照MS培养基节约投入成本45. 1 %。
具体实施方式
二十九本实施方式与具体实施方式
九不同的是所述激素由浓度为 2. Omg/L的激动素(KT)和0. 2mg/L的吲哚丁酸(IBA)组成。本实施方式的蓝靛果忍冬幼茎愈伤组织植株再生诱导培养基进行蓝靛果忍冬幼 茎培养，愈伤组织诱导率均可达到90%以上，再生植株诱导率(即植株分化率)可达74%， 比对照MS培养基节约投入成本45. 1 %。
具体实施方式
三十本实施方式与具体实施方式
九不同的是所述激素由浓度为 2. Omg/L的激动素(KT)和0. 05mg/L的萘乙酸(NAA)组成。本实施方式的蓝靛果忍冬幼茎愈伤组织植株再生诱导培养基进行蓝靛果忍冬幼 茎培养，愈伤组织诱导率均可达到90%以上，再生植株诱导率(即植株分化率)可达78%， 比对照MS培养基节约投入成本45. 1 %。
具体实施方式
三十一本实施方式与具体实施方式
九不同的是所述激素由浓度为 2. Omg/L的激动素(KT)和0. lmg/L的萘乙酸(NAA)组成。本实施方式的蓝靛果忍冬幼茎愈伤组织植株再生诱导培养基进行蓝靛果忍冬幼 茎培养，愈伤组织诱导率均可达到90%以上，再生植株诱导率(即植株分化率)可达76%， 比对照MS培养基节约投入成本45. 1 %。
具体实施方式
三十二 本实施方式与具体实施方式
九不同的是所述激素由浓度为 2. Omg/L的激动素(KT)和0. 2mg/L的萘乙酸(NAA)组成。本实施方式的蓝靛果忍冬幼茎愈伤组织植株再生诱导培养基进行蓝靛果忍冬幼 茎培养，愈伤组织诱导率均可达到90%以上，再生植株诱导率(即植株分化率)可达60%， 比对照MS培养基节约投入成本45. 1 %。其中，上述具体实施方式
九至三十二中，蓝靛果忍冬幼茎接种于蓝靛果忍冬幼茎 愈伤组织植株再生诱导培养基前，需要对蓝靛果忍冬幼茎进行如下处理在六月一日至六 月六日采集蓝靛果忍冬幼茎，用70% (体积)酒精浸泡10s，无菌水冲洗3遍，再用0.1% (质量)升汞液消毒8min，然后再用无菌水冲洗3 5遍，然后在接种至培养基时将经上 述处理后的蓝靛果忍冬幼茎两端剪去，再接种于蓝靛果忍冬幼茎愈伤组织植株再生诱导培 养基表面，此时幼茎诱导出愈伤组织的几率即为愈伤组织诱导率；诱导出愈伤组织后，再将 生长良好的愈伤组织转接至蓝靛果忍冬幼茎愈伤组织植株再生诱导培养基，再诱导生长植株，能够诱导出植株的几率即为再生植株诱导率(即植株分化率)，其中转接的愈伤组织数 为50。
具体实施方式
九至三十二中，培养条件均是培养温度24 26°C，光照时间14 16h/d，光照强度1800 20001x，20 30天继代一次。综上具体实施方式
九至三十二可知，随着6-BA浓度或者KT浓度的增加植株分化 率上升，当6-BA浓度或者KT浓度为2. Omg/L时，最高分化率分别可达82. 0 %、78. 0 %，其 中6-BA对愈伤组织分化的促进效果要好于KT，平均植株分化率较高。当6-BA浓度一定时， 植株分化率随IBA浓度增加呈现上升的趋势，以IBA浓度为0. 2mg/L为最佳；当6-BA浓度 一定时，植株分化率随NAA浓度增加呈现先上升再下降的趋势，其中以0. lmg/L的浓度为最 佳。与此不同，在KT与IBA、NAA的配比组合中，当KT浓度一定时，IBA浓度变化对植株分 化率的影响与6-BA时的相同，IBA的浓度以0. 2mg/L最为适宜，而随着NAA浓度增加分化 率则呈下降趋势，NAA浓度以0. 05mg/L最为适宜。
权利要求
1.一种蓝靛果忍冬幼茎愈伤组织植株再生诱导培养基，其特征在于蓝靛果忍冬幼茎愈 伤组织植株再生诱导培养基是由大量元素、微量元素和激素组成，其中所述大量元素由浓 度为 900 920mg/L 的 NH4N03、90 100mg/L 的 KH2PO4UOOO 1050mg/L 的 KN03、240 250mg/L 的 CaCl2 · 2H20、200 210mg/L 的 MgSO4 · 7H20 禾口 15 18mg/L 的 EDTA-Fe 组成， 所述微量元素由浓度为 0. 83mg/L 的 KI、22. 3mg/L 的 MnSO4 ·4H20、6. 2mg/L 的 H3B03、8. 6mg/ L 的 ZnSO4 · 7Η20、0· 025mg/L 的 Na2MoO4 · 2Η20、0· 25mg/L 的 CuSO4 · 5H20 禾口 0. 025mg/L 的 CoCl2 · 6H20，所述激素由浓度为1. 0 2. Omg/L的6-苄基氨基嘌呤或者激动素和0. 05 0. 2mg/L的吲哚丁酸或者萘乙酸组成。
2.根据权利要求1所述的一种蓝靛果忍冬幼茎愈伤组织植株再生诱导培养基，其特征 在于所述大量元素由浓度为 910mg/L 的 NH4N03、95mg/L 的 KH2PO4、1025mg/L 的 KN03、245mg/ L 的 CaCl2 · 2H20、205mg/L 的 MgSO4 · 7H20 和 16. 5mg/L 的 EDTA-Fe 组成。
3.根据权利要求1或2所述的一种蓝靛果忍冬幼茎愈伤组织植株再生诱导培养基，其 特征在于所述激素由浓度为1. 0 2. Omg/L的6-苄基氨基嘌呤和0. 1 0. 2mg/L的吲哚 丁酸组成。
4.根据权利要求1或2所述的一种蓝靛果忍冬幼茎愈伤组织植株再生诱导培养基，其 特征在于所述激素由浓度为2. Omg/L的6-苄基氨基嘌呤和0. 2mg/L的吲哚丁酸组成。
5.根据权利要求1或2所述的一种蓝靛果忍冬幼茎愈伤组织植株再生诱导培养基，其 特征在于所述激素由浓度为1. 0 2. 0mg/L的激动素和0. 05 0. lmg/L的萘乙酸组成。
6.根据权利要求1或2所述的一种蓝靛果忍冬幼茎愈伤组织植株再生诱导培养基，其 特征在于所述激素由浓度为2. 0mg/L的激动素和0. 05mg/L的萘乙酸组成。
7.根据权利要求1或2所述的一种蓝靛果忍冬幼茎愈伤组织植株再生诱导培养基， 其特征在于蓝靛果忍冬幼茎愈伤组织植株再生诱导培养基的培养条件是培养温度24 26°C，光照时间14 16h/d，光照强度1800 20001x，20 30天继代一次。
8.根据权利要求1或2所述的一种蓝靛果忍冬幼茎愈伤组织植株再生诱导培养基， 其特征在于蓝靛果忍冬幼茎接种至蓝靛果忍冬幼茎愈伤组织植株再生诱导培养基之前，需 要对蓝靛果忍冬幼茎进行如下处理在六月一日至六月六日采集蓝靛果忍冬幼茎，用70% (体积)酒精浸泡10s，无菌水冲洗3遍，再用0.1% (质量)升汞液消毒8min，然后再用无 菌水冲洗3 5遍，然后在接种至培养基时将经上述处理后的蓝靛果忍冬幼茎两端剪去，再 接种于蓝靛果忍冬幼茎愈伤组织植株再生诱导培养基表面。
全文摘要
一种蓝靛果忍冬幼茎愈伤组织植株再生诱导培养基，涉及一种蓝靛果忍冬愈伤组织植株再生诱导培养基。解决现有蓝靛果忍冬的组织培养主要采取腋芽或茎尖培养，存在植株分化率低及培养基成本高的问题。培养基由大量元素、微量元素和激素组成，其中所述激素由1.0～2.0mg/L的6-苄基氨基嘌呤或者激动素和0.05～0.2mg/L的吲哚丁酸或者萘乙酸组成。利用本发明的LD1培养基，蓝靛果忍冬幼茎很容易被诱导形成愈伤组织，愈伤组织诱导率均可达到90％以上；愈伤组织诱导成植株的几率高，植株分化率可达50％～82％，比现有MS培养基的植株分化率提高了66.6％～173.3％，比对照MS培养基节约投入成本45.1％。
文档编号A01H4/00GK102119657SQ20101057236
公开日2011年7月13日 申请日期2010年12月3日 优先权日2010年12月3日
发明者沈云霞, 班文杰, 赵恒田, 邓中枢, 黄福山 申请人:中国科学院东北地理与农业生态研究所