荔枝花粉收集保存方法
【专利摘要】本发明公开了荔枝花粉的收集保存方法，属于果树授粉【技术领域】。其采集保存方法步骤是：1、采集发育阶段成熟未开裂的荔枝花药，将采集到的花药装入玻璃培养皿中；2、将上述装有花药的玻璃培养皿放入干燥箱中，利用干燥箱进行对玻璃培养皿内的花药进行干燥处理；3、将干燥结束的花药和散出来的花粉倒入不锈钢筛，过筛后装入离心管；4、将上述装入离心管的花粉密封，放入-86℃以下超低温冰箱保存。本发明方法简便易行，不同天气条件下均可进行收集，获得的花粉发芽率高，保存时间最长。
【专利说明】荔枝花粉收集保存方法
【技术领域】
[0001]本发明属于果树授粉【技术领域】，更具体涉及一种荔枝花粉的收集保存方法。
【背景技术】
[0002]荔枝是广东、广西、海南和福建等四省区最重要的水果。目前荔枝产业存在品种结构不合理和成熟期非常集中二大难题，而品种创新是解决这二大难题不可缺的一个重要环节。一直以来，主要通过实生选种实现荔枝品种的创新。由于长期采取嫁接、圈枝的无性繁殖方法，单一品种的种植，以及因土地征收导致的许多种质资源的丢失，产区荔枝的遗传多样性不断丧失，通过实生选种实现荔枝品种的创新难以为继。人工杂交育种将是荔枝品种创新的主要途径，花粉的收集保存是荔枝人工杂交育种实现种质创新的重要环节。
[0003]目前关于荔枝花粉的收集保存没有成熟的技术。前人研究的荔枝花粉收集保存方法，仅适用于花粉即采即用和花期相遇的品种之间授粉，以及早熟品种的花粉授晚熟品种，最长在_30°C冰箱内贮藏150天，只能满足当年授粉需要，不能解决第二年授粉的问题。并且，前人的干燥方法多采用太阳光自然晾晒，这种方法受限于天气状况，而且干燥效果不稳定。
【发明内容】
[0004]本发明的目的在于提供一种荔枝花粉的收集、干燥、保存方法，贮存一年发芽率不变可用于第二年的人工授粉，解决因自然环境不良等原因造成的荔枝品种授粉受精困难问题，满足授粉的需要，特别是早熟品种的人工授粉，同时对荔枝种质创新具有重要的应用价值。
[0005]经长期的调研发现，荔枝雄花发育可分为三个阶段，第一阶段，花药刚伸出雄花花托，花丝不明显；第二阶段，花丝伸长一半`；第三阶段，花丝伸长充分但花药没有开裂。在雄花发育第一阶段提取花药并干燥，没有发现成熟的花粉；雄花发育第二阶段和第三阶段提取花药并干燥，大量成熟的花粉存在。因此，成熟花药定义为雄花发育第二阶段至第三阶段的花药。为此，本荔枝花粉(花药)采摘的标准是:采摘成熟未开裂的花药，即该花药指雄花发育第二阶段至第三阶段的花药，即花丝伸长一半或充分伸长但花药没有开裂的。
[0006]采回来的花药，如在阴雨天气摘采时，可将花药先放置在吸水纸上，利用吸水纸将花药表面上的水吸干，再将花药装在玻璃培养皿内，装入的花药量以均匀铺开以能均匀干燥为准，优选为均匀铺开两层内的花药厚度。花药装好后将其放入干燥箱内，而花药的干燥是花粉收集保存的重要环节。经研究发现荔枝花药干燥的第I个小时，水分挥发最快，达到每小时水分相对挥发量42.65% ;干燥的第2个小时，每小时水分相对挥发量20.10% ;从第3个小时开始，水分挥发很少。同时，干燥过程中花药的开裂节奏较水分的挥发节奏慢，干燥的第I小时出粉率只有10%，第2小时出粉率62%，第3小时出粉率85%，第4小时出粉率达到93%。因此荔枝花药干燥过程可分成二个阶段，最初的2小时是水分挥发阶段，第2-3小时是花药开裂阶段。干燥温度45°C~50°C，会导致荔枝花粉发芽率明显下降，花药出粉率也低于70% ;干燥温度30°C~35°C，不会导致花粉发芽率下降，但干燥时间影响花药出粉率。因此本发明综合提出了荔枝花药干燥的适宜技术指标，这种干燥技术不受天气条件影响，任何天气条件下均可采集荔枝花粉。这技术就是利用干燥箱进行对玻璃培养皿中的花药进行干燥处理，处理时分为花药水分挥发阶段和花药开裂阶段，其水分挥发阶段在40°C下进行，花药开裂阶段在30°C~35°C下进行。
[0007]具体的干燥箱进行对 玻璃培养皿中的花药进行干燥处理操作是:首先用40°C温度去除花药水分的50-60% ;然后下调温度至35°C去除花药的大部分水分；最后将温度再次下调至27°C~28°C，将花药干燥至开裂阶段即可。其干燥时间，可视采摘回来的花药干燥程度而定，当晴好天气时，首先设定温度40°C干燥2小时，然后设定温度35°C，干燥I小时，最后设定温度27°C~28°C，干燥I~2小时；当阴雨天时，首先设定温度40°C干燥2小时，然后设定温度35°C，干燥2小时，最后设定温度27°C~28°C，干燥4~6小时。
[0008]将花药干燥后，利用150目不锈钢筛筛选出花粉，倒入2ml容量的离心管，密封后放置_86°C以下超低温冰箱保存即可完成保存。
[0009]关于贮藏温度，其它植物的花粉有报道在液氮中贮藏效果较好，但贮存液氮中存在贮存前预冷及使用前解冻的问题，在这些过程中对荔枝花粉发芽率影响较大，本发明采用-86°C以下超低温冰箱贮存避免了以上的问题，取得了良好的保存效果。
[0010]经上述调研发现得出，本发明的目的可以通过如下技术方案达到:
[0011]荔枝花粉的收集保存方法，其采集保存方法步骤是:
[0012]1、采集发育阶段成熟未开裂的荔枝花药，将采集到的花药装入玻璃培养皿中；
[0013]2、将上述装有花药的玻璃培养皿放入干燥箱中，利用干燥箱进行对玻璃培养皿内的花药进行干燥处理；
[0014]3、将干燥结束的花药和散出来的花粉倒入不锈钢筛，过筛后装入离心管；
[0015]4、将上述装入离心管的花粉密封，放入_86°C以下超低温冰箱保存。
[0016]本发明的目的还可以通过如下技术方案达到:
[0017]本发明的一种实施方案是:所述的花药采摘的标准:采摘成熟未开裂的花药，该花药指雄花发育第二阶段至第三阶段的花药，即花丝伸长一半或充分伸长但花药没有开裂的。
[0018]本发明的一种实施方案是:所述的花药装在玻璃培养皿的厚度以花药2层以内为且。
[0019]本发明的一种实施方案是:晴好天气时，利用干燥箱进行对玻璃培养皿中的花药进行干燥处理时，首先设定温度39-41°C干燥1.5-2.5小时，然后设定温度34-36°C，干燥
0.5-1.5小时，最后设定温度27°C~28°C，干燥I~2小时。
[0020]本发明的一种实施方案是:利用干燥箱进行对玻璃培养皿中的花药进行干燥处理时，首先设定温度40°C干燥2小时，然后设定温度35°C，干燥I小时，最后设定温度27°C，干燥1.5小时。
[0021]本发明的一种实施方案是:阴雨天气时，所述采摘回的花药先放置在吸水纸上吸水，然后再及时干燥，利用干燥箱进行对玻璃培养皿中的花药进行干燥处理时，首先设定温度39-41°C干燥1.5-2.5小时，然后设定温度34-36°C，干燥0.5-1.5小时，最后设定温度27°C~28°C，干燥4~6小时。[0022]本发明的一种实施方案是:利用干燥箱进行对玻璃培养皿中的花药进行干燥处理时，首先设定温度40°C干燥2小时，然后设定温度35°C，干燥2小时，最后设定温度27°C，干燥5小时。
[0023]本发明的一种实施方案是:所述的不锈钢筛为150目钢筛。
[0024]本发明的一种实施方案是:所述的离心管为2ml容量的离心管。
[0025]本发明的有益效果
[0026]1、本发明通过试验得出荔枝花药采集的最佳发育阶段，比以前的收集方法更高效，获得的花粉发芽率更高，保存时间最长，可以第二年使用。
[0027]2、本方法收集的荔枝花粉采用离心管低温贮藏，可保存一年发芽率不变，保存的时间长，不仅满足当年授粉需求而且可实现第二年人工授粉，特别是解决了荔枝早熟品种的授粉问题，提高经济效益。
[0028]3、本发明根据不同气候采摘回来不同的花粉，利用平铺在玻璃培养皿内，使用不同的干燥时间，提高干燥花药的干燥度和保存时间。
[0029]4、本发明为荔枝杂交育种研究，新组合的创制提供了可能，对荔枝新品种的选育具有重要应用价值。如早熟品种授晚熟品种的花粉实现自然杂交不可能出现的组合；可以进行荔枝和龙眼或者红毛丹的远缘杂交；花期不遇的荔枝亲本间杂交；本发明的应用可以极大的丰富荔枝杂交育种的组合范围，丰富荔枝资源的遗传多样性。
[0030]5、本方法简便易行，不同天气条件下均可进行收集，可实现荔枝花粉的大量收集贮藏。
【具体实施方式】
[0031]本发明下面将结合实施例作进一步详述
[0032]实施例1:晴天的收集保存方法
[0033](I)花药的采集
[0034]花药采摘的标准:只采摘成熟未开裂的花药，就是雄花发育第二阶段至第三阶段的花药，即花丝伸长一半或充分伸长但花药没有开裂的。采摘过程中手或者镊子的使用要轻巧，尽量减少对花药的机械伤。
[0035](2)花药的干燥
[0036]将采摘的花药装入玻璃培养皿中放入干燥箱，首先，设定温度40°C干燥2小时，然后设定温度35°C，干燥I小时，最后设定温度27°C~28°C，干燥I~2小时。花药装在玻璃培养皿的厚度以2层以内为宜。
[0037](3)花粉的保存
[0038]把干燥结束的花药和散出来的花粉从玻璃培养皿倒进150目不锈钢筛，不锈钢筛放置在相应的玻璃培养皿上面，承接过筛的花粉。把过筛后的花粉从玻璃培养皿倒在硫酸纸上，然后把硫酸纸卷成漏斗状，把花粉倒进2ml容量的离心管。再把装有花粉的离心管放入离心管盒，然后将离心管盒放进_86°C超低温冰箱保存。
[0039]实施例2:阴雨天的收集保存方法
[0040](I)花药的采集
[0041]花药采摘的标准:只采摘成熟未开裂的花药，就是雄花发育第二阶段至第三阶段的花药，即花丝伸长一半或充分伸长但花药没有开裂的。
[0042]阴雨天采摘花药，需要提前摇花，尽量抖落花穗的水滴。采摘过程中手或者镊子的使用要轻巧，尽量减少对花药的机械伤。采摘回的花药先倒在吸水纸上面吸水，利用吸水纸将花药表面的水吸掉，然后再放置干燥箱及时干燥。
[0043](2)花药的干燥
[0044]将采摘的花药装入玻璃培养皿中放入干燥箱，首先，设定温度40°C干燥2小时，然后设定温度35°C，干燥2小时，最后设定温度27°C~28°C干燥4~6小时。花药装在玻璃培养皿的厚度以2层以内为宜。
[0045](3)花粉的保存[0046]把干燥结束的花药和散出来的花粉从玻璃培养皿倒进150目不锈钢筛，不锈钢筛放置在相应的玻璃培养皿上面，承接过筛的花粉。把过筛后的花粉从玻璃培养皿倒在硫酸纸上，然后把硫酸纸卷成漏斗状，把花粉倒进2ml容量的离心管，把装有花粉的离心管放入离心管盒，然后将离心管盒放进_86°C超低温冰箱保存。
【权利要求】
1.荔枝花粉的收集保存方法，其特征在于:其采集保存方法步骤是: ①采集发育阶段成熟未开裂的荔枝花药，将采集到的花药装入玻璃培养皿中； ②将上述装有花药的玻璃培养皿放入干燥箱中，利用干燥箱进行对玻璃培养皿内的花药进行干燥处理； ③将干燥结束的花药和散出来的花粉倒入不锈钢筛，过筛后装入离心管； ④将上述装入离心管的花粉密封，放入-86°C以下超低温冰箱保存。
2.根据权利要求1所述的荔枝花粉收集保存方法，其特征在于:所述的花药采摘的标准:采摘成熟未开裂的花药，该花药指雄花发育第二阶段至第三阶段的花药，即花丝伸长一半或充分伸长但花药没有开裂的。
3.根据权利要求1所述的荔枝花粉收集保存方法，其特征在于:所述的花药装在玻璃培养皿的厚度以花药2层以内为宜。
4.根据权利要求1所述的荔枝花粉收集保存方法，其特征在于:晴好天气时，利用干燥箱进行对玻璃培养皿中的花药进行干燥处理时，首先设定温度39-41°C干燥1.5-2.5小时，然后设定温度34-36°C，干燥0.5-1.5小时，最后设定温度27°C~28°C，干燥I~2小时。
5.根据权利要求4所述的荔枝花粉收集保存方法，其特征在于:利用干燥箱进行对玻璃培养皿中的花药进行干燥处理时，首先设定温度40°C干燥2小时，然后设定温度35°C，干燥I小时，最后设定温度27°C，干燥1.5小时。
6.根据权利要求1所述的荔枝花粉收集保存方法，其特征在于:阴雨天气时，所述采摘回的花药先放置在吸 水纸上吸水，然后再及时干燥，利用干燥箱进行对玻璃培养皿中的花药进行干燥处理时，首先设定温度39-41 °C干燥1.5-2.5小时，然后设定温度34_36°C，干燥0.5-1.5小时，最后设定温度27°C~28°C，干燥4~6小时。
7.根据权利要求6所述的荔枝花粉收集保存方法，其特征在于:利用干燥箱进行对玻璃培养皿中的花药进行干燥处理时，首先设定温度40°C干燥2小时，然后设定温度35°C，干燥2小时，最后设定温度27°C，干燥5小时。
8.根据权利要求1所述的荔枝花粉收集保存方法，其特征在于:所述的不锈钢筛为150目钢筛。
9.根据权利要求1所述的荔枝花粉收集保存方法，其特征在于:所述的离心管为2ml容量的离心管。
【文档编号】A01H1/02GK103719076SQ201310729121
【公开日】2014年4月16日 申请日期:2013年12月25日 优先权日:2013年12月25日
【发明者】欧良喜, 王丽敏, 陈洁珍, 蔡长河, 付丹文, 张春阳, 王晓容 申请人:广东省农业科学院果树研究所