一种金边胡颓子的组织培养方法
【专利摘要】本发明公开了一种金边胡颓子的组织培养方法，包括外植体的选择及消毒、接种培养和炼苗及移栽3个步骤，其中接种培养又包括初代培养、继代培养和生根培养，通过合适的营养液配方进行优化从而获得金边胡颓子的组织培养方法。本发明采用组织培养的方法，避免季节性的限制，加快金边胡颓子的繁殖速度，解决扦插成活率低的问题。
【专利说明】一种金边胡颓子的组织培养方法
[0001]
【技术领域】
[0002]本发明属于设计一种植物组织培养方法，具体为金边胡颓子的组织培养方法。
【背景技术】
[0003]金边胡颓子属于胡颓子科胡颓子属，常绿灌木，树冠圆形开展。叶椭圆形，革质有光泽，深绿色边缘有一圈金边。秋天开花，花乳白色，l-2cm,花期3 — 4月，果期10 — 11月。喜湿润和光照，也耐阴。常用扦插方法进行繁殖，在6月霉雨季进行，剪取当年生长半木质化枝条作插条，长10 - 15厘米，上部留3 - 4片叶，插后I个月生根。
【发明内容】
[0004]发明目的:针对上述现有存在的问题和不足，本发明的目的是提供了一种金边胡颓子的组织培养方法，该方法避免季节性的限制，加快金边胡颓子的繁殖速度，解决扦插成活率低的问题。
[0005]技术方案:为实现上述发明目的，本发明采用以下技术方案:一种金边胡颓子的组织培养方法，包括以下步骤:
步骤1:外植体的选择及消毒，选取成年金边胡颓子顶部剪取着生叶芽的一年生枝条，采下的枝条进行水插，置于生长室中，促使叶芽萌发为嫩梢，在嫩梢长2~4厘米时切下作外植体，或者在4~5月份在同株树上取相同长的当年嫩梢直接作外植体；采下枝条后，先用70%酒精泡30秒，接着在5%的次氯酸钙溶液中泡5分钟，无菌水冲洗3-4次，然后将其切成长5毫米的节段，作为初代外植体；
步骤2:接种培养
a、初代培养，将所备外植体接种在MS+ ΚΤ0.5mg / L+ZT1.0mg / L+NAA0.2mg / L+蔗糖30g/L +琼脂6g/L，PH为5.5~5.6的培养基上，在温度25±2°C室温下，光照强度25001ux左右的条件下，培养25-30天左右时，增殖芽长到2_3cm ；
b、继代培养，把切下丛生芽接种在MS+ BAl.5mg / L+ZTlmg / L+NAA0.3mg / L+蔗糖30g/L +琼脂6g/L，PH为5.5~5.6的培养基上，在温度25±2°C，，每日光照14小时，至28天左右，小芽基部形成愈伤组织，并形成丛生芽，丛生小芽达到l_2cm ；(一般第一次继代培养时增殖率2倍左右，经2~3次继代培养后增殖倍数可达到4倍左右)。
[0006]C、生根培养，当增殖芽长至2~3 cm时，将增殖芽的基部在I克/升的含IBA溶液中浸泡15分钟，转移到生根培养基上培养:生根培养基为大量元素减半的MS培养基，并且培养基中不含生长调节物质(植物激素及人工和成的激素类似物)，再加少量的活性碳，接种后将其黑暗条处理1 2天，温度控制在25~28°C ;暗处理后在光照强度为12001UX，每日光照14小时条件下培养；经25天，当可见白色短根形成，即可进行炼苗及移栽。
[0007]作为优选，步骤2中所述生根培养的生根培养基为I / 2MS+活性碳1.0g / L+蔗糖 20g / L。
[0008]作为优选，步骤所述炼苗及移栽的具体方法为:当试管苗长出根但尚未老化前，打开瓶盖放在阳光充足处让其锻炼I~2天，然后取出幼苗用温水将琼脂洗掉，移栽到消毒过的基质中。移栽时要注意不要伤根并使其处于伸展状态，浇透水后，用塑料薄膜覆盖，保持空气的相对湿度在90%以上，温度在25°C ±5°C，过一星期后逐步通气并浇灌适量的水。
[0009]有益效果:与现有技术相比，本发明具有以下优点:本发明通过采用组织培养的方法，避免季节性的限制，加快金边胡颓子的繁殖速度，解决扦插成活率低的问题。
【具体实施方式】
[0010]下面结合具体实施例，进一步阐明本发明，应理解这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围，在阅读了本发明之后，本领域技术人员对本发明的各种等价形式的修改均落于本申请所附权利要求所限定的范围。
[0011]实施例1
一.外植体的选择及消毒
选取成年金边胡颓子顶部剪取着生叶芽的一年生枝条，采下的枝条进行水插，置于生长室中生长，在嫩梢长4厘米时切下作外植体。采下枝条后，先用70%酒精泡30秒，接着在5 %的次氯酸钙溶液中泡5分钟，无菌水冲洗3次，然后将其切成长5毫米的节段，作为初代外植体。
[0012]二.接种培养
1.初代培养
将所备外植体接种在 MS + ΚΤ0.5mg / L+ZT1.0mg / L+NAA0.2mg / L+ 蔗糖 30g/L +琼脂6g/L，PH为5.5的培养基上，在温度25 ±2°C室温下，光照强度25001ux左右的条件下，培养30天左右时，芽长到2-3cm。
[0013]2.继代培养
把切下丛生芽接种在 MS + BAl.5mg / L+ZTlmg / L+NAA0.3mg / L+蔗糖 30g/L + 琼脂6g/L，PH为5.5的培养基上，在温度25±2°C，，每日光照14小时，至28天左右，小芽基部形成愈伤组织，并形成丛生芽，丛生小芽达到l_2cm。
[0014]3.生根培养
当增殖芽长至3 cm时，将增殖芽的基部在lg/L的含IBA溶液中浸泡15分钟，转移到生根培养基上培养:生根培养基为大量元素减半的MS培养基，并且培养基中不含生长调节物质(植物激素及人工和成的激素类似物)，再加少量的活性碳，生根配方为I / 2MS+活性碳l.0g / L+蔗糖20g / L，接种后将其黑暗条处理12天，温度控制在25~28°C。暗处理后在光照强度为12001UX，每日光照14小时条件下培养。20天左右可见白色短根形成，经25天后进行炼苗移栽。
三.炼苗及移栽
金边胡颓子组培苗炼苗，当试管苗长出根但尚未老化前，打开瓶盖放在阳光充足处让其锻炼2天，然后取出幼苗用温水将琼脂洗掉，移栽到消毒过的基质中。移栽时要注意不要伤根并使其处于伸展状态，浇透水后，用塑料薄膜覆盖，保持空气的相对湿度在90%以上，温度在25°C左右(±5°C )，过一星期后逐步通气并浇灌适量的水。[0015]实施例2
一.外植体的选择及消毒
在5月初在成年金边胡颓子顶部取当年嫩梢直接作外植体。采下枝条后，先用70%酒精泡30秒，接着在5%的次氯酸钙溶液中泡5分钟，无菌水冲洗4次，然后将其切成长5毫米的节段，作为初代外植体。
[0016]二.接种培养
1.初代培养
将所备外植体接种在 MS + ΚΤ0.5mg / L+ZT1.0mg / L+NAA0.2mg / L+ 蔗糖 30g/L +琼脂6g/L，PH为5.5的培养基上，在温度25 ±2°C室温下，光照强度25001ux左右的条件下，培养25天左右时，芽长到2-3cm。
[0017]2.继代培养
把切下丛生芽接种在 MS + BAl.5mg / L+ZTlmg / L+NAA0.3mg / L+蔗糖 30g/L + 琼脂6g/L，PH为5.5的培养基上，在温度25±2°C，，每日光照14小时，至28天左右，小芽基部形成愈伤组织，并形成丛生芽，丛生小芽达到l_2cm。
[0018]3.生根培养
当增殖芽长至2~3 cm时，将增殖芽的基部在lg/L的含IBA溶液中浸泡15分钟，转移到生根培养基上培养:生根培养基为大量元素减半的MS培养基，并且培养基中不含生长调节物质(植物激素及人工和成的激素类似物)，再加少量的活性碳，生根配方为I / 2MS+活性碳1.0g / L+蔗糖20g / L，接种后将其黑暗条处理12天，温度控制在25~28°C。暗处理后在光照强度为12001uX，每日光照14小时条件下培养。培养18天时可见白色短根形成，经23天后进行炼苗移栽。
三.炼苗及移栽
金边胡颓子组培苗炼苗，当试管苗长出根但尚未老化前，打开瓶盖放在阳光充足处让其锻炼2天，然后取出幼苗用温水将琼脂洗掉，移栽到消毒过的基质中。移栽时要注意不要伤根并使其处于伸展状态，浇透水后，用塑料薄膜覆盖，保持空气的相对湿度在90%以上，温度在25°C左右(± 5°C )，过一星期后逐步通气并浇灌适量的水。
【权利要求】
1.一种金边胡颓子的组织培养方法，包括以下步骤: 步骤1:外植体的选择及消毒，选取成年金边胡颓子顶部剪取着生叶芽的一年生枝条，采下的枝条进行水插，置于生长室中，促使叶芽萌发为嫩梢，在嫩梢长2~4厘米时切下作外植体，或者在4~5月份在同株树上取相同长的当年嫩梢直接作外植体；采下枝条后，先用70%酒精泡30秒，接着在5%的次氯酸钙溶液中泡5分钟，无菌水冲洗3-4次，然后将其切成长5毫米的节段，作为初代外植体； 步骤2:接种培养 a、初代培养，将所备外植体接种在MS+ ΚΤ0.5mg / L+ZT1.0mg / L+NAA0.2mg / L+蔗糖30g/L +琼脂6g/L，PH为5.5~5.6的培养基上，在温度25±2°C室温下，光照强度25001ux的条件下，培养25-30天时，增殖芽长到2_3cm ； b、继代培养，把切下丛生芽接种在MS+ BAl.5mg / L+ZTlmg / L+NAA0.3mg / L+蔗糖30g/L +琼脂6g/L，PH为5.5~5.6的培养基上，在温度25±2°C，，每日光照14小时 ，至28±2天，小芽基部形成愈伤组织，并形成丛生芽，丛生小芽达到l-2cm ； C、生根培养，当增殖芽长至2~3 cm时，将增殖芽的基部在I克/升的含IBA溶液中浸泡15分钟，转移到生根培养基上培养，接种后将其黑暗条处理12天，温度控制在25~28°C;暗处理后在光照强度为12001UX，每日光照14小时条件下培养；经25天，当可见白色短根形成，即进行炼苗及移栽。
2.根据权利要求1所述金边胡颓子的组织培养方法，其特征在于:步骤2中所述生根培养的生根培养基为I / 2MS+活性碳l.0g / L+蔗糖20g / L。
3.根据权利要求2所述金边胡颓子的组织培养方法，其特征在于:步骤所述炼苗及移栽的具体方法为:当试管苗长出根但尚未老化前，打开瓶盖放在阳光充足处让其锻炼I~2天，然后取出幼苗用温水将琼脂洗掉，移栽到消毒过的基质中；移栽时要注意不要伤根并使其处于伸展状态，浇透水后，用塑料薄膜覆盖，保持空气的相对湿度在90%以上，温度在250C ±5°C，过一星期后逐步通气并浇灌适量的水。
【文档编号】A01H4/00GK103733987SQ201310313011
【公开日】2014年4月23日 申请日期:2013年7月24日 优先权日:2013年7月24日
【发明者】史清云, 史云光, 朱艳, 王海珍, 张荣良, 蔡亚萍 申请人:江苏绿苑园林建设有限公司