从雷公藤植物中分离提取雷公藤甲素的方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于天然药物化学，涉及一种从雷公藤植物中分离提取雷公藤甲素的方 法。
【背景技术】
[0002] 雷公藤是一种具有中国特色、临床上应用频度较高的中药，其对自身免疫病等难 治性疾病具有较好的疗效，有其它类似药物无法替代的作用，因此是很有前途的药用原料。
[0003] 雷公藤化学成分复杂，药理作用广泛，有重要的临床应用价值，但是，目前应用于 临床的各种雷公藤制剂基本是雷公藤的粗提物，即使多甙片也不是纯有效部位，因此导致 临床用药疗效慢、用量大、毒副作用大。根据大量活性试验研究结果以及结构改造后的药理 实验证明，临床的各种雷公藤制剂应该朝着原料纯、剂量小和毒性小的方向发展，因此对雷 公藤药用活性成分的分离、提取、规模化制备显得尤为重要。
[0004] 雷公藤甲素（又称雷公藤内酯醇）是雷公藤植物的主要有效成分之一，雷公藤甲 素的化学结构为二萜内酯类结构，其结构式如下：
[0005]
[0006] 目前从雷公藤植物中分离提取雷公藤甲素经常采用的方法是将雷公藤根、茎或叶 用溶剂提取，再将提取物进行层析分离，再进行结晶。
[0007] 沈秋林等对雷公藤甲素的提取方法进行了优化，其采用甲醇对雷公藤粉末进行浸 提，然后进行超声处理和过滤，滤液浓缩后用氯仿萃取，氯仿萃取液减压浓缩至膏状物，再 对该膏状物进行中性氧化铝柱层析，洗脱液为甲醇：乙酸乙酯：乙醚=1:2:1(体积比） (沈秋林等，雷公藤甲素提取方法优化[ 11]，福建农林大学学报（自然科学版），2012,41(4): 488-492)。该方法的优点在于，醇提后用超声处理，有效提高了雷公藤甲素的提取率。但是， 该方法的不足之处在于，在柱层析之前经过甲醇浸提、氯仿萃取，萃取前没有去除杂质的步 骤，氯仿萃取液得到的膏状物浓黑，成分复杂，粘性大，溶解很困难，柱层析时更是粘滞，柱 行速度非常慢，不利于放大生产。曾经报到用直径30cm、柱长1. 8m硅胶柱处理此浓缩膏，第 8~10天才接收到目的物。
[0008] 中国专利申请CN101367862A公开了一种从雷公藤中快速大量分离高纯度雷公藤 甲素的方法，该方法包括醇溶剂加热提取、石油醚萃取、氯仿或二氯甲烷萃取、色谱柱层析、 高效制备液相分离和结晶。其中，石油醚萃取可以除去杂质，这样氯仿或二氯甲烷萃取浓缩 后得到了深黄色沉淀而不是黑色膏状物，从而减少了柱层析的负担。但是，在该方法中，根 据其实施例，石油醚萃取，二氯甲烷萃取，各3次或者5次，萃取次数多，溶剂用量大；在色谱 柱层析中，使用梯度洗脱液，操作不简便；此外，在纯化过程中，使用了高效制备液相色谱， 成本很高。
[0009] 由于雷公藤甲素在雷公藤植物中的含量很低，有报道，从雷公藤根皮、根心及全根 中雷公藤甲素的提取量分别为〇· 001wt%、0. 0004wt%和0· 0018wt%。因此，如何有效地从 雷公藤植物中分离提取雷公藤甲素的研究，即优化提取工艺，简化操作程序，减少溶剂使用 量，降低提取成本，具有非常重要的意义。
【发明内容】
[0010] 鉴于现有技术中存在的上述缺陷，本发明的目的在于提供一种工艺简单、收率高、 产品纯度高、环境友好且适合于大规模生产的从雷公藤植物中分离提取雷公藤甲素的方 法。
[0011] 根据本发明，本发明提供的从雷公藤植物中分离提取雷公藤甲素的方法包括如下 步骤：
[0012] 1.溶剂浸提和碱处理
[0013] 对雷公藤根、茎和/或叶净饮片用醇和水的混合液进行浸泡提取，得到浸提液；对 该浸提液减压浓缩蒸去醇，得到浓缩液；向该浓缩液中加入1~5倍浓缩液体积的氯代烷烃 溶剂，而后再加入碱，均匀混合后静置分层，得到水层和氯代烷烃层；
[0014] 2.去除弱极性物质
[0015] 将上述步骤1得到的氯代烷烃层液体减压浓缩至粘稠物，利用非极性溶剂溶出该 粘稠物中的弱极性物质，未溶物中加入甲醇、甲醇与水混合液或者丙酮，所得的溶出液浓缩 至干，得到固体干燥物；
[0016] 3.柱层析
[0017] 对上述步骤2得到的固体干燥物进行硅胶柱层析，分离得到雷公藤甲素晶体。
[0018] 下面对本发明的从雷公藤植物中分离提取雷公藤甲素的方法进行更详细的描述。
[0019] 在所述步骤1溶剂浸提和碱处理中：
[0020] 所采用的雷公藤根、茎和/或叶净饮片，通常根、茎采用1~2_X10~30mm(直 径X长）的块状，叶为洗净干燥后的叶片，且所述雷公藤根、茎、叶净饮片水分要求 <15wt% 〇
[0021] 所述醇和水的混合液优选为甲醇和水或者乙醇和水的混合液，且更优选为乙醇和 水的混合液；在醇和水的混合液中，醇和水按体积比1~9 :1混合，更优选醇和水按体积比 8 :1混合；
[0022] 对雷公藤根、茎和/或叶净饮片用醇和水的混合液进行浸泡提取，料液比即所述 饮片与醇和水的混合液的重量比，一般为1 :2~8 ;在浸泡提取中，在常温至醇和水的混合 液沸点温度范围内的温度下浸泡2~12小时提取，优选加热浸泡提取，且最优选微沸浸泡 提取；根据需要，可以重复浸泡提取1~3次；
[0023] 所述氯代烷烃溶剂为二氯乙烷、二氯甲烷或三氯甲烷，且优选为二氯乙烷或三氯 甲烷；
[0024] 所述碱可以为氢氧化钠或氢氧化钾，所述碱可以以固体或其水溶液的形式加入， 且优选以〇. 2N~40N氢氧化钠或氢氧化钾水溶液的形式加入，均匀混合后静置分层，所得 到的水层与氯代烷烃层的体积比为0. 8~1. 2 :1，同时水层中碱的浓度为0. 08N~1. 2N，且 优选为〇· 1N~0· 8N，最优选为0· 2N~0· 6N;
[0025] 在所述步骤1溶剂浸提和碱处理中还可以进一步包括对水层用所述氯代烷烃溶 剂进行反萃取，且将该氯代烷烃溶剂萃取液并入氯代烷烃层中。
[0026] 在雷公藤中部分雷公藤甲素以衍生物雷公藤氯内酯醇形式存在，这种衍生物可以 在适当的环境下转化：
[0027]
[0028] 从上面转化关系不难看出，用碱进行处理，一些杂质转入水层，而雷公藤甲素不受 影响，而且在碱性环境下，以雷公藤氯内酯醇形式存在的成分会转化成雷公藤甲素。可见， 这种转化关系为该发明的工艺合理性以及高收率性在理论上给以了证明。
[0029] 在所述步骤2去除弱极性物质中，可以更具体地按如下操作：
[0030] 将上述步骤1得到的氯代烷烃层液体减压浓缩至粘稠物，加入硅胶搅拌均匀，而 后减压干燥，得到粉末状粗品；用非极性溶剂溶出该粉末状粗品中的弱极性物质，未溶物中 加入甲醇、甲醇与水混合液或者丙酮，所得的溶出液浓缩至干，得到固体干燥物；
[0031] 向粘稠物中加入的硅胶一般为100~200目，硅胶与粘稠物的重量之比为0. 5~ 2 :1，且优选为1 :1。
[0032] 所述非极性溶剂为正己烷或环己烷，用正己烷或环己烷可以对粉末状粗品反复冲 洗至正己烷或环己烷洗出液颜色很淡几近无色；而后向未溶物中加入甲醇、甲醇与水混合 液或者丙酮，优选加入丙酮，该溶剂的加入量可以为每g粉末状粗品3~20ml，优选5~ 12ml〇
[0033] 在所述步骤3柱层析中：
[0034] 所述硅胶柱采用200~300目硅胶，并且采用湿法装柱；
[0035] 采用环己烷-乙酸乙酯混合液为流动相进行洗脱，且优选体积比为1. 5~1 :1的 环己烷-乙酸乙酯混合液，更优选体积比1 :1的环己烷-乙酸乙酯混合液；在柱层析过程 中，采用TLC跟踪，Kedd试剂显色，收集并合并具有单一雷公藤甲素斑点的接收液，减压浓 缩至小体积，置于冰箱冷藏，使析出晶体；析出后的晶体再用丙酮重结晶，过滤，减压干燥， 得到无色针状雷公藤甲素晶体。
[0036] 与现有技术相比，本发明的从雷公藤植物中分离提取雷公藤甲素的方法具有如下 优点：（1)在柱层析之前，对雷公藤植物的提取料液进行碱处理，使一些杂质成分结构遭到 破坏，从油溶性转为水溶性而进入水层，从而使氯代烷烃层杂质成分减少，减压浓缩后没有 出现黑色膏状物，在后续柱层析过程中，简化了操作，洗脱速度快，不粘滞，且无需梯度洗 脱；（2)萃取次数减少，溶剂用量大幅减少，从而操作环境变好，并节约成本；(3)无需进行 高成本的高效制备液相色谱法进行纯化；(4)雷公藤甲素的提取效率高，提取率可以达到 0.0062wt%，且纯度最高达99. 9% ; (5)由于该方法中均是化工领域的常规操作，便于大规 模生产。
【附图说明】
[0037] 图1和图2分别为雷公藤甲素的i-NMR和13C_NMR谱图。
【具体实施方式】
[0038] 下文，结合具体实施例来对本发明做进一步的说明，下面各实施例仅用于举例说 明本发明，而本发明的范围不局限于此。
[0039] 在下面实施例中采用高效液相色谱法（HPLC)检测雷公藤甲素的含量，色谱条件 如下：
[0040] 色谱柱：Chemcosorb50DS-H，25cm长X4. 6mmI.D.，5μm粒度
[0041] 柱温：25。。
[0042] 流动相：（25:12:63)乙腈：甲醇：6mM磷