一种带型蜈蚣藻无性繁殖育苗的方法
【专利摘要】本发明公开了一种带型蜈蚣藻无性繁殖育苗的方法，以盘状体作为外植体，组织捣碎机捣碎后接种于改良VSE培养液的附着基上，1LVSE培养液中添加0.5～2mg的IAA、0.1～0.5mg的ZT和10～15g的蔗糖，于温度18～20℃、光强1000～1500Lx、光照12h的条件下诱导再生盘状体形成；本方法不但可以成功的诱导新的盘状体，还可以有效的抑制丝状体的形成，盘状体的再生诱导率可以达到180%，大大增加了蜈蚣藻的繁殖系数；而本发明中储存盘状体的培养液以及培养基，可以长时间的保存盘状体，盘状体保存1年不会发生变质、死亡以及生长发育的状况，而保存的盘状体恢复到正常的培养条件中，1周即可恢复正常的生长发育状态。
【专利说明】一种带型蜈蚣藻无性繁殖育苗的方法【技术领域】
[0001]本发明涉及一种带型蜈蚣藻无性繁殖育苗的方法，属于植物组织培养【技术领域】。【背景技术】
[0002]带型蜈蚁藻iGrateloupia turuturu),隶属于红藻门(Rhodophyta)、真红藻纲(Florideae)、杉藻目(Gigartinales)、海膜科(Halymeniaceae Bory)> 蜈蚁藻属(.Grateloupia C.Agardh);带型蜈蚁藻含有丰富的卡拉胶,在食品工业作为增稠剂、稳定剂；在纺织工业作为上浆材料；由于卡拉胶寡糖在免疫领域也具有发展潜力，所以也是具有食疗价值的经济海藻；因此蜈蚣藻的原料需求量越来越大。但蜈蚣藻的来源非常有限，目前主要采集野生的资源，自然分布的空间少，数量不稳定，质量难保证，人工养殖的瓶颈是种苗来源缺乏稳定而充足的供应。
带型蜈蚣藻的有性繁殖育种周期比较长，不适用于大规模育种繁育。目前为止，丝状体用于蜈蚣藻种苗培育的优势比较明显，丝状体既可以作为种质保存的材料，又可以作为生产原料投入大规模的生产，如张泽宇(大连水产学院学报、2007年，第22卷第3期、164-169)成功的将蜈蚣藻切段诱导形成丝状体，丝状体可以形成幼苗并可在海上成活；但是，丝状体育苗具有产苗率低、难以长期保存的缺点，如何克服这些缺点仍是今后需要研究的课题。lima (Cultivationof Grateloupia acuminata (Halymeniaceae, Rhodophyta) byregeneration from cut fragments of basal crusts and upright thall1.J.AppLPhycol.7- 583 - 588)曾经进行过顶状蜈蚣藻盘状体再生的研究，将盘状体接种到玻璃、瓷器及尼龙绳等基质上之后，于海上放养3个月，盘状体便可长成20 cm左右的成熟藻体，大大缩短了育苗所需的时间；但是这种方法的盘状体诱导率很低(不足50%)，很多盘状体形成了丝状体，虽然丝状体还可以进一步形成盘状体，但无形中增加了育种时间和精力，难以得到大规模的推广。
【发明内容】
[0003]针对现有技术存在的缺陷，本发明所要解决的技术问题是提供一种带型蜈蚣藻无性繁殖育苗的方法，作为外植体的盘状体在特定培养基中定向形成盘状体而不是丝状体，既可以增加盘状体的诱导率，又可以减少育种时间。
[0004]为了解决上述技术问题，本发明的技术方案如下:
一种带型蜈蚣藻无性繁殖育苗的方法:包括如下步骤:
(I)种源盘状体诱导:以蜈蚣藻果孢子体或四分孢子体作为种藻，除去藻体表面的淤泥、杂藻、坏死组织及其他附着物；用3%次氯酸钠消毒藻体3~5min，然后用无菌过滤海水清洗干净，无菌条件下将种藻切成I~2m2的藻块，将藻块在黑暗条件下阴干15~30min ；阴干的藻块放于装有附着基的培养容器中，加入无菌过滤海水，于18~20°C全黑暗条件静置培养；静置培养24h后，将附着基取出放入装有VSE培养液的培养容器中，于温度18~20°C、光强1000~1500Lx、光照12h的条件下诱导盘状体，每2天换一次培养液至盘状体肉眼可见；
(2)种源盘状体培育:将步骤I中附有盘状体的附着基转移至新的培养容器中，向培养容器中倒入VSE培养液至淹没附着基，于温度22~25°C、光强2000~2500Lx、光照12h的条件下培育盘状体至直径为0.2-0.5mm ;每2天换一次培养基；
(3)再生盘状体诱导:将步骤2中获得的盘状体从附着基上剥离，无菌过滤海水冲洗干净后，用组织捣碎机切碎，将切碎的盘状体洒在铺有附着基的育苗容器中，添加改良VSE培养液后，于温度18~20°C、光强1000~1500LX、光照12h的条件下诱导再生盘状体形成，每2天换一次培养液至盘状体肉眼可见；
(4)直立枝培育:将步骤3中获得的盘状体一部分留作种质资源保存，一部分转移到过滤灭菌的海水中在温度22~24°C、光强2500~3000Lx、光照12h的条件下诱导直立枝发生，直立枝长度为5~8cm后转移到海上进行人工养殖。
[0005]进一步的，步骤3中所述的改良VSE培养液的配方为，IL VSE培养液中添加0.5~2mg的ΙΑΑ、0.I~0.5mg的ZT和10~15g的鹿糖。
[0006]进一步的，步骤4中所述的盘状体种质保存方法为，将附有盘状体的附着基置于装有改良储存培养液的器皿中，置于10°c、全黑暗条件下静置储存。
[0007]优选的，所述的改良储存培养液的配方为，等同体积的过滤海水和自来水混合均匀，将pH调为7.8-8.0。
[0008]本发明所述的改良VSE培养基，可以诱导带型蜈蚣藻的盘状体切段形成盘状体而不形成丝状体，不但提高了种源盘状体的利用率，还提高了再生盘状体的诱导率。
[0009]本发明所述的盘状体贮存方法，不但可以长时间的抑制盘状体的生长和分化，为蜈蚣藻的无性繁殖提供充足的种质来源，将长时间储存的盘状体放入海水中正常培养，I周即可以恢复正常的生长发育状态。
[0010]本发明的有益效果在于，盘状体切段再生的途径不但可以成功的诱导新的盘状体，还可以有效的抑制丝状体的形成；并且，一个种源盘状体可以被切成多个切段，而每个切段可以形成1-2个新的盘状体，新形成的盘状体具有种源盘状体相同的发育特性，可以成功的诱导直立枝形成，大大增加了蜈蚣藻的繁殖系数，盘状体的再生诱导率可以达到180%;而本发明中储存盘状体的培养液以及培养基，可以长时间的保存盘状体，盘状体保存I年不会发生变质、死亡以及生长发育的状况，而保存的盘状体恢复到正常的培养条件中，I周即可恢复正常的生长发育状态。
【具体实施方式】
[0011]以下通过实施例进一步阐述本发明的有益效果:
实施例1:
(I)种源盘状体诱导:以蜈蚣藻果孢子体或四分孢子体作为种藻，除去藻体表面的淤泥、杂藻、坏死组织及其他附着物；用3%次氯酸钠消毒藻体3~5min，然后用无菌过滤海水清洗干净，无菌条件下将种藻切成I~2m2的藻块，将藻块在黑暗条件下阴干15~30min ；阴干的藻块放于装有附·着基的培养容器中，加入无菌过滤海水，于18~20°C全黑暗条件静置培养；静置培养24h后，将附着基取出放入装有VSE培养液的培养容器中，于温度18~20°C、光强1000~1500Lx、光照12h的条件下诱导盘状体，每2天换一次培养液至盘状体肉眼可见；
(2)种源盘状体培育:将步骤I中附有盘状体的附着基转移至新的培养容器中，向培养容器中倒入VSE培养液至淹没附着基，于温度22~25°C、光强2000~2500Lx、光照12h的条件下培育盘状体至直径为0.2-0.5mm ;每2天换一次培养基；
(3)再生盘状体诱导:将步骤2中获得的盘状体从附着基上剥离，无菌过滤海水冲洗干净后，50个种源盘状体用组织捣碎机切碎，将切碎的盘状体洒在铺有附着基的育苗容器中，添加改良VSE培养液后，于温度18~20°C、光强1000~1500Lx、光照12h的条件下诱导再生盘状体形成，每2天换一次培养液至盘状体肉眼可见；所述的改良VSE培养液的配方为，IL VSE培养液中添加0.5mg的IAA、0.Img的ZT和IOg的蔗糖；
(4)直立枝培育:将步骤3中获得的盘状体一部分留作种质资源保存，一部分转移到过滤灭菌的海水中在温度22~24°C、光强2500~3000Lx、光照12h的条件下诱导直立枝发生，直立枝长度为5~8cm后转移到海上进行人工养殖；所述的盘状体种质保存方法为，将附有盘状体的附着基置于装有改良储存培养液的器皿中，置于10°C、全黑暗条件下静置储存，改良储存培养液的配方为，等同体积的过滤海水和自来水混合均匀，将PH调为
7.8—8.0 。
[0012]50个种源盘状体共形成40个新的盘状体，盘状体的诱导率为80%。
[0013]实施例2:
方法步骤与实施例1相同，但是步骤3中，改良VSE培养液的配方为IL VSE培养液中添加2mg的IAA、0.5mg的ZT和IOg的蔗糖，50个种源盘状体共形成45个新的盘状体，盘状体的诱导率为90%。
[0014]实施例3:
方法步骤与实施例1相同，但是步骤3中，改良VSE培养液的配方为IL VSE培养液中添加0.5mg的IAA、0.1mg的ZT和15g的蔗糖，50个种源盘状体共形成42个新的盘状体，盘状体的诱导率为84%。
[0015]实施例4:
方法步骤与实施例1相同，但是步骤3中，改良VSE培养液的配方为IL VSE培养液中添加2mg的IAA、0.5mg的ZT和15g的蔗糖，50个种源盘状体共形成50个新的盘状体，盘状体的诱导率为100%。
[0016]实施例5:
方法步骤与实施例1相同，但是步骤3中，改良VSE培养液的配方为IL VSE培养液中添加Img的IAA、0.3mg的ZT和IOg的蔗糖，50个种源盘状体共形成70个新的盘状体，盘状体的诱导率为140%。
[0017]实施例6:
方法步骤与实施例1相同，但是步骤3中，改良VSE培养液的配方为IL VSE培养液中添加Img的IAA、0.3mg的ZT和15g的鹿糖,50个种源盘状体共形成80个新的盘状体,盘状体的诱导率为160%。
[0018]实施例7:
方法步骤与实施例1相同，但是步骤3中，改良VSE培养液的配方为IL VSE培养液中添加Img的IAA、0.3mg的ZT和12g的蔗糖，50个种源盘状体共形成90个新的盘状体，盘状体的诱导率为180%。
[0019] 上述实例只是为说明本发明的技术构思以及技术特点，并不能以此限制本发明的保护范围。凡根据本发明的实质所做的等效变换或修饰，都应该涵盖在本发明的保护范围之内。
【权利要求】
1.一种带型蜈蚣藻无性繁殖育苗的方法，其特征在于，包括如下步骤: (1)种源盘状体诱导:以蜈蚣藻果孢子体或四分孢子体作为种藻，除去藻体表面的淤泥、杂藻、坏死组织及其他附着物；用3%次氯酸钠消毒藻体3~5min，然后用无菌过滤海水清洗干净，无菌条件下将种藻切成I~2m2的藻块，将藻块在黑暗条件下阴干15~30min ；阴干的藻块放于装有附着基的培养容器中，加入无菌过滤海水，于18~20°C全黑暗条件静置培养；静置培养24h后，将附着基取出放入装有VSE培养液的培养容器中，于温度18~20°C、光强1000~1500Lx、光照12h的条件下诱导盘状体，每2天换一次培养液至盘状体肉眼可见； (2)种源盘状体培育:将步骤I中附有盘状体的附着基转移至新的培养容器中，向培养容器中倒入VSE培养液至淹没附着基，于温度22~25°C、光强2000~2500Lx、光照12h的条件下培育盘状体至直径为0.2-0.5mm ;每2天换一次培养基； (3)再生盘状体诱导:将步骤2中获得的盘状体从附着基上剥离，无菌过滤海水冲洗干净后，用组织捣碎机切碎，将切碎的盘状体洒在铺有附着基的育苗容器中，添加改良VSE培养液后，于温度18~20°C、光强1000~1500LX、光照12h的条件下诱导再生盘状体形成，每2天换一次培养液至盘状体肉眼可见； (4)直立枝培育:将步骤3中获得的盘状体一部分留作种质资源保存，一部分转移到过滤灭菌的海水中在温度22~24°C、光强2500~3000Lx、光照12h的条件下诱导直立枝发生，直立枝长度为5~8cm后转移到海上进行人工养殖。
2.根据权利要求1所述的带型蜈蚣藻无性繁殖育苗的方法，其特征在于，步骤3中所述的改良VSE培养液的配方为，IL VSE培养液中添加0.5~2mg的ΙΑΑ、0.1~0.5mg的ZT和10~15g的鹿糖。
3.根据权利要求1所述的带型蜈蚣藻无性繁殖育苗的方法，其特征在于，步骤4中所述的盘状体种质保存方法为，将附有盘状体的附着基置于装有改良储存培养液的器皿中，置于10°C、全黑暗条件下静置储存。
4.根据权利要求1或权利要求3所述的带型蜈蚣藻无性繁殖育苗的方法，所述的改良储存培养液的配方为，等同体积的过滤海水和自来水混合均匀，将PH调为7.8-8.0。
【文档编号】A01H4/00GK103651116SQ201310554332
【公开日】2014年3月26日 申请日期:2013年11月11日 优先权日:2013年11月11日
【发明者】张明 申请人:青岛佰众化工技术有限公司