专利名称：一种从石蒜属植物中提取分离伪石蒜碱的方法
技术领域：
本发明涉及从石蒜属植物中提取分离伪石蒜碱的方法。
背景技术：
石蒜科(Amarylllidaceae)石蒜属为我国和东亚一些国家的特有属，其特征相对稳定，为多年生草本植物。石蒜科植物以其含有多种有生物活性和药理活性的生物碱成分引起世界各国药物研究人员的关注。石蒜属植物很早被用作药用，据《本草纲目》记载，石蒜属植物具有解毒、怯痰、利尿、催吐功能。石蒜属植物的化学成分主要包括生物碱和黄酮化合物方面。生物碱主要有石蒜碱、伪石蒜碱、高石蒜碱、石蒜伦碱、多花石蒜碱、加兰他敏、 力克拉敏、石蒜西定、小星蒜碱等。我国天然药物研究人员从20世纪50年代开始石蒜生物碱的研究和药物开发，氢溴酸加兰他敏和二氢加兰他敏(力克拉敏)已经用于临床；1983年抗肿瘤新药氧化石蒜碱通过临床鉴定。进入21世纪，通过新的药理筛选生物活性，发现了石蒜生物碱更多的药理活性。伪石蒜碱最初是从石蒜科植物水仙及石蒜中提取的生物碱，其游离碱及盐酸盐在动物耐受量下，对大鼠W-256的生长有明显的抑制作用。美国夏威夷大学的Furusawa等人于1971-1974年的药理研究，证明了伪石蒜碱能延长患白血病脾肿大的大白鼠的寿命，抑制逆转录酶活性。伪石蒜碱(Pseudolycorine)又称假石蒜碱，白色针状晶体，熔点247 248°C，其盐酸盐为白色片状晶体，熔点288°C，具有抗肿瘤和病毒作用，文献资料记载伪石蒜碱提取分离资料较少，1978年第五期《中草药通讯》(现名《中草药》)有所报道，本发明是本公司科研人员经较长时间的研究的成果，与现有技术工艺和工艺条件完全不同。
发明内容
本发明的目的，在于提供一种从石蒜属植物鳞茎中分离伪石蒜碱的方法，达到工艺路线合理，有机溶剂用量最省，得到产品纯度高，产品质量稳定的要求。本发明一种从石蒜属植物中提取分离伪石蒜碱的方法，其特征是以石蒜属植物鳞茎为原料，依次按以下步骤和工艺条件提取分离伪石蒜碱
(1)石蒜鳞茎干粉制作将新鲜干净石蒜鳞茎切片，晒干，粉碎，得石蒜鳞茎干粉；
(2)稀碱水拌湿按50kg石蒜鳞茎干粉加10 kg 1 1 (V/V)氨水混合拌勻，得弱碱性石蒜鳞茎粉；
(3)乙酸乙酯浸取乙酸乙酯总用量为石蒜鳞茎干粉重量10倍，分三次回流提取，每次 1.证，合并三次回流提取液，得乙酸乙酯浸取液；
(4)蒸馏回收乙酸乙酯蒸馏回收乙酸乙酯得乙酸乙酯浸膏；
(5)酸溶每1kg乙酸乙酯浸膏加5 kg稀硫酸溶解，稀硫酸浓度0. 5% V/V，过滤除杂后得酸性水溶液；(6)氯仿萃取除杂按上述酸性水溶液体积氯仿体积=1 1的比例用氯仿逆流萃取除杂，得氯仿除杂后的酸性水溶液，氯仿回收利用；
(7)调pH用40-50%W/W浓度的NaOH溶液调节氯仿除杂后的酸性水溶液，使pH=10，得氯仿除杂后的碱性水溶液；
(8)盐析除杂在氯仿除杂后的碱性水溶液中加入氯化钠，直到溶液饱和，搅拌均勻，离心过滤除去杂质，得盐析液；
(9)乙酸乙酯萃取按盐析液体积乙酸乙酯体积=1 1.5-2的比例，用乙酸乙酯对盐析液进行逆流萃取，得乙酸乙酯萃取液；
(10)蒸馏回收乙酸乙酯蒸馏乙酸乙酯萃取液，回收乙酸乙酯，得乙酸乙酯萃取膏；
(11)加水溶解用蒸馏水溶解乙酸乙酯萃取膏，每1kg乙酸乙酯萃取膏加蒸馏水5 kg, 充分溶解，离心过滤，保留清液；
(12)柱层析清液通过D201大孔吸附树脂柱，然后先用2倍柱体积的蒸馏水洗脱，再用4倍柱体积的30% (V/V)甲醇水溶液洗脱，回收洗脱液，浓缩结晶，得伪石蒜碱粗品；
(13)重结晶将伪石蒜碱粗品用50%(V/V)乙醇溶解，浓缩重结晶，得伪石蒜碱纯品；
(14)真空干燥重结晶所得伪石蒜碱纯品于65°C真空干燥10小时，粉碎得纯度为 98. 4%的伪石蒜碱。其中步骤(2 )稀碱水拌湿所用的稀碱液还包括用碳酸氢钠或碳酸钠的水溶液代替稀氨水溶液。其中步骤(5)溶液所用的酸除硫酸外，还能用稀盐酸。其中步骤(12)柱层析洗脱液可用乙醇水溶液代替甲醇水溶液。步骤(11)加水溶解后留下的不溶物残渣可用于生产加兰他敏和石蒜碱。本发明的创新点在于(1)提供了一种综合利用石蒜资源的方法；(2)提供了一种从石蒜属植物鳞茎中分离伪石蒜碱的方法；(3)本发明结合逆流萃取、盐析和大孔树脂层析，工艺路径合理，得到产品纯度高，质量稳定。本发明是先得到含量较高的目标提取物，即先用乙酸乙酯浸取石蒜鳞茎并回收乙酸乙酯得乙酸乙酯浸膏，将石蒜鳞茎中的伪石蒜碱几乎全部浸取到乙酸乙酯浸膏中，再从浸膏中进一步分离纯化得到纯度很高的目标产物——伪石蒜碱。这比通常先用乙醇浸取石蒜鳞茎并回收乙醇得乙醇浸膏的方法先进，提取物杂质少，纯度高，本发明氯仿萃取除杂采用逆流萃取除杂，比通常的采用的直接液一液萃取节约有机溶剂，由于本发明乙酸乙酯浸膏中杂质少，纯度高，因此在纯化分离伪石蒜碱的过程中，手续简单，由于本发明在后工序中还采用大孔树脂层析和乙醇重结晶，因此本发明产品纯度高，保证产品品质。本发明萃取都是采用逆流萃取，因此节约有机溶剂。总之，本发明一种从石蒜属植物鳞茎中分离伪石蒜碱的方法，达到工艺路线合理， 有机溶剂用量最省，得到产品纯度高，产品质量稳定的目的。
附图1为本发明工艺流程示意图，从图可知本发明工艺步骤依次为(1)石蒜鳞茎干粉制作；
(2)稀碱水拌湿；(3)乙酸乙酯浸取；
(4)蒸馏回收乙酸乙酯；
(5)酸溶；
(6)氯仿萃取除杂；
(7)调pH;
(8)盐析除杂；
(9)乙酸乙酯萃取；
(10)蒸馏回收乙酸乙酯；
(11)加水溶解；
(12)柱层析;
(13)重结晶；
(14)真空干燥。
具体实施方式
实施例1
依次按一下步骤和工艺条件提取分离伪石蒜碱
(1)石蒜鳞茎干粉制作将新鲜干净石蒜鳞茎200kg切片，晒干，粉碎，得石蒜鳞茎干粉 50 kg ；
(2)稀碱水拌湿在50kg石蒜鳞茎干粉中加入10 kg 1 1 (V/V)氨水混合拌勻，得弱碱性石蒜鳞茎粉；
(3)乙酸乙酯浸提将弱碱性石蒜鳞茎粉投入提取罐，用乙酸乙酯500L，分三次回流提取，每次1.证，合并三次回流提取液，得乙酸乙酯浸取液；
(4)蒸馏回收乙酸乙酯蒸馏回收乙酸乙酯后留下得乙酸乙酯浸膏5kg ；
(5)酸溶用浓度0.5% (V/V)硫酸水溶液25L搅拌溶解5 kg乙酸乙酯浸膏，然后过滤除杂后得酸性水溶液；
(6)氯仿萃取除杂取25L氯仿采取逆流萃取方式，萃取除去上述酸性水溶液中的杂质，得氯仿除杂后的酸性水溶液，氯仿回收利用；
(7)调pH:用50%(w/w)浓度的NaOH溶液调节氯仿除杂后的酸性水溶液，使pH=10， 得氯仿除杂后的碱性水溶液；
(8)盐析除杂在氯仿除杂后的碱性水溶液中加入氯化钠，直到溶液饱和，搅拌均勻，离心过滤除去杂质，得盐析液；
(9)乙酸乙酯萃取取40L乙酸乙酯对盐析液进行逆流萃取，得乙酸乙酯萃取液；
(10)蒸馏回收乙酸乙酯将40L乙酸乙酯萃取液蒸馏回收乙酸乙酯，得乙酸乙酯萃取膏 2 kg ;
(11)加水溶解用蒸馏水IOL溶解2kg乙酸乙酯萃取膏，离心过滤，保留清液；
(12)柱层析上述清液通过D201大孔吸附树脂柱，然后先用IOL蒸馏水洗脱，再用20L 30% (V/V)甲醇水溶液洗脱，回收洗脱液，浓缩结晶，得伪石蒜碱粗品；
(13)重结晶将伪石蒜碱粗品用50%(V/V)乙醇溶解，浓缩重结晶，得伪石蒜碱纯品；
(14)真空干燥重结晶所得伪石蒜碱纯品于65°C真空干燥10小时，粉碎得纯度为
598. 4%的伪石蒜碱60g。实施例2
依次按以下步骤和工艺条件提取分离伪石蒜碱
(1)石蒜鳞茎干粉制作将新鲜干净石蒜鳞茎1000kg切片，晒干，粉碎，得石蒜鳞茎干粉 250 kg ；
(2)稀碱水拌湿在250kg石蒜鳞茎干粉中加入50 kg 10% (w/w)碳酸氢钠溶液混合拌勻，得弱碱性石蒜鳞茎粉；
(3)乙酸乙酯浸提将弱碱性石蒜鳞茎粉投入提取罐，用乙酸乙酯2500L，分三次回流提取，每次1.证，合并三次回流提取液，得乙酸乙酯浸取液；
(4)蒸馏回收乙酸乙酯蒸馏回收乙酸乙酯后留下得乙酸乙酯浸膏沈kg；
(5)酸溶用浓度(V/V)盐酸水溶液130L搅拌溶解沈kg乙酸乙酯浸膏，然后过滤除杂后得酸性水溶液；
(6)氯仿萃取除杂取130L氯仿采取逆流萃取方式，萃取除去上述酸性水溶液中的杂质，得氯仿除杂后的酸性水溶液，氯仿回收利用；
(7)调pH用50% (w/w)浓度的NaOH溶液调节氯仿除杂后的酸性水溶液，使pH=10， 得氯仿除杂后的碱性水溶液；
(8)盐析除杂在氯仿除杂后的碱性水溶液中加入氯化钠，直到溶液饱和搅拌均勻，离心过滤出去杂质，得盐析液；
(9)乙酸乙酯萃取取250L乙酸乙酯对盐析液进行逆流萃取，得乙酸乙酯萃取液；
(10)蒸馏回收乙酸乙酯将250L乙酸乙酯萃取液蒸馏回收乙酸乙酯，得乙酸乙酯萃取膏 10 kg ；
(11)加水溶解用蒸馏水50L溶解10kg乙酸乙酯萃取膏，离心过滤，保留清液；
(12)柱层析上述清液通过D201大孔吸附树脂柱，然后先用50L蒸馏水洗脱，再用 100L 30% (V/V)甲醇水溶液洗脱，回收洗脱液，浓缩结晶，得伪石蒜碱粗品；
(13)重结晶将伪石蒜碱粗品用50%(V/V)乙醇溶解，浓缩重结晶，得伪石蒜碱纯品；
(14)真空干燥重结晶所得伪石蒜碱纯品于65°C真空干燥10小时，粉碎得纯度为 98. 4%的伪石蒜碱312g。实施例3
依次按一下步骤和工艺条件提取分离伪石蒜碱
(1)石蒜鳞茎干粉制作将新鲜干净石蒜鳞茎500kg切片，晒干，粉碎，得石蒜鳞茎干粉 130 kg ；
(2)稀碱水拌湿在130kg石蒜鳞茎干粉中加入沈kg 10% (w/w)碳酸氢钠溶液混合拌勻，得弱碱性石蒜鳞茎粉；
(3)乙酸乙酯浸提将弱碱性石蒜鳞茎粉投入提取罐，用乙酸乙酯260L，分三次回流提取，每次1.证，合并三次回流提取液，得乙酸乙酯浸取液；
(4)蒸馏回收乙酸乙酯蒸馏回收乙酸乙酯后留下得乙酸乙酯浸膏13kg ；
(5)酸溶用浓度0.5% (V/V)硫酸水溶液65L搅拌溶解13 kg乙酸乙酯浸膏，然后过滤除杂后得酸性水溶液；
(6)氯仿萃取除杂取65L氯仿采取逆流萃取方式，萃取除去上述酸性水溶液中的杂质，得氯仿除杂后的酸性水溶液，氯仿回收利用；
(7)调pH用50% (w/w)浓度的NaOH溶液调节氯仿除杂后的酸性水溶液，使pH=10， 得氯仿除杂后的碱性水溶液；
(8)盐析除杂在氯仿除杂后的碱性水溶液中加入氯化钠，直到溶液流色和搅拌均勻， 离心过滤出去杂质，得盐析液；
(9)乙酸乙酯萃取取120L乙酸乙酯对盐析液进行逆流萃取，得乙酸乙酯萃取液；
(10)蒸馏回收乙酸乙酯将120L乙酸乙酯萃取液蒸馏回收乙酸乙酯，得乙酸乙酯萃取膏 5 kg ；
(11)加水溶解用蒸馏水25L溶解5kg乙酸乙酯萃取膏，离心过滤，保留清液；
(12)柱层析上述清液通过D201大孔吸附树脂柱，然后先用25L蒸馏水洗脱，再用50L 30% (V/V)甲醇水溶液洗脱，回收洗脱液，浓缩结晶，得伪石蒜碱粗品；
(13)重结晶将伪石蒜碱粗品用50%(V/V)乙醇溶解，浓缩重结晶，得伪石蒜碱纯品；
(14)真空干燥重结晶所得伪石蒜碱纯品于65°C真空干燥10小时，粉碎得纯度为 98. 5%的伪石蒜碱146g。
权利要求
1.一种从石蒜属植物中提取分离伪石蒜碱的方法，其特征是以石蒜属植物鳞茎为原料，依次按以下步骤和工艺条件提取分离伪石蒜碱(1)石蒜鳞茎干粉制作将新鲜干净石蒜鳞茎切片，晒干，粉碎，得石蒜鳞茎干粉；(2)稀碱水拌湿按50kg石蒜鳞茎干粉加IOkg 1 1 (V/V)氨水混合拌勻，得弱碱性石蒜鳞茎粉；(3)乙酸乙酯浸取乙酸乙酯总用量为石蒜鳞茎干粉重量10倍，分三次回流提取，每次 1.证，合并三次回流提取液，得乙酸乙酯浸取液；(4)蒸馏回收乙酸乙酯蒸馏回收乙酸乙酯得乙酸乙酯浸膏；(5)酸溶每1kg乙酸乙酯浸膏加5 kg稀硫酸溶解，稀硫酸浓度0. 5% V/V，过滤除杂后得酸性水溶液；(6)氯仿萃取除杂按上述酸性水溶液体积氯仿体积=1 1的比例用氯仿逆流萃取除杂，得氯仿除杂后的酸性水溶液，氯仿回收利用；(7)调pH用40-50%W/W浓度的NaOH溶液调节氯仿除杂后的酸性水溶液，使pH=10，得氯仿除杂后的碱性水溶液；(8)盐析除杂在氯仿除杂后的碱性水溶液中加入氯化钠，直到溶液饱和，搅拌均勻，离心过滤除去杂质，得盐析液；(9)乙酸乙酯萃取按盐析液体积乙酸乙酯体积=1 1.5-2的比例，用乙酸乙酯对盐析液进行逆流萃取，得乙酸乙酯萃取液；(10)蒸馏回收乙酸乙酯蒸馏乙酸乙酯萃取液，回收乙酸乙酯，得乙酸乙酯萃取膏；(11)加水溶解用蒸馏水溶解乙酸乙酯萃取膏，每1kg乙酸乙酯萃取膏加蒸馏水5 kg, 充分溶解，离心过滤，保留清液；(12)柱层析清液通过D201大孔吸附树脂柱，然后先用2倍柱体积的蒸馏水洗脱，再用4倍柱体积的30% (V/V)甲醇水溶液洗脱，回收洗脱液，浓缩结晶，得伪石蒜碱粗品；(13)重结晶将伪石蒜碱粗品用50%(V/V)乙醇溶解，浓缩重结晶，得伪石蒜碱纯品；(14)真空干燥重结晶所得伪石蒜碱纯品于65°C真空干燥10小时，粉碎得纯度为 98. 4%的伪石蒜碱。
2.根据权利要求1所述的一种从石蒜属植物中提取分离伪石蒜碱的方法，其特征是步骤(2 )稀碱水拌湿所用的稀碱液还包括用碳酸氢钠或碳酸钠的水溶液代替稀氨水溶液。
3.根据权利要求1所述的一种从石蒜属植物中提取分离伪石蒜碱的方法，其特征是步骤(5)溶液所用的酸除硫酸外，还能用稀盐酸。
4.根据权利要求1所述的一种从石蒜属植物中提取分离伪石蒜碱的方法，其特征是步骤(12)柱层析洗脱液可用乙醇水溶液。
5.根据权利要求1所述的一种从石蒜属植物中提取分离伪石蒜碱的方法，其特征是步骤(11)加水溶解后留下的不溶物残渣可用于生产加兰他敏和石蒜碱。
全文摘要
一种从石蒜属植物中提取分离伪石蒜碱的方法，以石蒜属植物鳞茎为原料，依次按以下步骤提取分离伪石蒜碱(1)石蒜鳞茎干粉制作；(2)稀碱水拌湿；(3)乙酸乙酯浸取；(4)蒸馏回收乙酸乙酯；(5)酸溶；(6)氯仿萃取除杂；(7)调pH；(8)盐析除杂；(9)乙酸乙酯萃取；(10)蒸馏回收乙酸乙酯；(11)加水溶解；(12)柱层析；(13)重结晶；(14)真空干燥。本发明一种从石蒜属植物鳞茎中分离伪石蒜碱的方法，达到工艺路线合理，有机溶剂用量最省，得到产品纯度高，产品质量稳定的目的。
文档编号C07D491/16GK102391266SQ20111044397
公开日2012年3月28日 申请日期2011年12月27日 优先权日2011年12月27日
发明者刘涛, 陈光强, 黄玉君 申请人:贵州芊芊园艺新技术发展公司