专利名称：一种川牛膝繁育方法
技术领域：
本发明涉及一种繁育方法，具体地说，涉及一种川牛膝的繁育方法。
背景技术：
川牛膝为苋科植物川牛膝officinalis Kuan.的干燥根，性平，味甘、微 苦，归肝、肾经。川牛膝具有逐瘀通经，通利关节，利尿通淋的功效。川牛膝根含有牛膝多糖、 皂苷、留醇等物质，具有改善血液流变性、免疫调节、抗肿瘤、抗病毒以及利胆、保肝等作用， 供中医临床配方使用外，也是多种中成药的原料。川牛膝是著名的传产道地药材，野生或栽培均有，主要分布在四川、贵州、云南等 省，其中以四川宝兴、天全等传统产区产量最大，质量最佳。近年来的研究表明牛膝具有较 明显的抗肿瘤作用，川牛膝的种植面积增加很快，因此开展川牛膝的高效栽培技术研究，对 实现牛膝的规模化、规范化生产，促进川牛膝的产业化发展具有重要意义。川牛膝采用种子繁殖，川牛膝繁育过程中的各个环节，包括基地选择、品种筛选、 整地、播种、田间管理、采收加工等，对川牛膝的繁育有着不同程度的影响，其中，种子的发 芽率直接影响着川牛膝的产量，因此，在播种前对川牛膝种子进行选择和处理对川牛膝的 繁育有着重要的影响。《川牛膝规范化生产技术标准操作规程》(中国现代中药，2006年第 8期)中公开了在播种前鉴定种子发芽率以确定播种量的方法，即采用传统火试或手工搓揉 的方法对种子的发芽率进行检测，然后确定每公顷的种子用量，依照该方法播种，种子发芽 率低，所需种子用量大，一般每公顷用种量为7. 5-11. 25kg。《川牛膝种子萌发特性的研究》 公开了用低温、机械及超声方法对川牛膝种子进行处理的方法，结果显示在播种前于4°C冰 箱内储藏4天、在发芽前取待试种子经手工搓揉5分钟，有利于提高川牛膝种子发芽率。但 其结果表明，经该方法处理后，川牛膝种子的发芽率仍没有明显的提高，最高为41%。并且，由于川牛膝容易与野生头花杯苋众aiA^a c即iiaia杂交、在实际生产中种 子自种自留、未采取去杂保纯措施等，川牛膝繁育中还存在栽培川牛膝中有效成分含量降 低(栽培川牛膝中杯苋甾酮含量仅为0. 03%左右)、品质下降、品种退化的问题。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术中所存在的上述的不足，提供一种新的川牛膝繁 育方法。按照本发明方法繁育的川牛膝，发芽、出苗率高，药材中有效成分杯苋留酮含量较
尚ο为了实现上述目的，本发明提供了以下技术方案 一种川牛膝繁育方法，包括以下步骤
(1)采集种子
每年12月中旬，在川牛膝模式标本采集地的野生川牛膝种群中，采集川牛膝种子，晒
干；
(2)人工处理种子在0°C -4°C条件下贮藏步骤(1)采集的川牛膝种子60-80天，于15-25°C、500mg/L的 赤霉素溶液中浸泡处理Μ-3Μι，晾干，于0°C -4°C条件下继续保存30-50天；
(3)整地
选择海拔1500-1700米、土质疏松、有机质含量高、隔离条件好的生地或前作非川牛膝 的熟地作为良种繁育基地，按行距30cm，穴距25cm-30cm进行整地；
(4)播种
将步骤(2)所得川牛膝种子置于15-25°C、500mg/L的赤霉素溶液中浸泡处理8-12h，按 每穴8-10粒种子在良种繁育基地上进行播种，每亩施用KH2PO4 25-35公斤作为基肥；
(5)栽种及生长管理
出苗后按每穴4苗进行间苗，每亩总磷肥用量7. 66-12. 35 Kg/667m2，总氮肥用量 1.63-2. 94kg / 667m2，每次施肥均按重量比N :P =15 :20的比例进行分期施肥，适时人工除 草，第一年施用三次，其中基肥占总肥量的20%，苗肥占总肥量的40%，始花期追肥占总肥量 的40% ；第二年以后，回苗后施用总肥量的60%，始花期施用总肥量的40% ；
(6)适时采收种子
三年后开始采收种子，每年采收良种繁育基地的种子作为川牛膝繁育使用； 步骤(3)中所述有机质含量高指土壤中有机质含量不少于25-45g · Kg"1 (土壤有机质 是指土壤中含碳的有机化合物);隔离条件好是指良种繁育基地周围至少半径800米内无川 牛膝种植或有树林、山地形成自然隔离。本发明所述每亩总磷肥用量7. 66-12. 35 Kg/667m2指的是磷肥中P元素的用量， 总氮肥用量1. 63-2. 94kg / 667m2指的是氮肥中N元素的用量。上述川牛膝繁育方法中，步骤(1)中所述川牛膝种子为红牛膝(O^iAWa capitata. ) [=1(Cyathula officinalis Kuan.)。上述川牛膝繁育方法中，步骤(1)中所述川牛膝种子优选至少三年生红牛膝种子 或一年生白牛膝种子。上述川牛膝繁育方法中，步骤(1)中所述川牛膝种子为当年采集的种子。上述川牛膝繁育方法中，步骤(2)中人工处理种子时种子的贮藏温度最好为0°C。上述川牛膝繁育方法中，步骤(2)和步骤(4)中所述500mg/L的赤霉素溶液中浸泡 处理的温度最好为20°C。川牛膝是地道川产药材，采用种子繁殖，川牛膝繁育过程中的各个环节，包括基地 选择、品种筛选、整地、播种、田间管理、采收加工等，对川牛膝的繁育有着不同程度的影响， 尤其是川牛膝种子的发芽率直接影响着川牛膝的产量，因此，在播种前对川牛膝种子进行 选择和处理对川牛膝的繁育有着重要的影响。而现有技术中多采用鉴定种子发芽率后确定 播种量，川牛膝种子发芽率、出苗率低，不但影响了川牛膝的产量，而且所需种子量大；在播 种前低温处理或机械搓揉，可以增加川牛膝种子的发芽率，但增加有限。并且现有技术中川 牛膝种子自留自种、并且没有采取去杂的措施，使得川牛膝繁育中不但存在产量不高的不 足，还存在品质下降的不足。本发明人经反复试验研究，发现川牛膝种子的萌发除受到环境条件(包括充足的 水分和氧气等以外)，还受到植株年龄、储藏时间、处理温度、播种量、施肥量等的影响。因 而，发明人分析了播种量、播种期、施肥量、种子处理方法等对川牛膝繁育的发芽率、出苗率等进行研究，最终得出本发明的繁育方法。本发明的川牛膝繁殖方法中，每年十二月中旬采 收模式标本产地的多年生野生川牛膝植株成熟种子，保证了种性的纯正和种子的生活力； 在人工处理种子步骤中在0°C -4°C条件下贮藏种子60-80天后，于20°C、500mg/L的赤霉素 溶液中浸泡处理M-36小时，晾干，继续保存于0°C _4°C条件下30-50天，然后在播种前将 种子置于20°C、500mg/L的赤霉素溶液中浸泡处理8_12小时，保证了种子出苗的整齐度和 出苗率，为生产优质种子奠定基础；选择海拔1500-1700米，土质疏松、有机质含量高，自然 隔离条件好(周围半径800米内无川牛膝种植或有树林、山地形成自然隔离)，生地或前作非 川牛膝的熟地，作为良种繁育田，确保不会产生“飞花”现象，保证种子纯度；按行距30cm， 穴距25cm进行精细播种，保证川牛膝良种繁育基础群体有良好的群体结构；每亩总磷肥用 量7. 66-12. 35 Kg/667m2，总氮肥用量1. 63-2. 94kg / 667m2。每次施肥均按重量比N =P =15 20的比例进行分期施肥，适时人工除草，第一年施用三次，其中基肥占总肥量的20%，苗肥 占总肥量的40%，始花期追肥占总肥量的40% ；第二年以后，回苗后施用总肥量的60%，始花 期施用总肥量的40%，既保证了植株健壮，又保证了花期有足够的营养用于良种生产。按照本发明方法繁育川牛膝，整地、播种，出苗后川牛膝出苗率达90%以上，田间 苗势整齐，性状一致，表明按本发明方法处理的种子质量优于传统方法。按每穴4苗间苗 后，按本发明的田间管理方法进行良种繁育田管理，三年后开始采收种子。播种后3年的于 11月采收川牛膝药材，川牛膝药材亩产可达600-800公斤(干重);对药材进行外观鉴定、理 化鉴定和主成分(以杯苋留酮为代表)含量测定，药材外观符合模式标本川牛膝根的形态特 征，按《中国药典》2010版规定方法测定，川牛膝水分含量为11. 56%、总灰分为7. 06%，水溶 性浸出物为68. 68%，同时按2010年药典，采用高效液相色谱法测定杯苋留酮含量，结果杯 苋甾酮含量为0. 0406%。表明按本发明技术生产的川牛膝种子质量和纯度优于传统种子生 产方法，药材质量符合《中国药典》2010版规定，为优质药材。
图1为Sl在不同温度下的发芽率比较图； 图2为S6不同温度下的发芽率比较图； 图3为剥壳与不剥壳发芽率比较图； 图4为不同年限种子发芽率比较图； 图5为不同储藏方式种子发芽率比较图； 图6为新、陈种子发芽率比较图7为播种量(X1)、播期(X2)、磷肥(X3)、氮肥(X4)与产量的关系图； 图8为播种量(X1)、播期(X2)、磷肥(X3)、氮肥(X4)与产量的互作效应图；其中图8 I 为播种量(X1)与播种期OQ的互作效应图；图8 II为播种量与磷肥的产量互作效应图；图 8 III为播种量与氮肥的产量互作效应图；图8 IV为播期与磷肥的产量互作效应图；图8 V为 播期与氮肥的产量互作效应图；图8 VI为磷肥与氮肥的产量互作效应图。
具体实施例方式下面结合试验例及具体实施方式
对本发明作进一步的详细描述。但不应将此理解 为本发明上述主题的范围仅限于以下的实施例，凡基于本发明内容所实现的技术均属于本 发明的范围。
本发明列举的川牛膝繁育方法，包括以下步骤
(1)采集种子
在川牛膝模式标本采集地四川省宝兴县蜂桶寨乡盐井坪野生川牛膝种群中，根据川牛 膝的植物形态特征，进行目测鉴定，并对川牛膝药材进行显微鉴定，确认为川牛膝原植物， 采集多年生健康川牛膝植株，于12月中旬采集种子，晒干；
(2)人工处理种子
将采集的川牛膝种子在0°C -4°C条件下贮藏60-80天，于20°C、500mg/L的赤霉素溶液 中浸泡处理M_36h，晾干，于0°C -4°C条件下继续保存30-50天；
(3)整地
选择海拔1500-1700米、土质疏松、有机质含量高、隔离条件好的生地或前作非川牛膝 的熟地作为良种繁育基地，按行距30cm，穴距25cm进行整地；
(4)播种4月上旬，将步骤(2)所得川牛膝种子置于20°C、500mg/L的赤霉素溶液中浸 泡处理8-12h，按每穴8-10粒种子在良种繁育基地上进行播种，每亩施用KH2PO4 25-35公 斤作为基肥；
(5)栽种及生长管理
出苗后按每穴4苗进行间苗，每亩总磷肥用量7. 66-12. 35 Kg/667m2，总氮肥用量 1. 63-2. 94kg / 667m2。每次施肥均按重量比N =P =15 20的比例进行分期施肥，适时人工 除草，第一年施用三次，其中基肥占总肥量的20%，苗肥占总肥量的40%，始花期追肥占总肥 量的40% ；第二年以后，回苗后施用总肥量的60%，始花期施用总肥量的40% ；
(6)适时采收种子
三年后开始采收种子，每年采收良种繁育基地的种子作为川牛膝繁育使用；
步骤(3)中所述有机质含量高指土壤中有机质含量不少于25-45g · Kg"1 (土壤有机质 是指土壤中含碳的有机化合物);离条件好是指良种繁育基地周围至少半径800米内无川牛 膝种植或有树林、山地形成自然隔离。
实施例本申请人于2003年12月采收模式标本产地的野生红牛膝三年生以上植株成熟 种子，12月至2004年3月处理种子，即在不剥壳、不脱粒于0°C条件下贮藏80天，于20°C、 500mg/L的赤霉素溶液中浸泡处理36h，晾干，于0°C条件下继续保存40天。2004年4月在 四川省宝兴县蜂桶寨乡新康村(海拔1650米)选地2亩，按行距30cm、穴距25cm进行整 地，按每穴8-10粒种子在良种繁育基地上进行播种，出苗后出苗率达90%以上。按每穴4苗 间苗后，按上述田间管理规程进行良种繁育田管理，于2006年12月采收三年生种子。2007 年4月按传统种植方式将种子播于四川省宝兴县陇东镇崇兴村大圆包，种子出苗整齐，出 苗率达到90%以上，田间苗势整齐，性状一致，表明按本发明方法处理的种子质量优于传统 方法。按当地种植习惯进行田间管理，于2009年11月采收川牛膝药材，川牛膝药材亩产为 785公斤(干重)。对所采药材进行外观鉴定、理化鉴定和主成分(以杯苋留酮为代表)含量 测定，药材外观符合模式标本川牛膝根的形态特征，按《中国药典》2010版规定方法测定水 分含量为11. 56%、总灰分为7. 06%，水溶性浸出物为68. 68%，同时采用高效液相色谱法测定 杯苋留酮含量为0. 0406%。表明按本发明技术生产的川牛膝种子质量和纯度优于传统种子生产方法，药材质量符合《中国药典》2010版规定，为优质药材。试验例1川牛膝发芽率的试验研究 1材料与方法
1. 1试验材料
试验材料为产区生产上主要使用的、不同来源的红牛膝(OaiAWa capitete)和白牛 條UJyeithulei officinalis Kuan.)种子(表1 )，采集于四川省宝兴县和天全县(紫石)，包括 2006,2007,2008三年种子。选取健壮饱满、无损伤和无虫害的种子进行发芽实验。表1实验材料
权利要求
1.一种川牛膝繁育方法，包括以下步骤(1)采集种子每年12月中旬，在川牛膝模式标本采集地的野生川牛膝种群中，采集川牛膝种子，晒干；(2)人工处理种子在0°C _4°C条件下贮藏步骤(1)采集的川牛膝种子60-80天，于15-25°C、500mg/L的 赤霉素溶液中浸泡处理Μ-3Μι，晾干，于0°C -4°C条件下继续保存30-50天；(3)整地选择海拔1500-1700米、土质疏松、有机质含量高、隔离条件好的生地或前作非川牛膝 的熟地作为良种繁育基地，按行距30cm，穴距25cm-30进行整地；(4)播种将步骤(2)所得川牛膝种子置于15-25°C、500mg/L的赤霉素溶液中浸泡处理8-12h，按 每穴8-10粒种子在良种繁育基地上进行播种，每亩施用KH2PO4 25-35公斤作为基肥；(5)栽种及生长管理出苗后按每穴4苗进行间苗，每亩总磷肥用量7. 66-12. 35 Kg/667m2，总氮肥用量 1.63-2. 94kg / 667m2，每次施肥均按重量比N :P =15 :20的比例进行分期施肥，适时人工除 草，第一年施用三次，其中基肥占总肥量的20%，苗肥占总肥量的40%，始花期追肥占总肥量 的40% ；第二年以后，回苗后施用总肥量的60%，始花期施用总肥量的40% ；(6)适时采收种子三年后开始采收种子，每年采收良种繁育基地的种子作为川牛膝繁育使用；步骤(3)中所述有机质含量高指土壤中有机质含量不少于25-45g · Kg"1 ；隔离条件好 是指良种繁育基地周围至少半径800米内无川牛膝种植或有树林、山地形成自然隔离。
2.根据权利要求1所述的川牛膝繁育方法，其特征在于步骤(1)中所述川牛膝种子为 红牛膝或白牛膝。
3.根据权利要求2所述的川牛膝繁育方法，其特征在于步骤(1)中所述川牛膝种子为 三年生或三年以上生红牛膝种子或一年生白牛膝种子。
4.根据权利要求2所述的川牛膝繁育方法，其特征在于步骤(1)中所述川牛膝种子为 当年采集的种子。
5.根据权利要求1-4任意一项所述的川牛膝繁育方法，其特征在于步骤(2)中人工处 理种子时种子的贮藏温度最好为0°C。
6.根据权利要求1-4任意一项所述的川牛膝繁育方法，其特征在于步骤(2)和步骤 (4)中所述500mg/L的赤霉素溶液中浸泡处理的温度最好为20°C。
全文摘要
本发明公开了一种川牛膝的繁育方法。本发明的川牛膝繁育方法，包括采集种子、人工处理种子、整地、播种、栽种及生长管理、适时采收种子等步骤，其中人工处理种子的方法为在0℃-4℃条件下贮藏步骤(1)采集的川牛膝种子60-80天，于15-25℃、500mg/L的赤霉素溶液中浸泡处理24-36h，晾干，于0℃条件下继续保存30-50天；按每穴8-10粒种子在良种繁育基地上进行播种，每亩施用KH2PO4 25-35公斤作为基肥。按照本发明方法繁育川牛膝，整地、播种，出苗后川牛膝出苗率达90%以上，田间苗势整齐，性状一致，播种后3年采收川牛膝药材，川牛膝药材亩产可达600-800公斤(干重)；药材中杯苋甾酮含量可达0.04％以上。
文档编号A01C1/00GK102119628SQ201010616309
公开日2011年7月13日 申请日期2010年12月31日 优先权日2010年12月31日
发明者刘天成, 刘帆, 唐莉, 徐攀辉, 杨华, 王巧, 田孟良, 胡丹, 胡莹莹, 郑顺林 申请人:雅安三九中药材科技产业化有限公司