专利名称：一种红花石蒜诱导丛生芽的方法
技术领域：
本发明涉及植物快速繁殖技术领域，尤其涉及一种红花石蒜诱导丛生芽的方法。
背景技术：
红花石蒜的自然繁殖率相当低，平均每年仅产生I 2个子球。组织培养是红花石蒜快速获得再生小鳞茎的常用途径，也是最终实现大量繁殖的有效方式。与一般繁殖方式相比，组织培养不受季节和空间的限制，繁殖率高，而且高效的离体再生体系也是进一步建立遗传转化体系的基本条件。尽管有关红花石蒜的离体快繁已有较多报道，但污染和褐化问题严重，成活率低， 初代诱芽周期长(出芽时间一般需要30 40天，出芽率一般为60%左右)，且小鳞茎生长发育缓慢(第一年直径增加2. Ocm左右)，这些都是红花石蒜组织培养方法难以突破的瓶颈。
发明内容
本发明提供了一种红花石蒜诱导丛生芽的方法，通过扦插培育获得幼嫩的外植体材料，再通过液体悬浮培养，能够诱导红花石蒜快速产生大量优质的丛生芽。一种红花石蒜诱导丛生芽的方法，包括(I)取红花石蒜的鳞茎扦插于基质中，培育60 90d，获得幼嫩的小鳞茎；(2)小鳞茎经消毒后，接种于液体培养基中进行诱导培养；(3)诱导出芽后，转移到固体培养基中进行增殖培养，获得丛生芽；其中，所述的液体培养基中含有浓度为O. 5 I. Omg/L的α -萘乙酸和浓度为
3.O 5. Omg/L的6-苄氨基腺嘌呤。步骤⑴中，所述的基质可以由泥炭和珍珠岩混合而成。优选地，所述的泥炭和珍珠岩的体积比为3 : I 4 : 1，疏松通气，最有利于插穗的生长。通过所述的扦插获得的小鳞茎为幼嫩的一年生小鳞茎，能大量、快速地获得；且小鳞茎含少量或不含内生菌，接种后污染率极低。步骤⑵中，所述的消毒包括将小鳞茎洗净，以基盘为中心纵切为2 4块，用 70% 80%乙醇浸泡30 60s，接着用重量体积浓度为O. I % O. 2%的升汞浸泡3 5min,最后用蒸懼水冲洗干净。优选地，所述的液体培养基中还含有浓度为20 40g/L的蔗糖，利于芽生长。所述诱导培养的培养条件优选为于24 26°C、转速80 IOOrpm的恒温摇床中， 暗培养30 45d。采用该培养条件能快速诱导出芽。步骤(3)中，所述固体培养基的配方优选为鹿糖20 40g/L，琼脂8 10g/L， α -萘乙酸O. 5 I. Omg/L, 6-苄氨基腺嘌呤3. O 5. Omg/L。所述增殖培养的培养条件优选为于24 26°C的恒温培养室中培养90 180d。
本发明提供的上述方法可以用于红花石蒜的组织培养中，具体为对上述方法获得的丛生芽进行生根培养、移栽等，即可获得红花石蒜的组织培养植株。本发明方法以红花石蒜鳞茎扦插培育获得的小鳞茎作为外植体材料，外植体幼嫩且便于大量获得，污染率低；同时，采用液体悬浮培养的诱导培养方式，出芽量大且迅速，一个月后即可获得大量优质的丛生芽。采用本发明方法，具有出芽时间短、出芽率和增殖率高、小鳞茎生长发育迅速等优点。
图I为本发明对比例I图2为本发明对比例I图3为本发明实施例I图4为本发明实施例I
出芽情况。
以双鳞片作外植体，培养40d时的出芽情况；
以双鳞片作外植体，培养160d时的出芽情况；
鳞茎扦插3个月后获得的幼嫩小鳞茎；
小鳞茎经液体培养一个月再转至固体培养基后160d时的
具体实施例方式实施例I(I)于春夏季取成熟红花石蒜的鳞茎(平均周径13. 40cm,平均鲜重34. 89g,平均鳞片数15层)，以基盘为中心按照“十”字形进行四分切割，获得的鳞茎块置于基质(泥炭和珍珠岩的体积比为3 I)中进行扦插；90d后每个鳞茎块产生I 6个直径约I. Ocm的小鳞茎，可作外植体材料。(2)将扦插获得的幼嫩小鳞茎去根、去残留的母鳞片，洗净，切去鳞茎上部1/2的部分；再以基盘为中心“十”字形纵切为4块，用70%乙醇浸泡30s，接着用重量体积浓度为
O.I %的升汞浸泡5min，最后用蒸馏水冲洗干净。(3)经消毒后的材料无菌接种到液体培养基中，置于25°C、转速IOOrpm的恒温摇床中，暗培养；一个月后产生较多丛生芽，叶片迅速伸长，出芽率高达85. 7%，增殖率可达 231% ；其中，液体培养基的配方为蔗糖30g/L，0-萘乙酸0.5!1^/1，6-苄氨基腺嘌呤 5. 0mg/Lo(4)将材料转至固体培养基继续培养；培养160d时腋芽数最多可达10个；其中，固体培养基的配方为蔗糖30g/L，琼脂8g/L，α -萘乙酸O. 5mg/L，6_苄氨基腺嘌呤5. Omg/L。对比例I常规双鳞片法组织培养红花石蒜(I)将鳞茎去除褐色皮膜、去根，用洗涤剂清洗；切除鳞茎上部2/3的部分，以鳞茎基盘为中心十字纵切，再用流水冲洗30min ;用70%乙醇浸泡30s，接着用重量体积浓度为
O.I %的升汞浸泡lOmin，最后用蒸馏水冲洗干净。(2)消毒后去掉鳞茎块最外层鳞片，并将材料边缘部分切除，再将鳞茎块由外层向内层分切获得若干个带基盘的双鳞片，接种至蔗糖30g/L，琼脂8g/L，α -萘乙酸O. 5mg/L, 6-节氨基腺嘌呤5. Omg/L的固体培养基,于25°C恒温培养室培养160天。
权利要求
1.一种红花石蒜诱导丛生芽的方法，包括(1)取红花石蒜的鳞茎扦插于基质中，培育60 90d，获得幼嫩的小鳞茎；(2)小鳞茎经消毒后，接种于液体培养基中进行诱导培养；(3)诱导出芽后，转移到固体培养基中进行增殖培养，获得丛生芽；其中，所述的液体培养基中含有浓度为O. 5 I. Omg/L的α -萘乙酸和浓度为3. O 5.Omg/L的6-苄氨基腺嘌呤。
2.根据权利要求I所述的方法，其特征在于，步骤(I)中，所述的基质由泥炭和珍珠岩混合而成。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述的泥炭和珍珠岩的体积比为3 I 4 I。
4.根据权利要求I所述的方法，其特征在于，步骤(2)中，所述的消毒包括将小鳞茎洗净，以基盘为中心纵切为2 4块，用70% 80%乙醇浸泡30 60s，接着用重量体积浓度为O. 1% O. 2%的升萊浸泡3 5min,最后用蒸懼水冲洗干净。
5.根据权利要求I所述的方法，其特征在于，步骤(2)中，所述的液体培养基中还含有浓度为20 40g/L的蔗糖。
6.根据权利要求I所述的方法，其特征在于，步骤(2)中，所述诱导培养的培养条件为 于24 26°C、转速80 IOOrpm的恒温摇床中，暗培养30 45d。
7.根据权利要求I所述的方法，其特征在于，步骤(3)中，所述固体培养基的配方为 蔗糖20 40g/L，琼脂8 10g/L，α-萘乙酸O. 5 I. Omg/L，6-苄氨基腺嘌呤3. O 5.0mg/Lo
8.根据权利要求I所述的方法，其特征在于，步骤(3)中，所述增殖培养的培养条件为 于24 26°C的恒温培养室中培养90 180d。
全文摘要
本发明公开了一种红花石蒜诱导丛生芽的方法，包括取红花石蒜的鳞茎扦插于基质中，培育60～90d，获得幼嫩的小鳞茎；小鳞茎经消毒后，接种于液体培养基中进行诱导培养；诱导出芽后，转移到固体培养基中进行增殖培养，获得丛生芽；其中，所述的液体培养基中含有浓度为0.5～1.0mg/L的α-萘乙酸和浓度为3.0～5.0mg/L的6-苄氨基腺嘌呤。本发明以红花石蒜鳞茎扦插培育获得的小鳞茎作为外植体材料，外植体幼嫩且便于大量获得，污染率低；同时，采用液体悬浮培养的诱导培养方式，出芽量大且迅速，一个月后即可获得大量优质的丛生芽。采用本发明，具有出芽时间短、出芽率和增殖率高、小鳞茎生长发育迅速等优点。
文档编号A01H4/00GK102577817SQ201210065658
公开日2012年7月18日 申请日期2012年1月13日 优先权日2012年1月13日
发明者佘琳芳, 吴昀, 夏宜平, 常乐, 张琳, 肖郁绵, 陈菁珏 申请人:浙江大学